張焱珍，周會(huì)明，柴紅梅*，王芳，宋學(xué)俊，李萬宏，楊坤，皮子聰

（1.臨滄師范高等?？茖W(xué)校，云南臨滄677000；2.云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)與種質(zhì)資源研究所，云南昆明650223；3.云南尚坤生物科技有限公司，云南昆明650000）

黃雞樅子實(shí)體多糖提取工藝優(yōu)化研究

張焱珍1，2，周會(huì)明1，2，柴紅梅2*，王芳2，宋學(xué)俊3，李萬宏3，楊坤1，皮子聰1

（1.臨滄師范高等?？茖W(xué)校，云南臨滄677000；2.云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)與種質(zhì)資源研究所，云南昆明650223；3.云南尚坤生物科技有限公司，云南昆明650000）

以多糖得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用水提醇沉法對(duì)黃雞樅多糖的提取工藝條件進(jìn)行優(yōu)化，選用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)法，考察料液比、提取溫度、浸提時(shí)間3個(gè)因素對(duì)該菌多糖得率的影響。結(jié)果表明，影響黃雞樅水溶性多糖提取率的主要因素依次為料液比>提取溫度>浸提時(shí)間，通過正交試驗(yàn)確定該菌多糖的最佳提取條件為料液比1∶30，浸提溫度60℃，浸提時(shí)間2 h，在此條件下，其多糖得率可達(dá)4.7%，為改善黃雞樅多糖的提取方法提供了試驗(yàn)基礎(chǔ)。

黃雞樅；多糖；提??；正交試驗(yàn)

目前，真菌多糖因其具有廣泛的生物學(xué)活性如免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、降血壓等已成為一個(gè)非?；钴S的研究領(lǐng)域，日益被眾多科研工作者所青睞[1-2]。

黃雞樅（Termitomyces aurantiacus）又名黃白蟻傘，隸屬于擔(dān)子菌門、層菌綱、傘菌目、白蘑科、雞樅屬[3]，該屬真菌起源于非洲[4]，一般與白蟻共生[5-6]，在地理上存在物種的多樣性[7]以及遷徙演化現(xiàn)象[8]。該菌子實(shí)體營養(yǎng)全面，多糖含量豐富[9]，具有醒腦、降血脂、抗氧化等多種生理功能[10-12]。

本試驗(yàn)以云南臨滄本地的野生黃雞樅為材料，采用水提醇沉法[11]對(duì)黃雞樅多糖的提取工藝條件進(jìn)行優(yōu)化，選用單因素試驗(yàn)和L9（33）正交試驗(yàn)法考察料液比、提取溫度、浸提時(shí)間3個(gè)因素對(duì)該菌多糖得率的影響，試圖找出該菌多糖提取的的最佳條件，為改善黃雞樅多糖的提取方法提供了試驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 材料與試劑

黃雞樅子實(shí)體購買于臨滄市野生菌批發(fā)市場(chǎng)。體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇（食品級(jí)）：廣州穗欣化工有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

FS100S-1手提式小型粉碎機(jī)：廣州雷邁機(jī)械設(shè)備有限公司；HH.S21-Ni6恒溫水浴鍋：北京三二八科學(xué)儀器有限公司；JA5003電子天平：上海方瑞儀器有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 子實(shí)體預(yù)處理

取新鮮子實(shí)體，清洗，置于35℃烘干至質(zhì)量恒定，粉碎成能過0.175～0.246mm篩的顆粒，備用。

1.3.2 多糖的提取

多糖提取采用水提醇沉法[11]。稱取1g黃雞樅干粉，以一定的比例加入蒸餾水。熱水浴浸提一段時(shí)間后，抽濾收集濾液。沉淀多糖，向?yàn)V液中加入4倍體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇，4℃靜置過夜，收集沉淀即為黃雞樅粗多糖，烘干稱質(zhì)量，計(jì)算多糖得率。

1.3.3 料液比對(duì)多糖得率的影響

在提取溫度60℃、提取時(shí)間2h，料液比分別為1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60的條件下提取多糖，每處理3次重復(fù)。

1.3.4 浸提時(shí)間對(duì)多糖得率的影響

在提取溫度60℃、料液比1∶30，提取時(shí)間分別為0.5h、1.0h、1.5h、2.0h、2.5h的條件下提取多糖，每處理3次重復(fù)。

1.3.5 提取溫度對(duì)多糖得率的影響

在料液比1∶30、提取時(shí)間1.5h，溫度分別為20℃、40℃、60℃、80℃、100℃的條件下提取多糖，每處理3次重復(fù)。

1.3.6 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)上述單因素試驗(yàn)結(jié)果，確定正交試驗(yàn)的參數(shù)范圍，對(duì)料液比、提取溫度、提取時(shí)間進(jìn)行L9（34）的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)[13-14]。根據(jù)設(shè)計(jì)進(jìn)行試驗(yàn)，并對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行極差和方差分析，確定最佳提取參數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn)

2.1.1 料液比對(duì)多糖得率的影響

由表1可知，在提取溫度60℃、提取時(shí)間2h的條件下，不同的料液比對(duì)黃雞樅多糖得率影響較大，料液比為1∶30時(shí)多糖得率最高，可達(dá)3.7%。隨著提取液體積增大，所需乙醇量增加，在處理過程中導(dǎo)致多糖損失增大，得率反而減少，故黃雞樅多糖提取時(shí)料液比以1∶30為宜。

表1 料液比對(duì)多糖得率的影響Table 1 Effect of solid liquid ratio on polysaccharide yield

2.1.2 浸提時(shí)間對(duì)多糖得率的影響

由表2可知，在提取溫度60℃、料液比1∶10的條件下，浸提時(shí)間對(duì)多糖得率影響不大，提取1.5h多糖得率最高，達(dá)到4.0%。隨著提取時(shí)間延長，多糖得率變化不大。

表2 浸提時(shí)間對(duì)多糖得率的影響Table 2 Effect of extraction time on polysaccharide yield

2.1.3 提取溫度對(duì)多糖得率的影響

由表3可知，在提取料液比1∶30、提取時(shí)間1.5h的條件下，提取溫度對(duì)多糖得率影響很大，在一定范圍內(nèi)，隨著溫度升高，多糖得率增大，80℃時(shí)得率最高，達(dá)4.2%。但溫度高于80℃后，多糖得率反而下降，故提取溫度以80℃左右為宜。

表3 提取溫度對(duì)多糖得率的影響Table 3 Effect of extraction temperature on polysaccharide yield

2.2 提取工藝優(yōu)化正交試驗(yàn)

在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用L9（33）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，確定黃雞樅子實(shí)體最佳多糖提取工藝，正交試驗(yàn)因素與水平見表4，試驗(yàn)結(jié)果及極差分析見表5，方差分析結(jié)果見表6。

表4 多糖提取工藝優(yōu)化正交試驗(yàn)因素與水平Table 4 Factors and levels of orthogonal test for polysaccharide extraction process optimization

表5 正交試驗(yàn)結(jié)果及極差分析Table 5 Results and range analysis of orthogonal experiment

正交試驗(yàn)極差分析法結(jié)果表明（表5），各列極差大小順序?yàn)镽2>R1>R3，即試驗(yàn)因素的主次順序?yàn)锽>A>C；最優(yōu)水平依次為：A1、B2、C3；各因素的最佳組合為A1B2C3；即提取溫度為60℃、料液比為1∶30、浸提時(shí)間2.0h。F檢測(cè)結(jié)果表明，3個(gè)因素的多糖得率都不顯著，不必進(jìn)行各因素水平間的多重比較（表6）。此時(shí)，可從表5中選擇平均數(shù)大的水平A1、B2、C3組合成最優(yōu)水平組合A1B2C3。所得到的最優(yōu)水平組合A1B2C3與極差分析法結(jié)果相同，但與正交試驗(yàn)得出的最佳組合A1B2C2不同。因此對(duì)兩組合進(jìn)行了驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果前者多糖得率為4.7%，高于表5中的最高分，為該菌多糖的最佳提取工藝條件。

表6 正交試驗(yàn)結(jié)果方差分析Table 6 Variance analysis of orthogonal experiment result

3 結(jié)論

隨著人們生活水平的提高以及生活節(jié)奏的加快，亞健康疾病日益普遍。真菌中含有較多的醫(yī)療功效活性物質(zhì)，尤其是真菌多糖，其提取成為研究多糖最基礎(chǔ)的工作[15]。影響多糖提取效果的因素很多，主要有提取溫度、浸提時(shí)間、料水比、加醇量、提取pH值等[16]。不同類型的真菌多糖提取工藝較相似，但是其具體的提取條件有所差異，需要通過試驗(yàn)加以確定。本研究用水提醇沉法從黃雞樅子實(shí)體中提取多糖，并對(duì)多糖的提取工藝進(jìn)行了研究，通過正交試驗(yàn)得出最優(yōu)提取工藝條件，即料液比1∶30、提取溫度60℃、浸提時(shí)間2h。采用此工藝條件，多糖提取率可達(dá)4.7%。本研究為黃雞樅多糖的進(jìn)一步開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

[1]F?RLAND D T,JOHNSON E,TRYGGESTAD A M A,et al.An extract based on the medicinal mushroomAgaricus blazeiMurill stimulates monocyte-derived dendritic cells to cytokine and chemokine production in vitro[J].Cytokine,2010,49(3):245-250.

[2]馮寧，吳海嬰，陳光明，等.高血脂癥小鼠模型腹腔注射雞樅多糖的研究[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2009，6（11）：862-863.

[3]KIRK P M,CANNON P F,MINTER D W,et al.Ainsworth&Bisby's dictionary of the fungi[M].USA:Oxford University Press,2001.

[4]NOBRE T,KONé N A,KONATé S,et al.Dating the fungus-growing termites'mutualism shows a mixture between ancient codiversification and recent symbiont dispersal across divergent hosts[J].Mol Ecol,2011, 20(12):2619-2627.

[5]AANEN D K,ROS V I,DE FINE LICHT H H,et al.Patterns of interaction specificity of fungus-growing termites andTermitomyces symbionts in South Africa[J].BMC Evol Biol,2007,7(1):115.

[6]AANEN D K,HENRIK H,DEBETS A J M,et al.High symbiont relatedness stabilizes mutualistic cooperation in fungus-growing termites[J]. Science,2009,326(5956):1103-1106.

[7]AANEN D K,EGGLETON P,ROULAND-LEFèVRE C,et al.The evolution of fungus-growing termites and their mutualistic fungal symbionts [J].P Natl Acad Sci Usa,2002,99(23):14887-14892.

[8]WEI T Z,TANG B H,YAO Y J.Revision of termitomyces in China[J]. Mycotaxon,2009,108(1):257-285.

[9]譚曉虹，方秀梅.云南產(chǎn)雞樅菌多糖含量測(cè)定[J].張家口醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，21（1）：2-3.

[10]張靈芝.雞樅菌子實(shí)體多糖分離純化與結(jié)構(gòu)分析及抗腫瘤活性研究[D].廣州：華南理工大學(xué)碩士論文，2012.

[11]王思蘆，汪開毓，彭艷伶.野生雞樅菌多糖的提取及其免疫活性分析[J].中國獸醫(yī)科學(xué)，2011，41（12）：1276-1281.

[12]周繼平，許泓瑜.雞樅菌粉不同組分的體外抗氧化活性研究[J].中國野生植物資源，2008，27（5）：46-49.

[13]張焱珍，周會(huì)明，魏生龍.荷葉離褶傘發(fā)酵液制作保健飲料的工藝研究[J].中國釀造，2013，32（10）：135-137.

[14]明道緒.田間試驗(yàn)與統(tǒng)計(jì)分析[M].北京：科學(xué)出版社，2005：253-254.

[15]王濤，趙謀明.多糖的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代食品科技，2007，23（1）：103-106.

[16]陳欣，龔蘭，劉冠卉.食用真菌多糖提取條件的優(yōu)化及其還原力的比較[J].食品科學(xué)，2010，31（14）：140-144.

Extraction technology optimization of polysaccharides from sporocarp of Termitomyces aurantiacus

ZHANG Yanzhen1,2,ZHOU Huiming1,2,CHAI Hongmei2*,WANG Fang2,SONG Xuejun3,LI Wanhong3,YANG Kun1,PI Zicong1
(1.Lincang Teachers'College,Lincang 677000,China;2.Institute of Biotechnology&Germplasmic Resource,Yunnan Agricultural Academy,Kunming 650223,China;3.Yunnan Shangkun Biotechnology Co.,Ltd.,Kunming 650000,China)

The extraction technique condition ofTermitomyces aurantiacuspolysaccharides was optimized by water extraction and alcohol precipitation with the content of polysaccharides as the evaluation index.Single-factor experiment and orthogonal experiment were selected to investigate the effect of water sample ratio,extraction temperature and extraction time on polysaccharides content.The results showed that the effects of different factors in order were solid liquid ratio,extraction temperature,and extraction time.The optimal extraction conditions were obtained as follows:solid liquid ratio 1∶30,extraction temperature 60℃and extraction time 2 h.Under the optimal condition,the yield of polysaccharide was up to 4.7%,made a foundation for optimizing the extraction methods of polysaccharides fromT.aurantiacus.

Termitomyces aurantiacus;polysaccharides;extraction;orthogonal test

S646.1

A

0254-5071（2014）03-0097-03

10.3969/j.issn.0254-5071.2014.03.023

2013-12-23

臨滄師范高等專科學(xué)校校級(jí)項(xiàng)目（LCSZL2013002）；國家食用菌產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目（CARS-24）

張焱珍（1986-）女，助教，碩士，研究方向?yàn)槭秤镁a(chǎn)品開發(fā)。

*通訊作者：柴紅梅（1974-），女，副研究員，碩士，研究方向食用菌資源與利用。