張喜鳳 趙紅兵 (商丘醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，商丘476100)

Syk和VEGF-C在乳腺癌組織中的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

張喜鳳 趙紅兵①(商丘醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，商丘476100)

目的:探討VEGF-C和Syk在乳腺癌中的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法:應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法，檢測40例乳腺浸潤性導(dǎo)管癌、10例乳腺纖維腺瘤、10例正常乳腺組織Syk和VEGF-C的表達(dá)，分析其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。結(jié)果: VEGF-C在正常乳腺組織、乳腺纖維腺瘤、乳腺癌中的陽性表達(dá)率分別為0%(0/10)，30.0%(3/10)，77.5%(31/40);Syk在正常乳腺組織、乳腺纖維腺瘤、乳腺癌中的陽性表達(dá)率分別為100%(10/10)，100%(10/10)，37.5%(15/40)。VEGF-C表達(dá)與腫瘤直徑、組織學(xué)分級(jí)無顯著相關(guān)(P＞0.05;P＞0.05)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著相關(guān)(P＜0.05);Syk表達(dá)與腫瘤直徑、組織學(xué)分級(jí)無顯著相關(guān)(P＞0.05;P＞0.05)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著相關(guān)(P＜0.05);Syk與VEGF-C間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論:Syk和VEGF-C參與了乳腺癌的淋巴道浸潤、轉(zhuǎn)移，可能是判斷預(yù)后的重要指標(biāo)。

乳腺癌;Syk;VEGF-C

乳腺癌是女性常見惡性腫瘤，轉(zhuǎn)移是主要的死亡原因。大量臨床和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)證實(shí):癌和癌周淋巴管增生為腫瘤細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移提供了便利條件。脾酪氨酸激酶(Syk)是目前公認(rèn)的候選抑癌基因，在多種癌組織中不表達(dá)或低表達(dá)，研究認(rèn)為Syk是內(nèi)皮細(xì)胞生長的重要調(diào)控因子。血管內(nèi)皮生長因子-C (VEGF-C)作為第一特定淋巴管生成的因素，在乳腺癌淋巴管增生中作用重要，其分子機(jī)制是否與Syk表達(dá)有關(guān)聯(lián)，目前相關(guān)研究很少。本研究采用免疫組織化學(xué)方法，檢測乳腺癌中Syk、VEGF-C的表達(dá)及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，探討二者在乳腺癌轉(zhuǎn)移中是否存在內(nèi)在聯(lián)系，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)乳腺癌的生物學(xué)特性，指導(dǎo)臨床診斷和治療。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本 40例乳腺浸潤性導(dǎo)管癌、10例乳腺纖維腺瘤、10例正常乳腺組織收集于商丘市第一人民醫(yī)院2009年3月至2010年3月手術(shù)切除或活檢標(biāo)本，年齡33～75歲，中位年齡(50±1.2)歲?；颊咝g(shù)前均未接受過化療、放療及免疫治療。所有手術(shù)切除標(biāo)本均經(jīng)4%甲醛溶液固定、石蠟包埋、連續(xù)切片，用于組織病理學(xué)診斷和免疫組化檢查。

1.2 試劑 一抗分別為:兔抗人VEGF-C多克隆抗體，兔抗人Syk多克隆抗體，S-P免疫組化試劑盒和DAB顯色試劑盒均為北京中杉金橋生物技術(shù)開發(fā)有限公司產(chǎn)品。

1.3 免疫組織化學(xué) 采用S-P法。常規(guī)免疫組化染色，DAB顯色。以 PBS代替一抗作陰性對(duì)照，分別用已知的陽性片作陽性對(duì)照。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 統(tǒng)計(jì)學(xué)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，各組間的比較采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 VEGF-C蛋白表達(dá) VEGF-C主要在細(xì)胞質(zhì)著色(圖1)。在正常乳腺組織、乳腺纖維腺瘤、乳腺癌中的陽性表達(dá)率分別為0%(0/10)，30.0%(3/10)，77.5%(31/40)，乳腺癌與正常乳腺組織、乳腺纖維腺瘤組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05;P＜0.05)。

表1 VEGF-C、Syk與臨床病理因素的關(guān)系Tab.1 Relationship between expression of VEGF-C，Syk and clinicopathological factors in breast cancer

2.2 Syk蛋白表達(dá) Syk主要在細(xì)胞質(zhì)著色(圖2)。在正常乳腺組織、乳腺纖維腺瘤、乳腺癌中的陽性表達(dá)率分別為 100%(10/10)，100%(10/10)，37.5% (15/40)，乳腺癌與正常乳腺組織、乳腺纖維腺瘤組織間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05;P ＜0.05)。

2.3 VEGF-C、Syk與臨床病理因素的關(guān)系 見表1。

2.4 VEGF-C、Syk蛋白表達(dá)的相關(guān)性 具體見表2。

3 討論

Syk(Spleen tyrosine kinase)蛋白分子量為72 kD，有629個(gè)氨基酸，是非受體型蛋白酪氨酸激酶。研究認(rèn)為:酪氨酸蛋白激酶是一組酶分子，催化蛋白酪氨酸殘基磷酸化，與多個(gè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑相關(guān)，控制細(xì)胞分化、增殖和擴(kuò)散，是內(nèi)皮細(xì)胞生長的重要調(diào)控因子。Coopman等[1]首次報(bào)道乳腺癌中Syk陽性表達(dá)率低于非癌組織(P＜0.01)，認(rèn)為Syk可能抑制乳腺癌發(fā)生發(fā)展。本研究結(jié)果顯示:在正常乳腺組織、乳腺纖維腺瘤、乳腺癌中的陽性表達(dá)率分別為100%、100%、37.5%，乳腺癌與正常乳腺組織、乳腺纖維腺瘤組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05;P＜0.05)。多個(gè)研究認(rèn)為:Syk表達(dá)與乳腺癌年齡、組織學(xué)分級(jí)、腫瘤大小和深度無關(guān)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究顯示: Syk表達(dá)與乳腺癌組織學(xué)分級(jí)、腫瘤大小無關(guān)(P＞0.05;P ＞0.05)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P ＜0.05)，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。

表2 乳腺癌組織中VEGF-C、Syk表達(dá)的關(guān)系Tab.2 Relationship of expression of VEGF-C，Syk in breast cancer

圖1 不同組織中VEGF-C蛋白表達(dá)情況(SP，×200)Fig.1 VEGF-C protein expression in different breast tissue(SP，×200)

血管內(nèi)皮生長因子-C(VEGF-C)作為第一特定淋巴管生成的因子，可調(diào)控腫瘤血管生成、淋巴管生成，它通過與血管內(nèi)皮生長因子受體3(VEGFR-3)結(jié)合，磷酸化VEGFR-3酪氨酸激酶，導(dǎo)致瘤內(nèi)或瘤周的淋巴管增生、擴(kuò)張，為癌細(xì)胞擴(kuò)散打下基礎(chǔ)。韓艷春[2]等研究顯示:VEGF-C在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中高表達(dá)(67.0%)，明顯高于癌旁正常組織。Zhao等[3]研究顯示:乳腺癌VEGF-C表達(dá)明顯高于乳腺良性腫瘤。Wu等[4]研究顯示:乳腺癌VEGF-C表達(dá)率較正常上皮組織高 (80.5%，46.3%，P＜0.01)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:VEGF-C蛋白表達(dá)在正常乳腺組織、乳腺纖維腺瘤、乳腺癌中的陽性表達(dá)率分別為 0%(0/10)，30.0%(3/10)，77.5%(31/40)，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。韓艷春[2]等研究顯示:VEGF-C在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P=0.005);Western blot證實(shí)，VEGF-C 在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:VEGF-C在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P＜0.05);與腫瘤直徑和組織學(xué)分級(jí)無關(guān)(P ＞0.05;P ＞0.05)。

Abtahian等[5]動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果提示:在淋巴管生成過程中，Syk是內(nèi)皮細(xì)胞生長的重要調(diào)控因子。陳賢亮[6]、張大坤等[7]研究結(jié)果為:Syk 在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中低表達(dá)，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高表達(dá)。Syk蛋白表達(dá)與VEGF-C蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，認(rèn)為Syk基因可能通過抑制NF-κB的活性下調(diào)VEGF-C活性，進(jìn)而抑制乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果顯示:Syk蛋白表達(dá)與VEGF-C蛋白表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組Syk蛋白表達(dá)缺失，VEGF-C蛋白高表達(dá)，與上述研究結(jié)果相符。Syk蛋白正常表達(dá)可能下調(diào)VEGF-C蛋白表達(dá)，阻滯癌組織淋巴管和毛細(xì)血管新生，進(jìn)而抑制了乳腺癌細(xì)胞通過淋巴管道轉(zhuǎn)移，提示Syk為乳腺癌的抑癌基因。

總之，根據(jù)近年來的基因協(xié)同假說，在乳腺癌的癌細(xì)胞遷徙和轉(zhuǎn)移中，Syk和VEGF-C可能起協(xié)同作用，可作為判斷預(yù)后的重要指標(biāo)。

[1]Coopman PJ，Do MT，Barth M，et al.The Syk tyrosine kinase suppresses malignant growth of human breast cancer cells[J].Nature，2000，406(8):742-747.

[2]韓艷春，劉魯英，張 騫，等.乳腺癌組織中 VEGF-C和p38 MAPK的表達(dá)及與伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J].中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志，2013，22(1):20-25.

[3]Zhao YC，Ni XJ，Li Y，et al.Peritumoral lymphangiogenesis induced by vascular endothelial growth factor C and D promotes lymph node metastasis in breast cancer patients[J].World J Surg Oncol，2012，20(10):165.

[4]Wu QW，She HQ，Liang J，et al.Expression and clinical significance of extracellular matrix protein 1 and vascular endothelial growth factor-C in lymphatic metastasis of human breast cancer[J].BMC Cancer，2012，27(12):47.

[5]Abtahian F，Guerriero A，Sebzda E，et al.Regulation of blood and lymphatic vascular separation by signaling proteins SLP-76 and Syk[J].Science，2003，299(5604):247-251.

[6]陳賢亮，李 良，張雅潔.Syk基因?qū)θ橄侔┭軆?nèi)皮生長因子-C表達(dá)的調(diào)控作用[J].中華病理學(xué)雜志，2011，40(12): 805-809.

[7]張大坤，徐建中，付曉君，等.Syk與VEGF-C在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義[J].解剖與臨床，2012，17(6):474-476.

[收稿2013-09-21 修回2013-11-11]

(編輯 張曉舟)

Syk and VEGF-C in breast cancer's expression with lymph node metastasis

ZHANG Xi-Feng，ZHAO Hong-Bing.Shangqiu Medical School，Shangqiu 476100，China

Objective:To explore the relationship of Syk and VEGF-C expression in breast cancer with lymph node metastasis.MethodsThe expression of Syk and VEGF-C in 40 cases of breast cancer were determined using immunohistochemistry assay.Then，the positive rates of Syk and VEGF-C were compared with lymph node metastasis.ResultsThe expression rate of VEGF-C and Syk in breast cancer was respectively 77.5%(31/40)，37.5%(15/40).VEGF-C protein expression was not significant related with the tumor diameter(P ＞0.05)and histological grade(P ＞0.05)，but was significantly associated with lymph node metastasis(P ＜0.05).Syk protein expression was not significant related with tumor diameter(P ＞0.05)and the histological grade(P ＞0.05)，and was associated with lymph node metastasis(P ＜0.05).The difference of Syk and VEGF-C had statistics significance(P ＜0.05).ConclusionSyk and VEGF-C involved in the lymphatic invasion and metastasis，may be an important indicator of prognosis.

Breast cancer;Syk;VEGF-C

R737.9

A

1000-484X(2014)05-0681-03

10.3969/j.issn.1000-484X.2014.05.025

①鄭州大學(xué)第一臨床醫(yī)院，鄭州450052。

張喜鳳(1969年－)，女，副教授，主要從事乳腺癌、宮頸癌方面的研究，E-mail:zhbzxfzzy@126.com。