霍海波

(安陽市人民醫(yī)院神經(jīng)外科,河南 安陽 455000)

膠質(zhì)瘤是起源于外胚層的最常見惡性腫瘤，其細(xì)胞學(xué)起源、生物學(xué)結(jié)構(gòu)以及其臨床特征均存在特殊性，在顱內(nèi)腫瘤中比例約為35%～61%。膠質(zhì)瘤的特殊性質(zhì)，使其呈浸潤性生長模式，與周圍健康腦組織間接線并不明顯，手術(shù)治療方式很難將其區(qū)分，治療效果不佳〔1，2〕?，F(xiàn)階段，對于惡性腫瘤、膠質(zhì)瘤等表達(dá)甲基鳥嘌呤-DNA-甲基轉(zhuǎn)移酶(MGMT)、P-糖蛋白(P-g p)、拓?fù)洚悩?gòu)酶(Topo Ⅱ)等蛋白的研究內(nèi)容相對豐富，但是三者間相互關(guān)系、對患者預(yù)后影響、多重耐藥與其三種蛋白共同表達(dá)的相關(guān)性以及三者之間的相關(guān)性大小等的研究相對較少〔3〕。本文研究MGMT、TopoⅡα；P-g p在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的相關(guān)性大小及膠質(zhì)瘤細(xì)胞耐藥性的生物學(xué)原理，以期對選擇臨床化療藥物提供有益指導(dǎo)，并最終對膠質(zhì)瘤患者的治療進(jìn)行有效改善，提高患者生存質(zhì)量，延長其生存時間。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2009年3月至2013年9月在本院治療的腦膠質(zhì)瘤患者100例，其中男51例，女49例；年齡21～78〔平均(45±2.3)〕歲。入選標(biāo)準(zhǔn)〔4〕：為經(jīng)臨床表現(xiàn)、影像學(xué)資料、病理生理學(xué)檢測結(jié)果等確診為膠質(zhì)瘤，并知情同意。研究對象均采用手術(shù)治療方式，并在手術(shù)過程中切除膠質(zhì)瘤組織作為生物學(xué)資料?；颊吲R床特點為原發(fā)性膠質(zhì)瘤，且手術(shù)前未經(jīng)過任何方式的治療，病理學(xué)資料在手術(shù)切片后確診為膠質(zhì)瘤。按照WHO在2007年對膠質(zhì)瘤分級標(biāo)準(zhǔn)：膠質(zhì)瘤Ⅰ級6例、Ⅱ級37例、Ⅲ級32例、Ⅳ級25例。對照組為20例正常腦組織，均取自腦外傷進(jìn)行顱腦外科手術(shù)時腦組織切片，經(jīng)病理學(xué)檢測后證實無膠質(zhì)瘤。

1.2MGMT、Topo Ⅱ α、P-g p檢測方法 對研究對象采樣后切片處理，并用免疫組化二步法進(jìn)行染色處理，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，蘇木素進(jìn)行復(fù)染，用中性樹脂封片后采用顯微鏡進(jìn)行觀察。陽性標(biāo)志是在光鏡觀察，可見組織細(xì)胞內(nèi)有明顯棕黃色或是棕褐色顆粒，此外還可以隨機選擇高倍鏡視野10個，分別對其進(jìn)行500個細(xì)胞計數(shù)，然后計算陽性細(xì)胞百分比，陰性標(biāo)準(zhǔn)為陽性細(xì)胞百分比<25%，陽性標(biāo)準(zhǔn)為陽性細(xì)胞百分比>25%。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，組間比較采用χ2檢驗，相關(guān)性比較采用Spearman相關(guān)分析法。

2 結(jié) 果

2.1MGMT、Topo Ⅱα、P-g p蛋白的表達(dá) 在研究對象中所有人腦膠質(zhì)瘤Ⅲ～Ⅳ級患者中，MGMT、Topo Ⅱα、P-g p蛋白表達(dá)呈陽性的患者比例分別為71.93%(49/57)、47.37%(27/57)、66.67%(38/57)，膠質(zhì)瘤Ⅰ～Ⅱ級患者中三者表達(dá)比例分別為27.91%(12/43)、32.56%(14/43)、37.56%(16/43)；對照組中該比例均為0(0 /20)。膠質(zhì)瘤各級分別與正常組織比較差異顯著(P<0.01)。

2.2膠質(zhì)瘤中MGMT、Topo Ⅱα、P-g p蛋白表達(dá)的關(guān)系 MGMT與Topo Ⅱα之間不存在相關(guān)性(r=0.192，P>0.05)；Topo Ⅱα、MGMT與 P-g p均呈正相關(guān)(r=0.192,0.482,均P<0.05)。

3 討 論

多重耐藥性(MDR)是若一種化療藥物使某一種惡性腫瘤細(xì)胞對其產(chǎn)生耐藥性后，該腫瘤組織對其他藥理機制不同、化學(xué)結(jié)構(gòu)不同的化療藥物均會產(chǎn)生交叉耐藥性〔5〕。惡性腫瘤疾病化療失敗的主要原因在于MDR基因及其相關(guān)蛋白在組織內(nèi)表達(dá)。目前，研究進(jìn)展表明存在多種DNA修復(fù)基因性質(zhì)與耐藥性基因相似，后被證實與惡性腫瘤的耐藥性具有相關(guān)性，最典型的耐藥性基因為MGMT，其機制研究較為深入。目前，MGMT已被確認(rèn)為烷化劑耐藥基因，其耐藥機制主要是：DNA鳥嘌呤O6上的烷基加合物可以與MGMT相結(jié)合，并且MGMT可以將烷基轉(zhuǎn)移至其第145號半胱氨酸活性位點上，這一過程可以修復(fù)DNA烷基化損傷，后MGMT失去活性，這一過程將DNA交鏈過程阻斷，從而使得機體對化療藥物存在的耐藥性增強。臨床上最為常用的膠質(zhì)瘤化療藥物主要是亞硝脲類烷化劑，該類烷化劑的主要生物學(xué)特點是可以與DNA鏈上鳥嘌呤O6相結(jié)合，然后可以和對應(yīng)的核苷酸結(jié)合，從而形成的DNA交鏈具有極強的細(xì)胞毒性，抗腫瘤性主要由此體現(xiàn)。MGMT對亞硝脲類烷化劑耐藥的主要原理在于其可以將DNA分子異常的O6甲基轉(zhuǎn)移，修復(fù)化療藥物對堿基的損傷。因此，若患者M(jìn)GMT表達(dá)陽性率較高，不應(yīng)選擇鹽酸嘧啶亞硝脲(ACNU)等亞硝脲類烷化劑來進(jìn)行化療〔6〕。

本研究結(jié)果表明烷化劑類化療藥在治療膠質(zhì)瘤過程中可能會出現(xiàn)較高耐藥性。為解決此類問題，烷化劑替莫唑胺(TMZ)是一種可以治療膠質(zhì)瘤的新藥，可以很好地解決MGMT耐藥性的問題，其主要機制在于其可以不經(jīng)肝臟循環(huán)直接穿透血腦屏障，對MGMT的活性進(jìn)行有效抑制，從而更好地殺滅腫瘤細(xì)胞。因此，在化療前對患者體內(nèi)膠質(zhì)瘤的MGMT水平進(jìn)行檢測有利于選擇耐藥性更低的化療藥物。

Topo-Ⅱα與P-g p都是與膠質(zhì)瘤病理分級相關(guān)性較強的一類蛋白〔7〕。Topo-Ⅱα是存在于S～M期細(xì)胞核內(nèi)的重要核酶，在ATP催化后發(fā)揮其生物學(xué)活性。DNA、Topo-Ⅱα之間會形成易斷復(fù)合物，對機體膠質(zhì)瘤進(jìn)行化療藥物可以與這種易斷復(fù)合物結(jié)合，從而對Topo-Ⅱα引導(dǎo)下的DNA再連接反應(yīng)進(jìn)行有效干擾，使得DNA單鏈或雙鏈發(fā)生斷裂反應(yīng)，造成細(xì)胞殺傷，達(dá)到治療目的。耐藥機制〔8〕主要為：(1)基因突變〔9〕或表達(dá)缺失、酶活性降低或是酶量減少，導(dǎo)致抗癌化療藥物作用靶點喪失；(2)與其他耐藥性基因調(diào)控機制相似，從而對其他耐藥基因產(chǎn)生調(diào)控作用，使其他耐藥基因發(fā)生表達(dá)。P-g p表現(xiàn)為能量依賴性藥泵的特點，其耐藥性的特點在于可以將細(xì)胞內(nèi)化療藥物清除，轉(zhuǎn)移到細(xì)胞外，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性。簡而言之，若是可以預(yù)防或修復(fù)化療藥物對機體細(xì)胞中造成的DNA損傷，則該基因的表現(xiàn)性狀為耐藥性〔10〕。若膠質(zhì)瘤患者組織細(xì)胞中Topo-Ⅱα表達(dá)率較高，則表明該患者體內(nèi)腫瘤組織增殖活性較高，但也表明化療藥物，如鬼臼毒素、胺丫睫等對膠質(zhì)瘤患者較為敏感，化療效果較好〔11〕。本研究表明膠質(zhì)瘤病理分級越高，其采用自身突變等方式從而達(dá)到控制Topo-Ⅱα表達(dá)率，導(dǎo)致藥物作用位點數(shù)量下降，由化療藥物引導(dǎo)產(chǎn)生的DNA斷裂得到控制，藥物對腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的毒效應(yīng)也相應(yīng)降低，若相關(guān)藥物，如胺丫睫、鬼臼毒素等以Topo-Ⅱα作為重要作用位點，則其作用無法發(fā)揮。膠質(zhì)瘤病理分級越高，Topo-Ⅱα表達(dá)較強的患者，其治療方案應(yīng)該對以Topo-Ⅱα作為藥用位點的藥物選擇持謹(jǐn)慎態(tài)度。

綜上，MGMT、P-g p和Topo-Ⅱα在正常腦組織中均不能表達(dá)，但在膠質(zhì)瘤組織中三種蛋白均出現(xiàn)表達(dá)現(xiàn)象，這表明三種蛋白的高表達(dá)可能與膠質(zhì)瘤具有一定相關(guān)性〔12〕。同時P-g p蛋白與Topo-Ⅱα、MGMT之間相關(guān)性較強。不同蛋白對應(yīng)耐藥機制，另外對相應(yīng)的化療藥物不盡相同，但聯(lián)合檢測多種耐藥蛋白在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)，可能對預(yù)測患者的耐藥及指導(dǎo)臨床合理用藥有重要意義。

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