楊家楷，楊新周，李學(xué)嬌

（1.德宏州民族中學(xué)，云南德宏 678400；2.德宏師范高等?？茖W(xué)校理工系，云南德宏 678400）

高速勻漿法提取辣蓼莖中總黃酮

楊家楷1，楊新周2，李學(xué)嬌1

（1.德宏州民族中學(xué)，云南德宏 678400；2.德宏師范高等專科學(xué)校理工系，云南德宏 678400）

以辣蓼莖為原料，對勻漿法提取辣蓼莖中總黃酮工藝進(jìn)行了研究，確定了最優(yōu)工藝參數(shù)：提取1次，提取時(shí)間2 min，60%的乙醇溶劑，轉(zhuǎn)速為20 000 r／min，料液比為1∶25 g／mL。在最佳條件下，提取并測定了辣蓼莖中總黃酮含量，結(jié)果表明，黃酮提取率為4.75%。

辣蓼；總黃酮；勻漿提取法

辣蓼（Polygonum hydropiper Linn.）為蓼科蓼屬草本植物，廣布于我國各省區(qū)。辣蓼具有祛風(fēng)利濕、解毒消腫、散瘀止痛等功效，主要用于治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、疥癬、腸胃炎、功能性子宮出血、痢疾、腹瀉、腳氣、跌打腫痛等疾病，還可外用治療皮膚濕疹、毒蛇咬傷等。辣蓼在農(nóng)業(yè)方面也有良好的用途［1，2］。辣蓼中的黃酮類物質(zhì)有著很多藥理學(xué)作用。在辣蓼草中，辣蓼的莖是主要成分，所以研究辣蓼莖中的總黃酮提取方法及測定其含量具有一定的意義。

目前，黃酮類物質(zhì)的提取方法主要有索氏提取法［3］、超聲波提取法［4］、回流法［5］、微波法［6］等。但是，索氏提取法和回流法提取時(shí)間較長，操作繁瑣，有機(jī)溶劑消耗也大；超聲波提取法噪音太大；微波提取則節(jié)省溶劑、加熱時(shí)間短、快速、高效。而勻漿提取法是一種節(jié)約試劑、環(huán)保、效率極高的提取方法。因此，研究利用勻漿提取法提取辣蓼莖中的黃酮類物質(zhì)有著很大的意義。本文以勻漿提取法提取辣蓼莖的總黃酮，并測定其含量。通過實(shí)驗(yàn)，總結(jié)出一種快速測定辣蓼莖中總黃酮含量的一種方法，同時(shí)，也為辣蓼草的綜合應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與材料

WFZ UV－2000型紫外分光光度計(jì)（上海尤尼柯儀器有限公司），T25（IKA）分散機(jī)（德國），WL－200高速中藥粉碎機(jī)（瑞安市威力制藥機(jī)械廠），EPED－20TH實(shí)驗(yàn)超純水器（南京易普易達(dá)科技有限公司）。

辣蓼草莖；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所）；無水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉均為分析純（AR）；實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 樣品預(yù)處理

樣品（辣蓼草莖）用自來水快速沖洗干凈后，用蒸餾水洗2～3次，再用超純水洗凈；置于烘箱中，于60～65℃烘干；取出后粉碎，過100目（0.172mm）的篩，將篩好的粉末置于密封袋中備用。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 總黃酮的測定方法

采用NaNO2－Al（NO3）3－NaOH法測定總黃酮。取適量的樣品液于25 mL的容量瓶中，加30%的乙醇10.00 mL及5%的NaNO2溶液1.00 mL，搖勻，靜置6 min；加10%的Al（NO3）3溶液1.00 mL，搖勻，靜置6 min；加1 mol／L的NaOH溶液10.00 mL，搖勻；加水稀釋至刻度，搖勻，靜置15 min。以試劑為空白，于最大吸收波長處進(jìn)行測定。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

1.3.2.1 標(biāo)準(zhǔn)液的制備

準(zhǔn)確稱取120℃干燥恒重的蘆丁0.05 g（精確至0.000 1 g），用60%微熱乙醇定容至50 mL，搖勻，得質(zhì)量濃度為1.00 mg／mL的標(biāo)準(zhǔn)液。

1.3.2.2 最大吸收波長的確定

準(zhǔn)確取1.00 mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液，用1.3.1的方法測定其在400～600 nm波長范圍內(nèi)的吸光度，得蘆丁儲備液在500 nm處有最大吸收，即確定最大吸收波長為500 nm。以下試驗(yàn)均在500 nm波長處進(jìn)行。

1.3.2.3 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別準(zhǔn)確取0，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00，1.20，1.40，1.60 mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲備液于9個(gè)25 mL的容量瓶中（質(zhì)量濃度分別為0、8、16、24、32、48、56、64 μg／mL），用1.3.1中的方法于500 nm波長處測定它們的吸光度。以蘆丁質(zhì)量濃度（μg／mL）為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。曲線方程為A＝0.0125C＋0.0032［A為吸光度，C為蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液的質(zhì)量濃度（μg／mL）］，相關(guān)系數(shù)r＝0.9999。

1.3.3 總黃酮含量的測定

準(zhǔn)確稱取0.5000 g過100目（0.172 mm）篩的莖粉末于50 mL錐形瓶中，加入適量的一定濃度的乙醇后置于高速勻漿機(jī)上按不同的條件萃取。再抽濾，定容至50 mL，得樣品液。準(zhǔn)確移取1.00 mL樣品液于25 mL的容量瓶中，用1.3.1中的方法測定其吸光度。帶入線性回歸方程計(jì)算可得提取液總黃酮的質(zhì)量濃度（μg／mL），然后，按下式計(jì)算即可得到總黃酮的提取率。

總黃酮提取率＝（C×稀釋倍數(shù)×V）／（1000000×W）×100%式中：C為根據(jù)測得的吸光度值帶入線性回歸方程后所得的提取液的總黃酮的質(zhì)量濃度，V為抽濾樣品后的定容體積，W為稱取樣品的質(zhì)量。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取次數(shù)對總黃酮提取率的影響

稱取0.5 g樣品，置于錐形瓶中，按照料液比1∶20 g／mL，加入80%的乙醇，調(diào)整勻漿機(jī)轉(zhuǎn)速為20 000 r／min，提取1 min，依次提取3次，測定3次提取后總黃酮含量，結(jié)果見表1所示。

表1 提取次數(shù)對總黃酮提取率的影響Table 1 Effect of extraction times on extraction rate of total flavonoids

從表1中看出，第1次提取率為3.93%，第2次提取率為0.44%，第3次0.04%。第1次提取率遠(yuǎn)大于第2、3次，表明進(jìn)行勻漿提取1次，就可使辣蓼莖中總黃酮提取率達(dá)到最大，所以實(shí)驗(yàn)選擇勻漿提取1次。

2.2 料液比對莖總黃酮提取率的影響

稱取0.5 g樣品，置于錐形瓶中，按照料液比1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35、1∶40 g／mL加入80%的乙醇，調(diào)整勻漿機(jī)轉(zhuǎn)速為20 000 r／min，提取2 min，測定各提取液中總黃酮含量，結(jié)果見表2。

表2 料液比對總黃酮提取率的影響Table 2 Effect of the extraction rate of solid－liquid ratio on extraction rate of total flavonoids

從表2中看出，當(dāng)料液比為1∶25 g／mL時(shí)，辣蓼莖中黃酮提取率最高，所以以下實(shí)驗(yàn)中料液比為都為1∶25 g／mL。

2.3 乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)對辣蓼莖總黃酮提取率的影響

稱取0.5g樣品，置于錐形瓶中，按照料液比1∶25 g／mL加入30%、40%、50%、60%、70%、80%的乙醇溶液，20 000 r／min的轉(zhuǎn)速提取2 min，測定各提取液中總黃酮含量，結(jié)果見表3。

表3 乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)對總黃酮提取率的影響Table 3 Effect of ethanol mass fraction on extraction rate of total flavonoids

從表3中看出，當(dāng)乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%時(shí)，提取液中總黃酮提取率最高，所以試驗(yàn)選擇60%乙醇為最佳提取溶劑。

2.4 提取時(shí)間對辣蓼莖總黃酮提取率的影響

稱取0.5 g樣品，置于錐形瓶中，按照料液比1∶25加入60%的乙醇溶液，20 000 r／min的轉(zhuǎn)速分別提取0.5、1、1.5、2、2.5、3 min，測定各提取液中總黃酮含量，結(jié)果見表4。

表4 提取時(shí)間對總黃酮提取率的影響Table 4 Effect of the extraction time on extraction rate of total flavonoids

從表4中看出，當(dāng)提取時(shí)間為2 min時(shí)，提取液中總黃酮提取率最高。在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，提取時(shí)間超過2 min，樣品容易燒焦碳化，結(jié)合兩方面考慮，所以實(shí)驗(yàn)選擇最佳提取時(shí)間為2 min。

2.5 轉(zhuǎn)數(shù)對辣蓼莖總黃酮提取率的影響

稱取0.5 g樣品，置于錐形瓶中，按照料液比1∶25 g／mL加入60%的乙醇溶液，按照5 000、10 000、12 000、15 000、20 000、22 000、25 000 r／min的轉(zhuǎn)速分別提取2 min，測定各提取液中總黃酮含量，結(jié)果見表5。

表5 轉(zhuǎn)數(shù)對總黃酮提取率的影響Table 5 Effect of revolutions′times on extraction rate of total flavonoids

從表5中看出，當(dāng)轉(zhuǎn)速為20 000 r／min時(shí)，提取液中總黃酮提取率最高，所以試驗(yàn)選擇最佳轉(zhuǎn)速為20 000 r／min。

2.6 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取0.500 0 g辣蓼莖樣品3份，按照最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件，測定辣蓼莖的總黃酮含量并計(jì)算提取率，3次結(jié)果分別為4.74%、4.72%、4.79%，平均為4.75%。辣蓼莖樣品中總黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)為47.5 mg／g，說明勻漿提取法穩(wěn)定、可行。

3 結(jié)論

以環(huán)保、簡便的勻漿法提取辣蓼莖中的總黃酮，通過實(shí)驗(yàn)確定了最佳提取工藝：提取溶劑為60%的乙醇、提取時(shí)間為2 min、最佳轉(zhuǎn)速為20 000 r／min、最佳料液比為1∶25 g／mL、最佳提取次數(shù)為1次。在最佳提取條件下，測定了辣蓼莖中總黃酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，建立了一種快速提取辣蓼莖中總黃酮的方法。通過實(shí)驗(yàn)得出，高速勻漿法與超聲法［7］相比較，勻漿法節(jié)省時(shí)間，節(jié)約溶劑，并且提取率更高。

［1］ 黃紅泓，甄漢深.中草藥辣蓼近年來的研究進(jìn)展［J］.中國民族民間醫(yī)藥，2013，22（1）：38－39.

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Extracting of Total Flavonoids from Stem of Polygonum hydropiper L Using High Speed Homogenization Method

YANG Jia－kai1，YANG Xin－zhou2，LI Xue－jiao1

（1.Dehong Prefecture ethnic middle school，Dehong 678400，China；2.Dehong Teachers college，Science and Engineering Department，Dehong 678400，China）

The method of High Speed Homogenization of total flavonoids in the Stem of Polygonum hydropiper L was studied.The optimum technology parameters were as follows：extraction times was 1 times，extraction time was 2 min，ethanol concentration was 60%，rotation speed was 20 000 r／min，and the liquid and solids ratio was 1∶25（g／mL）.Under the optimum extraction conditions total flavonoids from the Stem of Polygonum hydropiper L was determined.The results showed that total flavonoids extraction rate was 4.75%.

Polygonum hydropiper L；Total Flavonoids；Homogenization Method

O946

A

1004-275X（2014）06-0023-03

12.3969／j.issn.1004-275X.2014.06.006

收稿：2014-08-08

德宏師范高等?？茖W(xué)校校級科學(xué)研究課題（編號：DSK201404）。

楊家楷（1985-），男，主要研究方向：物理教育及光譜學(xué)分析。