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        陰陽氣血雙調復方對自然衰老圍絕經(jīng)期大鼠模型卵巢形態(tài)學和血清性激素水平的影響

        2014-02-08 22:43:48白建民馮冬蘭王愛梅時偉紅未小明曾憲平
        關鍵詞:雙調絕經(jīng)期陰陽

        白建民, 馮冬蘭, 王愛梅, 時偉紅, 未小明, 曾憲平

        (南陽醫(yī)學高等??茖W校,河南 南陽 473061)

        本研究運用陰陽氣血雙調復方灌胃治療自然衰老大鼠圍絕經(jīng)期模型,觀察大鼠卵巢組織學改變,檢測其血清性激素(E2、FSH、LH)水平變化,評價陰陽氣血雙調復方治療圍絕經(jīng)期綜合征的療效,探討其治療圍絕經(jīng)期綜合征的可能作用機制。

        1 材料

        1.1 實驗動物

        選用健康雌性SD大鼠,11~15月齡,體質量250 g~350 g,經(jīng)陰道細胞涂片連續(xù)5 d未出現(xiàn)動情期變化大鼠30只;健康雌性SD大鼠10只,4~6月齡,體質量120 g~180 g,由河南省醫(yī)學實驗動物中心提供。

        1.2 藥物與制劑

        陰陽氣血雙調復方組成:紫河車6 g,熟地15 g,麥冬12 g,石斛20 g,知母15 g,百合20 g,白芍15 g,女貞子12 g,山茱萸15 g,龜板膠15 g,鹿角膠6 g,菟絲子15 g,淫羊藿12 g,肉桂6 g,當歸10 g,丹參15 g,川芎6 g,藏紅花6 g,山藥20 g,人參10 g,五味子10 g,郁金15 g,煅龍牡20 g,以上藥材均購自南陽醫(yī)專附屬中醫(yī)院中藥房,經(jīng)南陽醫(yī)專中藥鑒定教研室姚學文副教授鑒定,符合2010年版《中國藥典》的相關規(guī)定。水煮法:按以上處方稱取藥材,分別水煎煮2次,第1次加10倍量水煎煮40 min,第2次加8倍量水煎煮30 min,雙層紗布濾過,制成濃縮液,濃縮至生藥含量為5 g/L的濃縮液。尼爾雌醇由上海醫(yī)藥<集團>有限公司華聯(lián)制藥廠生產(批號H31021648)。

        1.3 實驗儀器

        E2、FSH、LH放射免疫分析試劑盒由北京邦定生物技術有限公司生產,SSW型微電腦電熱恒溫槽由上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠生產,LD4-2低速離心機由北京醫(yī)用離心機廠生產(型號DZF-6020),B×41-Olympus生物顯微鏡由南京長城信息系統(tǒng)有限公司生產。

        2 方法

        2.1 動物分組及給藥

        將30只自然衰老圍絕經(jīng)期雌性SD大鼠按隨機數(shù)字表法分為3組,每組10只,即圍絕經(jīng)期模型組、陰陽氣血雙調復方組和雌激素對照組。另外選取4~6月齡健康SD雌性大鼠10只作為空白對照組。陰陽氣血雙調復方組給予陰陽氣血雙調復方5 g/kg濃縮液,2 ml/d灌胃;雌激素對照組每周1次給予尼爾雌醇和蒸餾水配制成1 mg/kg混懸液,2 ml/次灌胃,其余時間給予等量生理鹽水灌胃;圍絕經(jīng)期模型組和空白對照組每天給予等量生理鹽水2 ml/d灌胃,連續(xù)給藥4周。

        2.2 觀測指標與測定方法

        各實驗組大鼠末次灌胃治療后禁食12 h,用2.25%戊巴比妥鈉(40 mg/kg)行腹腔麻醉,麻醉成功后剖腹,暴露腹主動脈(色白),頭皮靜脈穿刺針采血4 ml至生化檢測試管,室溫下靜置4~8 h,分離血清后放置于-20℃冰箱內保存,嚴格按照放射免疫分析試劑盒測量方法分別測定FSH、LH、E2水平。采血結束后,放血處死大鼠摘取卵巢組織,制作卵巢石蠟切片,用光學顯微鏡觀察卵巢組織形態(tài)學的改變。

        2.3 統(tǒng)計學方法

        3 結果

        3.1 陰陽氣血雙調復方對模型大鼠卵巢形態(tài)學的影響

        圖1顯示,空白對照組大鼠鏡下可見黃體發(fā)育良好、體積大、數(shù)目多、成熟卵泡多、閉鎖卵泡少見;與空白對照組比較,圍絕經(jīng)期模型組大鼠鏡下可見閉鎖卵泡增多,成熟卵泡數(shù)量明顯減少,黃體數(shù)目少,體積小;與圍絕經(jīng)期模型組比較,用藥組鏡下均可見黃體數(shù)目明顯增多,閉鎖卵泡數(shù)量減少,提示陰陽氣血雙調復方組和雌激素對照組對卵巢萎縮現(xiàn)象均有改善作用。

        圖1 各實驗組大鼠卵巢組織切片HE染色結果

        3.2 陰陽氣血雙調復方對模型大鼠性激素水平的影響

        表1顯示,圍絕經(jīng)期模型組大鼠血清E2水平低于空白對照組,血清FSH、LH值則明顯高于正常組(P<0.05,P<0.01);與圍絕經(jīng)期模型組比較,陰陽氣血雙調復方組和雌激素對照組均能提高圍絕經(jīng)期大鼠血清E2水平,降低圍絕經(jīng)期大鼠血清FSH、LH值(P<0.01),且2組之間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

        表1 各組大鼠血清性激素檢測結果

        注:與空白對照組比較:##P<0.01;與圍絕經(jīng)期模型組比較:**P<0.01

        4 討論

        卵巢功能衰退可使卵巢分泌卵泡數(shù)量減少,合成性激素量不足,血中雌-孕激素水平下降,導致下丘腦、垂體功能衰退,是圍絕經(jīng)期婦女內分泌失調的主要原因。目前,西醫(yī)治療主要采用激素替代療法防治圍絕經(jīng)期綜合征,療效肯定,但長期激素治療可能增加子宮內膜癌、乳腺癌的發(fā)生風險[1]。

        圍絕經(jīng)期綜合征屬于中醫(yī)“絕經(jīng)前后諸證”范疇。中醫(yī)認為,絕經(jīng)前后人體腎氣逐漸衰退,天癸漸竭,沖任二脈俱虛,極易導致腎的陰陽平衡失調。但通過長期的臨床觀察發(fā)現(xiàn),腎陰陽俱虛患者單純雙補陰陽療效不佳。腎為沖任之本,胞絡系于腎而絡于胞中,腎陰虛則精虧血少;腎陽虛則虛寒內生,沖任、胞宮失煦,以致寒凝血瘀,沖任、胞宮氣血運行失暢?!毒霸廊珪っT敘》亦曰:“命門為精血之?!瓰樵獨庵迮K之陰氣非此不能滋;五臟之陽氣非此不能發(fā)?!笨梢娔I為五臟陰陽之本,氣血之根。絕經(jīng)前后腎陰陽俱虛者,不僅腎之陰陽虧虛、失衡且波及氣血,使氣血亦虛、沖任瘀滯,并累及心肝脾諸臟,臨床常表現(xiàn)為復雜多樣的變化和證候。劉完素在《素問病機氣宜保命集》中就曾指出:“……天癸已絕,乃屬太陰經(jīng)也。”強調了此期腎氣漸衰,沖任漸虛,全靠補后天養(yǎng)先天,充養(yǎng)沖任氣血,以延緩衰老的重要性。此期雙理陰陽氣血、健脾益氣、疏肝解郁、養(yǎng)心安神,多臟兼顧更適合其復雜的生理病理變化需求。陰陽氣血雙調復方正是基于以上理論,著重陰陽雙補、氣血并調,并輔以健脾益氣、疏肝解郁、養(yǎng)心安神、育陰潛陽諸法,以適應此期的復雜病機。實驗結果亦表明,多臟并調,重在脾腎,雙理氣血可恢復腎之陰陽平衡,重現(xiàn)臟腑正常功能,較之單純雙補陰陽之法更適合圍絕經(jīng)期的生理病理變化。

        現(xiàn)代藥理研究表明,紫河車能直接刺激卵巢組織,提高E2水平,并能補充適量的女性荷爾蒙[2];百合、知母有雌激素樣活性,能調節(jié)內分泌和改善圍絕經(jīng)期綜合征大鼠臨床癥狀[3];淫羊藿主要成分黃酮苷,具有雌激素樣作用[4];菟絲子可提高下丘腦-腦垂體-卵巢對LRH和LH的反應性,增加實驗大鼠垂體前葉、卵巢、子宮重量[5];紅花能降低圍絕經(jīng)期綜合征患者血清FSH、LH含量,增加血清E2含量[6]。因此,有必要進一步探討陰陽氣血雙調復方調節(jié)生殖軸的作用機制,為中醫(yī)理論的開拓性運用、替代性激素治療、新藥的開發(fā)提供有效的實驗依據(jù)。

        實驗研究結果表明,陰陽氣血雙調復方和雌激素一樣對圍絕經(jīng)期大鼠下丘腦-垂體-卵巢軸的失衡狀態(tài)有明顯調節(jié)作用,能提高血清E2水平,降低血清FSH、LH含量,改善卵巢功能,促進排卵,為該方的臨床應用和開發(fā)提供科學的實驗依據(jù)。

        [1] 張鴻宇,羅曉.左歸丸合逍遙丸治療圍絕經(jīng)期綜合征[J].中國實驗方劑學雜志,2012, 18(12):295-297.

        [2] 高學敏.治療學[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:1719.

        [3] 錢莉亞,許惠琴,嚴然,等.百合知母湯治療圍絕經(jīng)期綜合征的實驗研究[J].南京中醫(yī)藥大學學報,2010,26(3):202-205.

        [4] 曹秀梅,潘玉華.龍鳳寶片治療圍絕經(jīng)期綜合征的再評價研究[J].中國實驗方劑學雜志, 2012,18(24): 324-326.

        [5] 秦達念,佘白蓉,佘運初.菟絲子黃酮對實驗動物及人絨毛組織生殖功能的影響[J].中藥新藥與臨床藥理,2000,11(6):349-351.

        [6] 王娟.紅花逍遙片治療圍絕經(jīng)期綜合征35例[J].中國實驗方劑學雜志,2012,18(18):312-313.

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