汪 睿，虞紅珍，王 弦，吳 強

Fascin_1在肺癌中的表達及其臨床意義

汪 睿1，2，虞紅珍1，王 弦1，吳 強1

目的觀察Fascin_1在人類肺癌及癌旁組織中的表達及其與肺癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系，并研究Fascin _1表達與肺癌的臨床生物學(xué)行為的關(guān)系。方法采用免疫組化MaxVision兩步法檢測84例肺癌及癌旁組織中Fascin_ 1蛋白的表達。用Fascin_1在血管內(nèi)皮細胞中的表達作為陽性對照，使用PBS代替一抗作為陰性對照。結(jié)果Fascin _1蛋白在84例肺癌組織及癌旁組織中分別為78例（92.9%）陽性與27例（32.1%）Fascin_1蛋白陽性，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。Fascin_1表達在不同年齡、臨床分期以及區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），但是在不同性別、T分期以及病理類型間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。肺癌組織中Fascin_1蛋白陽性表達強度不同的患者的生存時間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而癌旁組織中Fascin_1蛋白陽性表達強度不同患者的生存時間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論在肺癌中，F(xiàn)ascin_ 1的表達同腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，同時癌組織中Fascin_1的不同表達對患者的生存時間有明顯影響。因此考慮Fascin_1有望成為肺癌潛在生物學(xué)標志物。

肺癌；Fascin_1；免疫組織化學(xué)；生存時間

Fascin_1蛋白是一種細胞骨架蛋白，目前發(fā)現(xiàn)在人類多個上皮性腫瘤中表達上調(diào)，并且與臨床病理學(xué)和預(yù)后不良相關(guān)。該基因主要是與F-肌動蛋白結(jié)合，并將其組裝成平行排列的肌動蛋白束，是調(diào)節(jié)細胞運動的關(guān)鍵基因之一［1］。該研究采用免疫組化方法MaxVision兩步法檢測人肺癌及癌旁組織中Fascin_1的表達，分析其與患者臨床病理特征之間的關(guān)系，并研究Fascin_1表達與肺癌的臨床生物學(xué)行為的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料收集安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科2007年2月～2008年4月病理資料齊全的肺癌手術(shù)石蠟標本84例，腫瘤組織切緣周邊經(jīng)病理學(xué)判斷未見癌組織的部分為癌旁組織，作為參考對照。所取標本的患者年齡為38～80（60.77±9.44）歲。按WHO（2012年）肺癌中的標準進行分期。TNM分期：Ⅰ期37例、Ⅱ期32例、Ⅲ期15例。2013年3月進行生存期隨訪，其中40例患者獲得隨訪，44例失訪。標本均使用常規(guī)10%福爾馬林溶液固定，然后石蠟包埋及4 μm厚切片。并采用HE和免疫組化法進行染色。

1.2 試劑免疫組化試劑使用免疫組化濃縮型鼠抗人Fascin_1單克隆抗體（SPM133）購自美國Santa Cruz公司；免疫組化檢測試劑盒為即用型快捷免疫組化MaxVision試劑盒和DAB顯色試劑盒均購自福州邁新公司。

1.3 方法免疫組化染色方法參照使用說明書操

作，采用MaxVision兩步法進行免疫組化染色，簡要步驟按如下操作：檸檬酸鈉緩沖液高壓抗原修復(fù)，切片中滴加Fascin_1一抗，4℃過夜，去除一抗后滴加二抗，然后試劑盒室溫下孵育20 min，用DAB顯色，蘇木精對比染色。用Fascin_1在血管內(nèi)皮細胞中的表達作為陽性對照，使用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4 結(jié)果判斷免疫組化以癌及癌旁細胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽性染色。免疫組化評定方法參考文獻［2－3］標準。按染色強度記分：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；按染色程度記分：無陽性細胞數(shù)為0分，陽性細胞數(shù)1%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75% 為3分，76%～100%為4分。兩項相加得分（0～7分），≥3分為陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行分析。樣本率的比較使用χ2檢驗，生存率用Kaplan-Meier法計算，生存率的比較使用Log-Rank檢驗。

2 結(jié)果

2.1 Fascin_1蛋白在肺癌及癌旁組織中的表達和分布Fascin_1蛋白在肺癌組織中呈彌漫性分布，癌巢周邊部的癌細胞染色較強。Fascin_1免疫組化染色主要定位于陽性細胞胞質(zhì)或胞膜上，呈局灶性或彌漫性黃色顆粒狀。84例肺癌組織中，78例（92.9%）Fascin_1蛋白陽性，見圖1。84例肺癌旁組織中，27例（32.1%）Fascin_1蛋白陽性，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2＝66.06，P＜0.05）。癌旁組織中Fascin_1主要表達于腺上皮細胞，呈膜質(zhì)型定位，見圖2。肺癌間質(zhì)中的血管內(nèi)皮細胞亦可見Fascin_ 1陽性染色。在癌旁組織中，毛細血管內(nèi)皮細胞及樹突狀細胞中均呈陽性表達，而支氣管肺泡上皮細胞及肺大血管內(nèi)皮細胞中呈陰性表達。

圖1 Fascin_1蛋白在肺癌組織中的陽性表達 DAB×400 A：鱗癌；B：腺癌

圖2 Fascin_1蛋白在癌旁組織中的陽性表達 DAB×400 A：支氣管上皮細胞；B：肺泡上皮細胞

2.2 肺癌中Fascin_1蛋白的表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系為了研究Fascin_1表達同肺癌臨床病理特征的關(guān)系，將84例患者按照年齡（≤61歲，＞61歲）、性別（男，女）、T分期（T1、T2、T3、T4）、N分期—區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況（N0、N1、N2）、臨床病理類型（腺癌、鱗癌、大細胞癌、小細胞癌）以及TNM分期（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期）進行分組，使用χ2檢驗方法，比較Fascin_1在不同組之間的表達差異。結(jié)果表明Fascin_1表達在不同年齡、臨床分期以及區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），但是在不同性別、T分期以及病理類型間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 肺癌中Fascin_1表達與臨床病理特征的關(guān)系（n）

2.3 肺癌中Fascin_1蛋白陽性表達與生存時間的關(guān)系40例隨訪患者中，到2013年3月隨訪截止時，病死21例，存活19例，總生存率47.5%，生存時間8～70個月。將Fascin_1蛋白陽性表達強度與患者生存時間進行分析顯示，肺癌組織中Fascin_1蛋白陽性表達強度不同的患者之間中位生存期差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而癌旁組織中Fascin_1蛋白陽性表達強度不同患者的中位生存期差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表2、圖3。多因素Cox回歸分析也顯示肺癌組織中Fascin_1蛋白陽性表達強度與患者生存期之間存在關(guān)聯(lián)［風險比（HR）＝4.505，95%CI＝1.615～12.569，P＝0.004］。

表2 Fascin_1表達與中位生存時間之間的關(guān)系

圖3 肺癌組織中Fascin_1蛋白陽性表達程度不同的患者之間總生存曲線

3 討論

肺癌發(fā)生轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致肺癌治療失敗、患者死亡的主要原因，因此尋找、研究肺癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)機制或是相關(guān)基因?qū)τ诜伟┑闹委熂邦A(yù)后有著十分重要的臨床意義。

人類Fascin_1基因在1994年被克隆，其染色體定位于7q22，該基因的蛋白質(zhì)編碼產(chǎn)物是分子質(zhì)量為5.5×104ku的細胞內(nèi)蛋白，其主要作用就是與F-肌動蛋白結(jié)合。Fascin_1蛋白的第39位的絲氨酸是蛋白激酶C的磷酸化位點，磷酸化后的該位點可調(diào)節(jié)Fascin_1蛋白與F－肌動蛋白的結(jié)合活性，抑制Fascin_1肌鈣蛋白的組裝功能并影響到細胞膜表面?zhèn)巫愫臀⒓男纬桑?］。

有研究［5－6］顯示，F(xiàn)ascin_1蛋白在多種腫瘤，如乳腺癌、鼻咽癌腫瘤細胞中有著異常高表達，并且其表達同腫瘤的轉(zhuǎn)移及侵襲存在密切的相關(guān)性。但是，目前對于Fascin_1在肺癌中表達研究的報道較少。

本研究觀察了肺癌手術(shù)病理標本中Fascin_1表達，結(jié)果顯示Fascin_1主要定位于肺癌陽性細胞胞質(zhì)或胞膜上，呈灶性或彌漫性黃色顆粒狀。但是Fascin_1蛋白的表達與肺癌患者的性別、T分期、腫瘤的病理類型之間無明顯的相關(guān)性。國內(nèi)相關(guān)的報道中于維霞等［7］分析了Fascin_1在51例肺癌中的表達，其中在肺鱗癌患者中的表達陽性率為66.7%，而肺腺癌患者中表達陽性率為43.5%，但是在分化差的肺癌中Fascin_1表達上調(diào)，而且具有性別差異，其中男性表達率較高。該結(jié)果與本組研究結(jié)果不一致。

既往高翔等［8］對肺癌的研究結(jié)果中報道肺癌組織表達的Fascin_1蛋白與正常組織表達，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。本組實驗結(jié)果顯示Fascin_1蛋白在肺癌組織中與肺癌旁組織中的表達相比較高。因此考慮高翔等［8］的研究中患者可能發(fā)生了上皮間質(zhì)的轉(zhuǎn)化，具體原因有待于進一步研究。另發(fā)現(xiàn)肺癌組織中Fascin_1蛋白陽性患者較陰性患者總生存率及總生存時間下降，提示Fascin_1蛋白的陽性表達可能預(yù)示著患者的不良預(yù)后及低生存率，這一結(jié)論也與其他學(xué)者的研究［9－11］一致。

國外Pelosi et al［12］研究報道了220例Ⅰ期的非小細胞肺癌中有關(guān)Fascin_1蛋白的表達，結(jié)果顯示，98%的肺鱗癌患者為Fascin_1陽性表達，78%肺腺癌患者為Fascin_1陽性表達，而在癌栓中普遍表達。另外在具有對側(cè)惡性胸腔積液或遠處轉(zhuǎn)移的腺癌患者中Fascin_1更是呈彌漫性表達，而對于肺鱗癌患者，癌旁組織同角化珠相比，F(xiàn)ascin_1的免疫反應(yīng)強度較弱，呈弱表達。從隨訪結(jié)果看，F(xiàn)ascin_1呈彌漫性或強陽性表達的患者預(yù)后差。該研究首次證明了Fascin_1蛋白在侵襲性的肺癌中表達上調(diào)，并結(jié)合臨床的角度反映出Fascin_1蛋白作為肺癌患者一個獨立的預(yù)后因素的可能性。之后，該研究繼續(xù)評估了Fascin_1蛋白在128例經(jīng)手術(shù)切除的肺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中的表達分析以及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。結(jié)果顯示，在肺典型類癌和肺非典型類癌當中，F(xiàn)ascin_1蛋白的表達同區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系密切相關(guān)［13］。本組研究中同樣得出結(jié)果，顯示Fascin_1表達在區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床分期不同的患者中差異有統(tǒng)計學(xué)意義。區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移范圍越廣、臨床分期越晚的患者，標本中Fascin_1表達越高。多因素分析表明，F(xiàn)ascin_1可以作為獨立的預(yù)測肺癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標志物［14］。

因此，根據(jù)本組試驗結(jié)合既往相關(guān)研究綜合分析，F(xiàn)ascin_1蛋白對人類肺癌細胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有密切相關(guān)性，同時癌組織中Fascin_1的不同表達對患者的生存時間有明顯影響。因此考慮Fascin_1有望成為肺癌潛在生物學(xué)標志物。

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Clinical significance of Fascin_1 expression in lung cancer

Wang Rui1，2，Yu Hongzhen1，Wang Xian1，et al
（1Dept of Pathology，Anhui Medical University，Hefei 230022；2Dept of Oncology，Anhui Chest Hospital，Hefei 230032）

ObjectiveTo observe the relationship of Fascin_1 expression in human lung cancer and para-cancer tissues to clinicopathological characteristics in lung cancer patients，and to investigate the correlations of Fascin_1 expression with the biologic behaviors of lung cancer.MethodsImmunohistochemistry MaxVision method was adopted to detect the protein expression of Fascin_1 in 84 cases of lung cancer and para-cancer tissues.Fascin_1 expression in vascular endothelial cells was used as the positive criteria，while PBS displaced primary antibody as the negative criteria.ResultsThe positive rates of Fascin_1 expression in lung cancer tissues and para-cancer tissues were 92.9%（78／84）and 32.1%（27／84）respectively，with significant difference（P＜0.05）.Fascin_1 expression was correlated with age，clinical stage and regional lymph node metastasis，with significant differnence（P＜0.05）.Whereas it was not correlated with gender，T stage and pathology type，with no statistical difference（P＞0.05）.The overall survival time was significantly different among the different intensities of Fascin_1 expression in lung cancer tissues（P＜0.05），while there was no statistical difference among the different intensities of Fascin_1 expression in para-cancer tissues（P＞0.05）.ConclusionFascin_1 plays an important role in the invasiveness and metastasis of lung cancer.Fascin_1 expression in cancer tissues has an obvious influence on the overall survival time of patients.Fascin_1 might be potential candidate of biological biomarkers for lung cancer.

lung cancer；Fascin_1；immunohistochemistry；survival time

R 73-3

1000－1492（2014）05－0658－04

2014－02－25接收

國家自然科學(xué)基金（編號：81101597、81172533）；安徽高校省級科學(xué)研究（編號：KJ2012z142）；安徽醫(yī)科大學(xué)?；鸺白芳踊穑ň幪枺?012xkj001zj）

1安徽醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)教研室，合肥 230032

2安徽省胸科醫(yī)院腫瘤科，合肥 230022

汪 睿，男，主治醫(yī)師，碩士研究生；

吳 強，男，教授，博士生導(dǎo)師，責任作者，E-mail：aydjohn ＠yahoo.com