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        高速勻漿法提取辣蓼莖中總黃酮

        2014-02-15 01:13:00楊家楷楊新周李學(xué)嬌
        云南化工 2014年6期
        關(guān)鍵詞:中總德宏錐形瓶

        楊家楷,楊新周,李學(xué)嬌

        (1.德宏州民族中學(xué),云南德宏 678400;2.德宏師范高等??茖W(xué)校理工系,云南德宏 678400)

        高速勻漿法提取辣蓼莖中總黃酮

        楊家楷1,楊新周2,李學(xué)嬌1

        (1.德宏州民族中學(xué),云南德宏 678400;2.德宏師范高等專科學(xué)校理工系,云南德宏 678400)

        以辣蓼莖為原料,對勻漿法提取辣蓼莖中總黃酮工藝進(jìn)行了研究,確定了最優(yōu)工藝參數(shù):提取1次,提取時(shí)間2 min,60%的乙醇溶劑,轉(zhuǎn)速為20 000 r/min,料液比為1∶25 g/mL。在最佳條件下,提取并測定了辣蓼莖中總黃酮含量,結(jié)果表明,黃酮提取率為4.75%。

        辣蓼;總黃酮;勻漿提取法

        辣蓼(Polygonum hydropiper Linn.)為蓼科蓼屬草本植物,廣布于我國各省區(qū)。辣蓼具有祛風(fēng)利濕、解毒消腫、散瘀止痛等功效,主要用于治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、疥癬、腸胃炎、功能性子宮出血、痢疾、腹瀉、腳氣、跌打腫痛等疾病,還可外用治療皮膚濕疹、毒蛇咬傷等。辣蓼在農(nóng)業(yè)方面也有良好的用途[1,2]。辣蓼中的黃酮類物質(zhì)有著很多藥理學(xué)作用。在辣蓼草中,辣蓼的莖是主要成分,所以研究辣蓼莖中的總黃酮提取方法及測定其含量具有一定的意義。

        目前,黃酮類物質(zhì)的提取方法主要有索氏提取法[3]、超聲波提取法[4]、回流法[5]、微波法[6]等。但是,索氏提取法和回流法提取時(shí)間較長,操作繁瑣,有機(jī)溶劑消耗也大;超聲波提取法噪音太大;微波提取則節(jié)省溶劑、加熱時(shí)間短、快速、高效。而勻漿提取法是一種節(jié)約試劑、環(huán)保、效率極高的提取方法。因此,研究利用勻漿提取法提取辣蓼莖中的黃酮類物質(zhì)有著很大的意義。本文以勻漿提取法提取辣蓼莖的總黃酮,并測定其含量。通過實(shí)驗(yàn),總結(jié)出一種快速測定辣蓼莖中總黃酮含量的一種方法,同時(shí),也為辣蓼草的綜合應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。

        1 實(shí)驗(yàn)部分

        1.1 儀器與材料

        WFZ UV-2000型紫外分光光度計(jì)(上海尤尼柯儀器有限公司),T25(IKA)分散機(jī)(德國),WL-200高速中藥粉碎機(jī)(瑞安市威力制藥機(jī)械廠),EPED-20TH實(shí)驗(yàn)超純水器(南京易普易達(dá)科技有限公司)。

        辣蓼草莖;蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢定所);無水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉均為分析純(AR);實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

        1.2 樣品預(yù)處理

        樣品(辣蓼草莖)用自來水快速沖洗干凈后,用蒸餾水洗2~3次,再用超純水洗凈;置于烘箱中,于60~65℃烘干;取出后粉碎,過100目(0.172mm)的篩,將篩好的粉末置于密封袋中備用。

        1.3 試驗(yàn)方法

        1.3.1 總黃酮的測定方法

        采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH法測定總黃酮。取適量的樣品液于25 mL的容量瓶中,加30%的乙醇10.00 mL及5%的NaNO2溶液1.00 mL,搖勻,靜置6 min;加10%的Al(NO3)3溶液1.00 mL,搖勻,靜置6 min;加1 mol/L的NaOH溶液10.00 mL,搖勻;加水稀釋至刻度,搖勻,靜置15 min。以試劑為空白,于最大吸收波長處進(jìn)行測定。

        1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

        1.3.2.1 標(biāo)準(zhǔn)液的制備

        準(zhǔn)確稱取120℃干燥恒重的蘆丁0.05 g(精確至0.000 1 g),用60%微熱乙醇定容至50 mL,搖勻,得質(zhì)量濃度為1.00 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。

        1.3.2.2 最大吸收波長的確定

        準(zhǔn)確取1.00 mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液,用1.3.1的方法測定其在400~600 nm波長范圍內(nèi)的吸光度,得蘆丁儲備液在500 nm處有最大吸收,即確定最大吸收波長為500 nm。以下試驗(yàn)均在500 nm波長處進(jìn)行。

        1.3.2.3 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

        分別準(zhǔn)確取0,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00,1.20,1.40,1.60 mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲備液于9個(gè)25 mL的容量瓶中(質(zhì)量濃度分別為0、8、16、24、32、48、56、64 μg/mL),用1.3.1中的方法于500 nm波長處測定它們的吸光度。以蘆丁質(zhì)量濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。曲線方程為A=0.0125C+0.0032[A為吸光度,C為蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液的質(zhì)量濃度(μg/mL)],相關(guān)系數(shù)r=0.9999。

        1.3.3 總黃酮含量的測定

        準(zhǔn)確稱取0.5000 g過100目(0.172 mm)篩的莖粉末于50 mL錐形瓶中,加入適量的一定濃度的乙醇后置于高速勻漿機(jī)上按不同的條件萃取。再抽濾,定容至50 mL,得樣品液。準(zhǔn)確移取1.00 mL樣品液于25 mL的容量瓶中,用1.3.1中的方法測定其吸光度。帶入線性回歸方程計(jì)算可得提取液總黃酮的質(zhì)量濃度(μg/mL),然后,按下式計(jì)算即可得到總黃酮的提取率。

        總黃酮提取率=(C×稀釋倍數(shù)×V)/(1000000×W)×100%式中:C為根據(jù)測得的吸光度值帶入線性回歸方程后所得的提取液的總黃酮的質(zhì)量濃度,V為抽濾樣品后的定容體積,W為稱取樣品的質(zhì)量。

        2 結(jié)果與討論

        2.1 提取次數(shù)對總黃酮提取率的影響

        稱取0.5 g樣品,置于錐形瓶中,按照料液比1∶20 g/mL,加入80%的乙醇,調(diào)整勻漿機(jī)轉(zhuǎn)速為20 000 r/min,提取1 min,依次提取3次,測定3次提取后總黃酮含量,結(jié)果見表1所示。

        表1 提取次數(shù)對總黃酮提取率的影響Table 1 Effect of extraction times on extraction rate of total flavonoids

        從表1中看出,第1次提取率為3.93%,第2次提取率為0.44%,第3次0.04%。第1次提取率遠(yuǎn)大于第2、3次,表明進(jìn)行勻漿提取1次,就可使辣蓼莖中總黃酮提取率達(dá)到最大,所以實(shí)驗(yàn)選擇勻漿提取1次。

        2.2 料液比對莖總黃酮提取率的影響

        稱取0.5 g樣品,置于錐形瓶中,按照料液比1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35、1∶40 g/mL加入80%的乙醇,調(diào)整勻漿機(jī)轉(zhuǎn)速為20 000 r/min,提取2 min,測定各提取液中總黃酮含量,結(jié)果見表2。

        表2 料液比對總黃酮提取率的影響Table 2 Effect of the extraction rate of solid-liquid ratio on extraction rate of total flavonoids

        從表2中看出,當(dāng)料液比為1∶25 g/mL時(shí),辣蓼莖中黃酮提取率最高,所以以下實(shí)驗(yàn)中料液比為都為1∶25 g/mL。

        2.3 乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)對辣蓼莖總黃酮提取率的影響

        稱取0.5g樣品,置于錐形瓶中,按照料液比1∶25 g/mL加入30%、40%、50%、60%、70%、80%的乙醇溶液,20 000 r/min的轉(zhuǎn)速提取2 min,測定各提取液中總黃酮含量,結(jié)果見表3。

        表3 乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)對總黃酮提取率的影響Table 3 Effect of ethanol mass fraction on extraction rate of total flavonoids

        從表3中看出,當(dāng)乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%時(shí),提取液中總黃酮提取率最高,所以試驗(yàn)選擇60%乙醇為最佳提取溶劑。

        2.4 提取時(shí)間對辣蓼莖總黃酮提取率的影響

        稱取0.5 g樣品,置于錐形瓶中,按照料液比1∶25加入60%的乙醇溶液,20 000 r/min的轉(zhuǎn)速分別提取0.5、1、1.5、2、2.5、3 min,測定各提取液中總黃酮含量,結(jié)果見表4。

        表4 提取時(shí)間對總黃酮提取率的影響Table 4 Effect of the extraction time on extraction rate of total flavonoids

        從表4中看出,當(dāng)提取時(shí)間為2 min時(shí),提取液中總黃酮提取率最高。在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn),提取時(shí)間超過2 min,樣品容易燒焦碳化,結(jié)合兩方面考慮,所以實(shí)驗(yàn)選擇最佳提取時(shí)間為2 min。

        2.5 轉(zhuǎn)數(shù)對辣蓼莖總黃酮提取率的影響

        稱取0.5 g樣品,置于錐形瓶中,按照料液比1∶25 g/mL加入60%的乙醇溶液,按照5 000、10 000、12 000、15 000、20 000、22 000、25 000 r/min的轉(zhuǎn)速分別提取2 min,測定各提取液中總黃酮含量,結(jié)果見表5。

        表5 轉(zhuǎn)數(shù)對總黃酮提取率的影響Table 5 Effect of revolutions′times on extraction rate of total flavonoids

        從表5中看出,當(dāng)轉(zhuǎn)速為20 000 r/min時(shí),提取液中總黃酮提取率最高,所以試驗(yàn)選擇最佳轉(zhuǎn)速為20 000 r/min。

        2.6 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

        準(zhǔn)確稱取0.500 0 g辣蓼莖樣品3份,按照最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件,測定辣蓼莖的總黃酮含量并計(jì)算提取率,3次結(jié)果分別為4.74%、4.72%、4.79%,平均為4.75%。辣蓼莖樣品中總黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)為47.5 mg/g,說明勻漿提取法穩(wěn)定、可行。

        3 結(jié)論

        以環(huán)保、簡便的勻漿法提取辣蓼莖中的總黃酮,通過實(shí)驗(yàn)確定了最佳提取工藝:提取溶劑為60%的乙醇、提取時(shí)間為2 min、最佳轉(zhuǎn)速為20 000 r/min、最佳料液比為1∶25 g/mL、最佳提取次數(shù)為1次。在最佳提取條件下,測定了辣蓼莖中總黃酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù),建立了一種快速提取辣蓼莖中總黃酮的方法。通過實(shí)驗(yàn)得出,高速勻漿法與超聲法[7]相比較,勻漿法節(jié)省時(shí)間,節(jié)約溶劑,并且提取率更高。

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        Extracting of Total Flavonoids from Stem of Polygonum hydropiper L Using High Speed Homogenization Method

        YANG Jia-kai1,YANG Xin-zhou2,LI Xue-jiao1

        (1.Dehong Prefecture ethnic middle school,Dehong 678400,China;2.Dehong Teachers college,Science and Engineering Department,Dehong 678400,China)

        The method of High Speed Homogenization of total flavonoids in the Stem of Polygonum hydropiper L was studied.The optimum technology parameters were as follows:extraction times was 1 times,extraction time was 2 min,ethanol concentration was 60%,rotation speed was 20 000 r/min,and the liquid and solids ratio was 1∶25(g/mL).Under the optimum extraction conditions total flavonoids from the Stem of Polygonum hydropiper L was determined.The results showed that total flavonoids extraction rate was 4.75%.

        Polygonum hydropiper L;Total Flavonoids;Homogenization Method

        O946

        A

        1004-275X(2014)06-0023-03

        12.3969/j.issn.1004-275X.2014.06.006

        收稿:2014-08-08

        德宏師范高等??茖W(xué)校校級科學(xué)研究課題(編號:DSK201404)。

        楊家楷(1985-),男,主要研究方向:物理教育及光譜學(xué)分析。

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