寧軍號，胡盼，宋堅(jiān)，常亞青，張偉杰，龐云龍，楊力猛

(大連海洋大學(xué)農(nóng)業(yè)部北方海水增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，遼寧大連116023)

偏頂蛤 Modiolus modiolus(Linnaéus，1758)隸屬于軟體動物門、瓣鰓綱、貽貝目、殼菜蛤科、偏頂蛤?qū)伲追Q毛海紅、假海紅。其主要分布于北半球，在中國主要分布于黃、渤海，從潮間帶下區(qū)到水深50 m的淺海均有分布。偏頂蛤個體大、肉質(zhì)鮮美、營養(yǎng)豐富，是一種重要的經(jīng)濟(jì)貝類［1］。中國貽貝主要養(yǎng)殖種類有紫貽貝Mytilus galloprovincialis、翡翠貽貝 Perna viridis和厚殼貽貝 Mytilus coruscus，且已形成體系，并能夠通過人工增養(yǎng)殖滿足部分市場需求。偏頂蛤的市場供應(yīng)主要通過捕撈，其人工繁育及養(yǎng)殖方面的基礎(chǔ)理論與實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)還很匱乏。加之近年來海域污染［2］、酷漁濫捕和種質(zhì)退化日趨嚴(yán)重，偏頂蛤的自然資源日漸枯竭。因此，偏頂蛤的繁殖生物學(xué)和人工育苗等基礎(chǔ)理論亟須完善。

國內(nèi)外已有很多學(xué)者報道過生態(tài)因子 (鹽度、溫度、pH、餌料等)與貝類幼蟲生長發(fā)育的關(guān)系［3-11］。Pettersen 等［3］研究了不同單胞藻餌料對紫貽貝幼蟲存活、生長、分布和脂肪酸組成的影響，發(fā)現(xiàn)金藻Isochrysis sp．營養(yǎng)豐富，基本上能夠滿足貝類浮游幼蟲生長發(fā)育的需求。Yan等［4］也發(fā)現(xiàn)，金藻對菲律賓蛤仔浮游幼蟲的飼喂效果很好。葉瑩瑩等［5］討論了幾種環(huán)境因子對厚殼貽貝浮游幼蟲生長和存活的影響。De Bravo等［6］比較了2種貽貝對鹽度和溫度的耐受性，發(fā)現(xiàn)翡翠貽貝比褐貽貝Perna perna對溫鹽的耐受力更強(qiáng)。但有關(guān)生態(tài)因子對偏頂蛤幼蟲生長發(fā)育的影響目前尚未見相關(guān)報道。為此，本研究中以偏頂蛤浮游幼蟲為試驗(yàn)對象，研究了海水鹽度、pH和餌料對其生長、存活和畸形率的影響，探究偏頂蛤浮游幼蟲對生長發(fā)育所需環(huán)境因子的耐受范圍，初步掌握不同餌料對偏頂蛤浮游期幼蟲的飼喂效果，旨在為偏頂蛤苗種繁育及其種質(zhì)資源保護(hù)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

親蛤?yàn)椴勺源筮B海域的野生偏頂蛤，平均殼長為99．1 mm，體質(zhì)量為108．8 g。采回后立即進(jìn)行催產(chǎn)，經(jīng)室內(nèi)陰干12 h，流水刺激4 h得到精子及卵子，授精后在18～21℃條件下孵化得到同一批浮游幼蟲，并置于實(shí)驗(yàn)室1 m3水槽中培養(yǎng)至平均殼長為137．3 μm的D形幼蟲期，然后進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2 方法

試驗(yàn)所用容器均為容積10 L的白色聚乙烯塑料桶，每桶加海水6 L，按照容積法將幼蟲隨機(jī)等分于各組，初始培育密度約為7 ind．/mL，試驗(yàn)過程中保持室內(nèi)黑暗。每種試驗(yàn)均進(jìn)行12 d。

1．2．1 鹽度試驗(yàn) 用經(jīng)沙濾、沉淀處理的自然海水與高濃度海水晶、充分曝氣的自來水，配制成20、25、30、35、40共5個鹽度，每個鹽度組設(shè)置3個平行。試驗(yàn)期間，水溫控制在 (20±0．5)℃，pH為8，連續(xù)充氣，每天8:00、18:00各換水一次。每次換水后投餌，用湛江等鞭金藻Isochrysis zhanjiangensis(ISO)、新月菱形藻Nitzschia closterium(NIT)和牟氏角毛藻Chaetoceros muelleri Lemmerman(CHA)按1∶1∶1混合稍過量投喂，每次投餌后調(diào)整鹽度，鹽度波動不超過0．5。

1．2．2 pH試驗(yàn) 用1 mol/L的HCl溶液和1 mol/L的NaOH溶液配制成4、5、6、7、8、9、10共7個pH，每個pH組設(shè)置3個平行。每次投餌后調(diào)整pH，pH變化范圍不超過0．50。海水鹽度為31．2，餌料投喂方法與其他試驗(yàn)條件同鹽度試驗(yàn)。

1．2．3 餌料試驗(yàn) 試驗(yàn)用餌料為 ISO、NIT和CHA。試驗(yàn)設(shè)A～G共7個處理組，每組設(shè)3個平行。餌料組合和投喂比例見表1，各組日投喂量均為3×104ind．/mL。試驗(yàn)期間，每天8:00、18:00換水后各投餌料一次，鹽度為31．2，其他試驗(yàn)條件同鹽度試驗(yàn)。

1．2．4 指標(biāo)的測量與計(jì)算 試驗(yàn)過程中，每兩天利用顯微鏡 (NIKON顯微成像系統(tǒng))拍照觀察一次，統(tǒng)計(jì)幼蟲的存活數(shù)、畸形數(shù)和浮游幼蟲的密度，均統(tǒng)計(jì)3組幼蟲，每組50只。隨機(jī)取30只幼蟲測量其殼長。生長率 (RG)、存活率 (RS)、畸形率 (RA)的計(jì)算公式如下:

其中:L1、L0分別為試驗(yàn)結(jié)束與開始時偏頂蛤浮游幼蟲的殼長 (μm);t1、t0分別為試驗(yàn)結(jié)束與開始時的時間 (d);dt、d0分別為試驗(yàn)中各時間點(diǎn)浮游幼蟲的密度和初始密度 (ind．/mL);Dt、D0分別為各時間點(diǎn)觀察到的浮游幼蟲畸形個數(shù)和幼蟲總個數(shù) (ind．)。

表1 偏頂蛤幼蟲的餌料組合及投喂比例Tab.1 Diet composition and algal ratios in clam Modiolus modiolus larvae rearing

1.3 數(shù)據(jù)處理

用Excel 2003軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)初步整理后，再用SPSS 17．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。用單因素方差分析 (One-way ANOVA)法和Duncan多重比較法分別對不同試驗(yàn)組幼蟲的生長、存活率和畸形率的差異進(jìn)行比較，顯著性水平設(shè)為0．05。

2 結(jié)果與分析

2.1 鹽度對偏頂蛤浮游幼蟲生長及發(fā)育的影響

2．1．1 幼蟲的生長 從圖1可見:2 d內(nèi)，各鹽度組幼蟲的生長無顯著性差異 (P＞0．05);6 d后鹽度30組幼蟲的生長顯著快于其他鹽度組 (P＜0．05)，鹽度25和35組幼蟲的生長顯著快于鹽度20和40組 (P＜0．05)，而鹽度20和鹽度40組幼蟲生長較緩慢。試驗(yàn)結(jié)束時，鹽度20、25、30、35、40 組幼蟲的生長率分別為 2．5、4．0、5．4、3．6、2．2 μm/d。

圖1 鹽度對偏頂蛤浮游幼蟲生長的影響Fig.1 Effects of salinity on growth of the planktonic larvae in clam Modiolus modiolus

2．1．2 幼蟲的存活率和畸形率 從表2可見:試驗(yàn)過程中，鹽度30組幼蟲的存活率顯著高于其他各組 (P＜0．05)，鹽度20組的存活率明顯低于其他各組，鹽度25、30、35組的存活率明顯優(yōu)于其他組;10 d后各鹽度組幼蟲的存活率均明顯降低。鹽度30組幼蟲的畸形率最低，10 d后顯著低于其他各組 (P＜0．05)，鹽度20、25、40組的畸形率較高;8 d后各鹽度組幼蟲的畸形率明顯提高。

綜合圖1和表2可以看出，在本試驗(yàn)設(shè)計(jì)的鹽度范圍內(nèi)偏頂蛤浮游幼蟲均能生存，適宜鹽度范圍為25～35，最適鹽度為30。

表2 鹽度對偏頂蛤浮游幼蟲存活率和畸形率的影響Tab.2 Effects of salinity on survival and abnormal rates of planktonic larvae in clam Modiolus modiolus

2.2 pH對偏頂蛤浮游幼蟲生長及發(fā)育的影響

2．2．1 幼蟲的生長 從圖2可見:試驗(yàn)過程中，pH 4、5組幼蟲的生長非常緩慢，顯著低于其他各組 (P＜0．05)(除第8天、10天時與pH 6組不顯著外)，第12天時幼蟲幾乎全部死亡;pH 8組6 d后生長速度最快，與低pH組有顯著性差異 (P＜0．05);pH 7、9組幼蟲的也能較快生長;pH 10組的幼蟲12 h內(nèi)全部死亡，且顯微鏡視野中看到大片黑色絮狀物。試驗(yàn)結(jié)束時，pH 6、7、8、9組幼蟲的生長率依次為 2．0、3．2、5．4、4．4 μm/d。

綜合圖2和表3可以看出，在本試驗(yàn)設(shè)計(jì)的pH范圍內(nèi)偏頂蛤幼蟲生長發(fā)育的適宜pH為6～9，最適pH為8。

圖2 pH對偏頂蛤浮游幼蟲生長的影響Fig.2 Effects of pH on growth of the planktonic larvae in clam Modiolus modiolus

2．2．2 幼蟲的存活率和畸形率 從表3可見:不同pH對偏頂蛤浮游幼蟲存活率和畸形率有顯著影響 (P＜0．05)。試驗(yàn)過程中，pH 8組幼蟲的存活率顯著高于其他各組 (P＜0．05);pH 7、9組幼蟲的存活率也很高，第10天時存活率均高于30%;pH低于6的各組幼蟲存活率很低或全部死亡。pH 8組幼蟲的畸形率顯著低于其他各組 (P＜0．05)(除第4天時與pH 6、7組不顯著外);pH 4、5組幼蟲的畸形率顯著高于其他各組 (P＜0．05);pH 7、9組幼蟲的畸形率也較低，試驗(yàn)結(jié)束時畸形率在16%左右。

2.3 餌料對偏頂蛤浮游幼蟲生長及發(fā)育的影響

2．3．1 幼蟲的生長 從圖3可見:餌料C和F對幼蟲生長的影響效果明顯較差，6 d后幼蟲的生長顯著慢于其他餌料組(P＜0．05);單一餌料對幼蟲的促生長效果基本為A組≥B組＞C組，混合餌料對幼蟲的促生長效果基本為G組≥D組＞E組＞F組。試驗(yàn)期間，混合餌料D、E、G組與單一餌料A、B組的飼喂效果差異并不明顯(P＞0．05)。試驗(yàn)結(jié)束時，A、B、C、D、E、F、G組的生長率分別為5．9、5．4、3．7、6．1、4．9、3．8、5．4 μm/d。

表3 pH對偏頂蛤幼蟲存活率和畸形率的影響Tab.3 Effects of pH on survival and abnormal rates of the planktonic larvae in clam Modiolus modiolus

圖3 餌料對偏頂蛤浮游幼蟲生長的影響Fig.3 Effects of diets on growth of the planktonic larvae in clam Modiolus modiolus

2．3．2 幼蟲的存活率和畸形率 從表4可見:4 d內(nèi)，各餌料組幼蟲的存活率均較高;6 d后，G、F組幼蟲的存活率顯著高于其他餌料組 (P＜0．05)(除第8天時F組與B組和第10天時F組與E組不顯著外)，C組幼蟲的存活率顯著低于其他各組(P＜0．05);10 d后，各試驗(yàn)組幼蟲的存活率均明顯下降，第10天時除G組存活率高于55%外，其余各組存活率均低于33%。試驗(yàn)過程中，C、F組幼蟲的畸形率顯著高于其他各組 (P＜0．05)，G、B組的畸形率最低，畸形率均在11%以下;A、D、E組幼蟲的畸形率也較低，畸形率均在17%以下。

由不同餌料組對浮游幼蟲的飼喂效果可知，浮游期偏頂蛤幼蟲的餌料選擇以D組和G組為佳。

3 討論

3.1 偏頂蛤浮游幼蟲的耐鹽能力

鹽度是影響海洋貝類生長和發(fā)育的重要環(huán)境因子之一，也因其對實(shí)際生產(chǎn)的指導(dǎo)意義和應(yīng)用價值受到眾多學(xué)者的關(guān)注和研究［4-6，8-14］。本研究結(jié)果表明，偏頂蛤浮游幼蟲生長和存活的適宜鹽度為25～35，最適鹽度為30左右，與厚殼貽貝［5］等貝類幼蟲對鹽度的耐受規(guī)律一致。由圖1可知，低鹽度組 (20)與高鹽度組 (40)對偏頂蛤幼蟲生長的影響并不顯著，但對存活率的影響明顯，即高鹽度組＞低鹽度組;對幼蟲畸形率的影響情況則相反，高鹽度組 (40)＜低鹽度組 (20)，說明幼蟲對高鹽度的適應(yīng)能力稍強(qiáng)于對低鹽度的適應(yīng)能力。這與對縊蟶 Sinonovacula constricta［9］、海灣扇貝Argopecten irradians［12］、厚殼貽貝［5］、大連灣牡蠣 Ostrea talienuvhanensis［8］等幼蟲對鹽度適應(yīng)性的研究結(jié)果類似。本研究中觀察發(fā)現(xiàn)，在鹽度20和40的試驗(yàn)組，幼蟲生長受到抑制，面盤和鰓絲活動能力較差，絕大部分幼蟲沉于桶底，說明超出幼蟲適宜鹽度范圍會減弱其新陳代謝，幼蟲活動能力下降。Kinne［14］的研究也發(fā)現(xiàn)有此現(xiàn)象，并指出鹽度不適會引起幼蟲體內(nèi)滲透壓改變，使其超出了自身調(diào)節(jié)能力，降低了幼蟲的代謝速率和代謝過程的效率，最終導(dǎo)致幼蟲死亡。在本研究的鹽度試驗(yàn)中，偏頂蛤幼蟲在第10天時出現(xiàn)存活率和畸形率的大幅變化，同時顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)有很多原生動物，可能是水溫較高，養(yǎng)殖海水中原生動物大量繁殖所致。研究貝類對鹽度的適應(yīng)性對于其人工繁育有著重要的意義，因?yàn)橛鐖龊宛B(yǎng)殖場常設(shè)在沿海和河口等地，這些地區(qū)的海水鹽度受雨季地表徑流影響，會在短時間內(nèi)發(fā)生劇烈變化，易引起貝類幼蟲大量死亡。因此，偏頂蛤人工繁育場的選址應(yīng)慎重，避免選擇低鹽度水能大量流入育苗池的地方。

表4 餌料對偏頂蛤幼蟲存活率和畸形率的影響Tab.4 Effects of diets on survival and abnormal rates of planktonic larvae in clam Modiolus modiolus

3.2 偏頂蛤浮游幼蟲的耐pH能力

偏頂蛤浮游幼蟲在高pH海水和低pH海水中均不能正常生長發(fā)育。由圖2和表3可知:pH 10組幼蟲在12 h內(nèi)全部死亡，在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，視野中出現(xiàn)大量黑色絮狀物，推測是幼蟲死亡后分解的產(chǎn)物，葉瑩瑩等［5］對厚殼貽貝的研究中也出現(xiàn)該現(xiàn)象;pH低于6時，各試驗(yàn)組雖有部分偏頂蛤幼蟲存活，但生長發(fā)育速度緩慢，畸形率高，與尤仲杰等［11］對墨西哥灣扇貝幼蟲對pH耐受性的研究結(jié)果相似。相比較高pH(10)，偏頂蛤浮游幼蟲對低pH(低于6)的耐受能力要更強(qiáng)一些。故偏頂蛤浮游幼蟲生長與存活的適宜pH為6～9，最適 pH為8，這與彩虹明櫻蛤 Moerella iridescens［15］、墨西哥灣扇貝［11］、厚殼貽貝［5］等貝類幼蟲對pH的耐受范圍相似。海水pH的變化對貝類幼蟲的影響很大，會改變幼蟲血液和圍心腔液中的pH，從而抑制其心臟搏動［15］。近年來，海洋酸化日趨嚴(yán)重［2］，近海岸生物遭到了嚴(yán)重的破壞。因此，研究貝類浮游幼蟲對pH的耐受能力有重要的意義，可為貝類育苗場的選擇提供參考依據(jù)。

3.3 不同餌料對偏頂蛤浮游幼蟲生長發(fā)育的影響

貝類幼蟲發(fā)育至面盤幼蟲時開始攝食外源性餌料，即餌料成為浮游幼蟲的物質(zhì)基礎(chǔ)和能量來源，因此，適口且營養(yǎng)豐富的餌料對貝類幼蟲的生長發(fā)育至關(guān)重要。本研究結(jié)果表明，不同餌料對偏頂蛤浮游幼蟲生長發(fā)育有顯著影響，其中以金藻及含有金藻的混合餌料的投喂效果最好，以單一牟氏角毛藻以及牟氏角毛藻與新月菱形藻混合餌料的投喂效果最差。說明偏頂蛤幼蟲對餌料有選擇性，金藻的營養(yǎng)成分較為全面、均衡，基本上能夠滿足偏頂蛤幼蟲生長發(fā)育的需求，這與 Tang等［7］、Yan等［4］、Pettersen等［3］和王慶志等［16］的研究結(jié)果相一致。此外，3種餌料的混合組幼蟲的存活率明顯高于其他試驗(yàn)組，幼蟲畸形率也明顯低于其他試驗(yàn)組，說明多種單胞藻混合投喂對偏頂蛤幼蟲的飼育效果優(yōu)于單獨(dú)投喂和2種餌料的混合投喂效果。這是因?yàn)榛旌橡D料中不同餌料的營養(yǎng)成分可以替代和互補(bǔ)，彌補(bǔ)單一餌料在某些營養(yǎng)上的缺陷［17］。本研究中，新月菱形藻單獨(dú)投喂時幼蟲具有較高的生長率和存活率以及較低的畸形率，這與王慶志等［16］對魁蚶Scapharca broughtonii幼蟲的研究結(jié)果不同。這可能是由種屬差異、試驗(yàn)環(huán)境和幼蟲發(fā)育期不同造成的。本研究結(jié)果表明，湛江等鞭金藻基本上能夠滿足偏頂蛤早期浮游幼蟲生長發(fā)育的營養(yǎng)需求，但為了進(jìn)一步提高幼蟲存活率、降低畸形率，應(yīng)適當(dāng)輔以新月菱形藻和牟氏角毛藻等單胞藻。

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