鄔曉東 張紐華 何容開

（1 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科，廣州 510095；

2 暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院，廣州 510000；3 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，廣州 510045）

活力素對荷艾氏腹水瘤（EAC）小鼠抑瘤作用的實驗研究

鄔曉東1張紐華2何容開3

（1 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科，廣州 510095；

2 暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院，廣州 510000；3 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，廣州 510045）

目的 探討一種國家專利技術(shù)通過藥食同源的 “工程菌”轉(zhuǎn)化含硒的中藥靈芝孢子等提取多種中藥活性成分 （簡稱為活力素）的抑瘤及對抗腫瘤藥的增效減毒作用。方法 將活力素、環(huán)磷酰胺分別及共同用于荷艾氏腹水瘤小鼠，隨機分為實驗組 （活力素組，環(huán)磷酰胺組，活力素＋環(huán)磷酰胺組）及對照組，觀察小鼠的存活天數(shù)，體重及瘤重變化情況。結(jié)果 活力素組小鼠的存活天數(shù)明顯延長，當(dāng)活力素濃度為0.276g/mL時，能將小鼠生存時間延長24.4%；活力素組小鼠治療后四周體重增加8.49g，明顯高于對照組；環(huán)磷酰胺＋活力素治療組體重也有所增加，體重增加6.9g，略高于對照組；治療四周后，將皮下瘤取出稱重，發(fā)現(xiàn)活力素組腫瘤重量為0.531g，腫瘤小于對照組的0.686g，抑瘤率達22.6%，環(huán)磷酰胺組與環(huán)磷酰胺＋活力素組腫瘤明顯減小，抑瘤率更明顯，分別為56.27%和76.68%。結(jié)論 活力素能提高腹水瘤小鼠的生存時間，并對實體瘤的生長有明顯的抑制作用，與環(huán)磷酰胺聯(lián)合使用不但能明顯提高抗腫瘤藥物的抗腫瘤作用，還能減輕化療藥物降低體重的副作用，展示出與化療藥很好的協(xié)同抗癌作用。

活力素；抗腫瘤；小鼠；中藥活性成分

腫瘤是危害人類生命和健康最嚴重的一類疾病?？鼓[瘤藥物的研究一直是醫(yī)學(xué)研究的熱點，隨著分子生物學(xué)和分子藥理學(xué)對腫瘤本質(zhì)和作用機制方面的闡述，中藥抗癌的研究水平也顯著提高并展示出了廣闊的前景。其在抑制、殺傷腫瘤細胞，改善癥狀與體征，以及減輕化療不良反應(yīng)等方面都發(fā)揮著重要作用。本研究探討一種國家專利技術(shù)通過藥食同源的 “工程菌”轉(zhuǎn)化含硒的中藥靈芝孢子等提取多種中藥活性成分 （簡稱為活力素），將其用于荷瘤小鼠體內(nèi)，觀察其對腫瘤生長和小鼠生存時間的影響。

1 材料及方法

1.1 實驗材料 實驗用雌性昆明小白鼠由暨南大學(xué)動物所提供，荷艾氏腹水瘤 （EAC）原種小鼠由中山醫(yī)科大學(xué)腫瘤研究所提供，環(huán)磷酰胺購自環(huán)磷酰胺購自Sigma公司。

1.2 活力素液準(zhǔn)備 將活力素40g浸泡過夜，沸水浴2次，每次1h，收集濾液 （即浸取夜）。經(jīng)冷凍干燥濃縮后，用蒸餾水配制成活力素工作液，約含菇粉0.09g/mL。

1.3 活力素對荷艾氏腹水瘤 （EAC）小鼠存活天數(shù)的影響 取原荷瘤小鼠腹水用無菌生理鹽水配制成2.25×107個細胞/mL，取0.2ml腹腔注射于小鼠。實驗分組如下：陰性對照組 （生理鹽水0.2ml/d），陽性對照組 （腹腔注射環(huán)磷酰胺25mg/kg/d），治療組1 （0.276g/mL活力素Ⅱ0.2ml/d），治療組2 （0.138g/mL活力素Ⅱ0.2ml/d），治療組3 （0.25g/mL活力素Ⅰ0.2ml/d），治療組4 （0.125g/mL活力素Ⅰ0.2ml/d）。采用灌胃方法進行處理，記錄小鼠的存活天數(shù)。生存時間延長率計算公式為：

1.4 活力素對艾氏腹水瘤 （EAC）實體瘤抗腫瘤作用從原荷瘤小鼠取出腹水液，用無菌生理鹽水配制成1.2×106個細胞/ml，取0.2ml瘤細胞懸液于小鼠右腋下行皮下注射，將荷瘤小鼠隨即分為四組：陰性對照組 （同上），陽性對照組 （同上），活力素組 （活力素工作液0.2ml/d），環(huán)磷酰胺＋活力素組 （環(huán)磷酰胺25mg/kg/d腹注＋活力素0.2ml/d灌胃）。連續(xù)檢測小鼠的體重變化。抑瘤率的計算公式為：

2 結(jié)果

2.1 活力素對荷瘤 （EAC）小鼠生存時間的影響 小鼠腹腔注射艾氏腹水瘤 （EAC）細胞后采用活力素灌胃處理，與對照組相比，治療組小鼠的存活天數(shù)明顯延長，以治療組1尤為顯著，即當(dāng)活力素濃度為0.276g/mL時，能將小鼠生存時間延長24.4% （見圖1）。

圖1 活力素對荷艾氏腹水瘤 （EAC）小鼠存活天數(shù)的影響

2.2 活力素對艾氏腹水瘤 （EAC）實體瘤抗腫瘤作用 將艾氏腹水瘤 （EAC）細胞皮下注射成瘤后采用活力素灌胃處理，與對照組相比，活力素組小鼠治療后四周體重增加8.49g，明顯高于對照組，環(huán)磷酰胺＋活力素治療組體重也有所增加，體重增加6.9g，略高于對照組 （見圖2）。

圖2 活力素對艾氏腹水瘤 （EAC）實體瘤小鼠體重的影響

治療四周后，將皮下瘤取出稱重，發(fā)現(xiàn)活力素組腫瘤重量為0.531g，腫瘤小于對照組的0.686g，抑瘤率達22.6%，陽性對照組與環(huán)磷酰胺＋活力素組腫瘤明顯減小，抑瘤率更明顯，分別為56.27%和76.68% （見圖3）。

圖3 活力素對艾氏腹水瘤 （EAC）實體瘤的抑瘤作用

3 討論

腫瘤已是人類公認的重大殺手之一，其死亡率僅次于心腦血管疾病，近些年來各種檢測和治療手段不斷出現(xiàn)，但是腫瘤的發(fā)病和死亡率卻呈逐年上升態(tài)勢。目前化學(xué)藥物抗腫瘤作用比較明確，療效顯著，但毒副作用大，長期應(yīng)用容易產(chǎn)生耐藥性等，所以人們迫切希望尋找療效好且毒副作用小的藥物，中藥在這方面顯示明顯的優(yōu)勢。

本研究使用一種專利技術(shù)提取多種中藥活性成分（簡稱為活力素），大多數(shù)已有研究證實其在提高腫瘤免疫及抗腫瘤方面的作用。如其中靈芝孢子通過刺激機體免疫系統(tǒng)，提高機體內(nèi)細胞免疫和體液免疫水平來實現(xiàn)抗腫瘤作用。靈芝孢子增強單核2巨噬細胞系統(tǒng)的吞噬功能，激活巨噬細胞分泌多種生物活性物質(zhì)（如NO，IL－1β，TNF－α等），促使/淋巴細胞增殖，促進抗體生成，增強AF細胞活性，從而殺傷腫瘤細胞［1－4］。并可以通過抑制端粒酶和DNA拓撲異構(gòu)酶活性，抑制自由基的產(chǎn)生，抑制腫瘤細胞遷移和誘導(dǎo)細胞凋亡等機制抑制腫瘤細胞生長和增值，實現(xiàn)抗腫瘤的作用。

大量的資料證實或提示，硒具有廣泛的生物學(xué)作用，特別是在癌癥 （如肺癌、腸癌、前列腺癌和肝癌等）臨床干預(yù)試驗中，表現(xiàn)出硒有強大的保護作用，流行病學(xué)研究表明許多癌癥都與硒的攝入不足有關(guān)，硒與癌癥的關(guān)系已成為微量元素硒研究中最為令人關(guān)注的領(lǐng)域之一。近年來，對硒預(yù)防和治療癌癥的作用及抗癌作用機理等進行了廣泛和深入研究，取得了重大進展［5］。Shamberger于1969－1971年經(jīng)過一系列流行病、實驗、臨床研究后指出，低硒地區(qū)及血硒低的人群中癌發(fā)病率高，消化道及乳腺癌尤為顯著［6］。Schrauer等人研究指出，日本人飲食習(xí)慣的改變 （高蛋白、高脂肪和高碳水化合物飲食）造成從食物中攝入的硒減少，從而使乳腺癌的發(fā)病率增加4～5倍［7］。Medina等報道5～50moI的硒能抑制小鼠乳腺癌細胞的生長，細胞熒光法顯示這個作用是通過阻斷細胞周期的S－G2期而實現(xiàn)的，說明硒對癌細胞的抑制作用可能是在DNA的合成。國內(nèi)研究人員也發(fā)現(xiàn)乳腺癌病人血硒明顯低于對照人群。另有報道，在苯并蒽誘導(dǎo)的乳腺癌治療中發(fā)現(xiàn)硒化合物有很好的抗癌活性［8］。其它癌癥據(jù)近期的一項 （亞利桑那大學(xué)亞利桑那癌癥中心1993～1996年開展的）研究報道，在該研究中確診的近200例癌癥新病例中，服硒組的前列腺癌、結(jié)腸直腸癌和肺癌患者死于這些癌癥的機會比安慰劑組分別少63%、58%和46%［9］。因此，硒作為一種抗癌劑已日益受到重視。

本研究中活力素能提高腹水瘤小鼠的生存時間，并對實體瘤的生長有明顯的抑制作用，更為重要的是，作為重要活性成分的混合物，活力素還展現(xiàn)出其協(xié)同抗腫瘤藥物的作用，與環(huán)磷酰胺聯(lián)合使用不但能明顯提高抗腫瘤藥物的抗腫瘤作用，還能減輕化療藥物降低體重的副作用，展示出與化療藥很好的協(xié)同抗癌作用。進一步闡明其在抗腫瘤方面及減輕毒副作用的作用，將有助于活力素在腫瘤治療方面的潛在應(yīng)用。

［1］唐慶九，張勁松，潘迎捷，等.靈芝孢子粉堿提多糖對小鼠巨噬細胞的免疫調(diào)節(jié)作用［J］.細胞與分子免疫學(xué)雜志，2004，20（2）：142－144.

［2］陳雪華，朱正綱，馬安倫，等.靈芝孢子粉對荷HAC小鼠抗腫瘤的實驗性研究［J］.上海免疫學(xué)雜志，2000，20（2）：101－103.

［3］Bao XF，Duan JY，F(xiàn)ang XY，etal.Chemical modificational of the（1－3）－α－D－glucan from spores of Ganodermalucidum and investigation of their physicochemical properties and immunological activity［J］.Carbohydr Res，2001，336（2）：127－140.

［4］Bao XF，Liu CP，F(xiàn)ang JN，etal.Sturcturctural and immunological studies of a major polysaccharide from spores of Canodermalucidum （Fr.Karst）［J］.Carbohydr Res，2001，332（1）：67－74.

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［7］梁月琴.硒與乳腺癌［J］.微量元素與健康研究，1997，14（3）：59－60.

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Study on Inhibition Effect of Vigoron Tumor Growth in Ehrlich Ascites Carcinoma（EAC）Tumor Bearing Mice

Wu Xiaodong Zhang Niubua He Rongkai
（1 Tumor Hospital of Guangzhou Medical university，Guangzhou，510095，China；2 School of medicine，Jinan university；3 Guangdong Academy of Agricultural Sciences，Guangzhou，510045，China）

ObjectiveTo acquire some traditional Chinese medicine active components（named vigor）from transformed selenium－containing ganoderma spore by an engineering bacteria which is homology of medicine and food and investigate its anticancer effect alone and its efficacy enhancing and toxicity reducing effect in combination with other anticancer drugs.MethodsVigor and cyclophosphamide were applied in Ehrlich ascites carcinoma（EAC）tumor bearing mice alone and in combination，the mice were randomly divided into control group and experimental groups（including vigor group，cyclophosphamide group and vigor＋cyclophosphamide group），the survival days，body weight and tumor weight were observed.ResultsSurvival days in vigor group were significantly increased，for example，when concentration of vigor was 0.276g/mL，the survival days of mice were increased 24.4%.After 4 weeks treatment，body weight in vigor group was markedly elevated 8.49g compared with control group，whereas body weight in vigor＋cyclophosphamide group was slightly increased 6.9g.Tumor weight in vigor group was 0.531g，less than 0.686 g in control group，the tumor inhibition rate was 22.6%.Tumor weight in cyclophosphamide group and vigor＋cyclophosphamide group were significantly decreased with the tumor inhibition rate was 56.27%and 76.68%，respectively.ConclusionVigor could not only remarkably increase survival time of EAC tumor bearing mice，but also inhibit growth of tumor.In addition，combination of vigor and cyclophosphamide could potentiate anticancer effect and attenuate side effect of chemotherapy drug，which showed anticancer synergy effect.

vigor；anticancer；mice；efficacy enhancing and toxicity reducing

10.3969/j.issn.1672－2779.2014.10.096

1672－2779（2014）－10－0158－03

楊 杰 本文校對：羅 凱

2014－02－08）