龔 睿，張 軼，孫何云，趙舒雅

（信陽市動物疫病預(yù)防控制中心，河南 信陽 464000）

豬細小病毒?。≒PI）是由豬細小病毒（PPV）引起的豬的一種繁殖障礙病，該病主要感染母豬，引起母豬發(fā)生流產(chǎn)、死產(chǎn)、產(chǎn)木乃伊胎［1］。不同年齡、性別的豬均易感，感PPV的母豬和帶毒的公豬是主要的傳染源。我國于1982年首次分離到PPV，近年來，該病的發(fā)生和流行呈上升趨勢，大部分地區(qū)均有PPI的發(fā)生［2］。PPI在規(guī)模豬場經(jīng)常性暴發(fā)流行，給養(yǎng)豬業(yè)帶來較大的經(jīng)濟損失，并且該病還常與免疫抑制性疾病混合感染，其危害性加大。疫苗免疫是預(yù)防PPI的有效手段，現(xiàn)在，大部分豬場的種豬均已進行了PPV的免疫。為了解信陽市規(guī)模豬場PPV的防疫狀況，信陽市動物疫病預(yù)防控制中心組織實驗室人員利用2014年春季集中免疫監(jiān)測的機會，對全市部分規(guī)模豬場的PPV免疫效果進行監(jiān)測評估，為該病的防控提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

2014年3—5月，由各縣區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心選擇免疫過PPV疫苗的規(guī)?；i場，選取不同日齡健康豬群，通過前腔靜脈或耳靜脈每豬無菌采集全血3～5 mL，每個豬場采集30～40份樣品，共采集血液樣品1 983份，冷藏條件下送達實驗室。

1.2 樣品的制備

試驗人員將采集的血液樣品于3 000 r／min條件下離心10 min，取血清保存于1.5 mL滅菌離心管中，-20 ℃保存待檢。

1.3 檢測試劑及儀器設(shè)備

1.3.1 檢測試劑盒

豬細小病毒ELSIA抗體檢測試劑盒(批號：140809)，購自武漢科前動物生物制品有限公司。

1.3.2 儀器設(shè)備

Eppendorf 10～1 000μL單道移液器及25～300μL多道移液器（德國Eppendorf公司）；Thermo FC酶標儀（美國Thermo公司），TDZ5-WS臺式低速離心機（長沙湘儀離心機儀器有限公司）；303系列電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海樹立儀器儀表有限公司）。

表1 不同縣區(qū)豬場細小病毒抗體合格率統(tǒng)計表

1.4 方法

1.4.1 PPV抗體檢測酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）操作方法

1）取抗原包被板，分別將稀釋好的待檢血清和對照各取100μL加入到抗原包被板孔中，待檢樣品做1孔，陰性對照和陽性對照各設(shè)2孔。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出），置37 ℃溫育30 min。2）甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200 μL，靜置3 min倒掉，再在吸水紙上拍干，反復(fù)洗滌5次。3）每孔加羊抗豬酶標二抗100μL，置 37 ℃溫育 30 min。4）洗滌5次，方法同前述步驟的2）。切記每次在干凈吸水紙上拍干。5）每孔先加1滴(50μL)底物液A、再加1滴(50μL)底物液B，混勻，室溫(18～25 ℃)避光顯色10 min。6） 每孔加終止液1滴(50μL)，10 min內(nèi)測定結(jié)果（測定前在震蕩器上輕輕震動一下）。

1.4.2 結(jié)果判定

試驗成立條件，陽性對照孔平均OD630nm值≥0.6，陰性對照孔平均OD630nm值必須＜0.3。樣品OD630nm值≥0.4，判為陽性，樣品OD630nm值＜0.4判為陰性。

1.4.3 合格標準

群體免疫抗體合格率達到70%判定為群體合格。

表2 不同生長階段豬群細小病毒抗體合格率統(tǒng)計表

2 檢測結(jié)果

2.1 不同縣區(qū)規(guī)模豬場PPV抗體水平情況

由表1可見，本次PPV免疫效果調(diào)查58個規(guī)?；i場，檢測樣品1 983份，抗體合格1 501份，合格率為75.7%；其中，羅山縣最高為84.1%，最低的光山縣合格率為61.5%。

2.2 不同生長階段PPV免疫情況

本次調(diào)查了4個生長階段的豬群，分別是經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬、后備公豬和后備母豬。由表2可見，經(jīng)產(chǎn)母豬和種公豬抗體合格率最高，分別達到了81.1%和81.8%；后備公豬和后備母豬的合格率較低，僅為72.8%和67.6%，特別是后備母豬的合格率低于70%的抗體合格率標準。

3 分析與討論

1)利用信陽市春季集中免疫監(jiān)測的機會，開展了本次PPV免疫效果調(diào)查，采樣點覆蓋轄區(qū)內(nèi)58個規(guī)模豬場，能夠代表我市豬細小病毒的免疫情況。本次調(diào)查共監(jiān)測樣品1 983份，合格1 501份，合格率達到75.7%，符合國家群體合格率標準。信陽市不同縣區(qū)規(guī)模豬場PPV抗體水平有差異，其中，羅山、潢川和商城的豬群抗體合格率較高，均超過了80%；淮濱縣和光山縣的豬群抗體合格率在70%以下。分析原因，這可能與淮濱和光山的中小規(guī)模豬場較多，飼養(yǎng)管理水平落后、免疫程序不科學(xué)、引種不良、養(yǎng)殖環(huán)境不良有較大的關(guān)系。

2)本次調(diào)查了4個不同階段豬群PPV免疫情況，抗體合格率有差異。其中，經(jīng)產(chǎn)母豬和種公豬群最高，分別為81.1%和81.8%；后備公豬和后備母豬的合格率為72.8%和67.6%。本研究表明，豬細小病毒抗體合格率不同豬群間存在差異，抗體合格率隨養(yǎng)殖時間加長有增長的趨勢。種豬抗體水平較高，后備階段豬群抗體水平較低，分析出現(xiàn)這種情況的原因：種豬飼養(yǎng)周期長，免疫次數(shù)較多；部分豬場后備豬在2月齡以后才開始免疫。

3) PPI是母豬繁殖障礙性疾病，給生豬養(yǎng)殖帶來較大危害，該病特點是：發(fā)病率高，傳播快，而且容易引起繼發(fā)感染。目前，PPV現(xiàn)階段尚無有效的治療措施，預(yù)防該病主要手段是進行免疫接種。近幾年來由于疫苗品質(zhì)、免疫抑制性疾病和霉菌毒素等多方面的原因，PPV疫苗免疫失敗的現(xiàn)象時有發(fā)生。豬場要想獲得好的免疫效果，須從以下幾點著手：加強飼養(yǎng)管理，提高豬群健康水平；高度重視PPV疫苗質(zhì)量，選擇安全、高效、口碑好的疫苗，采用合適的免疫劑量、免疫程序，免疫后及時檢測，了解豬群的免疫效果，查找免疫措施的不足，確保免疫能夠?qū)ωi起到保護作用；加強對引進種豬的隔離和檢疫工作，杜絕陽性種豬的混群；加強對豬群的檢測，發(fā)現(xiàn)病毒感染及免疫抑制豬，立即淘汰；要有效控制PPV，堅持自繁自養(yǎng)，做好種豬群PPV的免疫凈化工作。

[1] 蔡寶祥.家畜傳染病學(xué)［M］.4版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2001：209-211.

[2] 李祥峰，高洪，嚴玉霖，等. 楚雄部分地區(qū)豬細小病毒感染的血清學(xué)調(diào)查[J].動物醫(yī)學(xué)進展，2013(8)：130-132.