周金慧 郭偉華 李熠 吳黎明 薛曉鋒 張金振 陳芳 陳蘭珍 王鵬 黃京平 金玥 趙靜

（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所，農(nóng)業(yè)部蜂產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心，北京100093）

2013年國(guó)內(nèi)外蜂產(chǎn)品質(zhì)量安全研究進(jìn)展

周金慧 郭偉華 李熠 吳黎明 薛曉鋒 張金振 陳芳 陳蘭珍 王鵬 黃京平 金玥 趙靜

（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所，農(nóng)業(yè)部蜂產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心，北京100093）

本文總結(jié)了2013年國(guó)內(nèi)外蜂產(chǎn)品質(zhì)量安全研究的概況和進(jìn)展，分析了國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)的數(shù)據(jù)庫(kù)分布和研究領(lǐng)域分布情況。以實(shí)際的研究?jī)?nèi)容展現(xiàn)了蜂產(chǎn)品質(zhì)量安全研究的最新進(jìn)展，包括農(nóng)獸藥的多殘留檢測(cè)、新穎的樣品前處理方法、多種金屬元素的同時(shí)分析以及利用不同的分析工具分析蜂產(chǎn)品中的內(nèi)源性活性組分。這些研究對(duì)于拓展我國(guó)蜂產(chǎn)品質(zhì)量安全研究提供了思路，為提升蜂產(chǎn)品檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度和靈敏性和時(shí)效性起著積極的促進(jìn)作用。

蜂產(chǎn)品，多殘留分析，真實(shí)性分析，金屬元素，活性組分

2013 年與蜂產(chǎn)品質(zhì)量安全相關(guān)的研究主要涉及農(nóng)藥和獸藥的殘留檢測(cè)分析、活性組分分析，金屬元素分析和溯源分析。其中農(nóng)藥和獸藥殘留檢測(cè)分析主要集中于多殘留檢測(cè)方法的建立，如數(shù)十種獸藥和數(shù)百種農(nóng)藥的分析，還涉及利用先進(jìn)的前處理方法提取蜂產(chǎn)品中殘留的污染物；活性組分分析主要集中于糖類物質(zhì)和易揮發(fā)組分,如酚酸和酚醛的研究；金屬元素分析主要是常量和痕量元素的研究，而溯源分析側(cè)重于利用不同的儀器分析方法對(duì)蜜源植物種類和摻假鑒別進(jìn)行研究。本文對(duì)2013年國(guó)內(nèi)外與蜂產(chǎn)品質(zhì)量安全相關(guān)的文獻(xiàn)進(jìn)行分析，進(jìn)而探索不同種類的蜂產(chǎn)品檢測(cè)方法的研究思路。

1 文獻(xiàn)分布情況

2013 年度截止至12月初，根據(jù)從美國(guó)湯姆森科技信息集團(tuán)（web of science）、Google Scholar，Sciencedirect、Springerlink、EBSCO、美國(guó)分析化學(xué)協(xié)會(huì)（ACS）、英國(guó)分析化學(xué)協(xié)會(huì)（RSC）和Wiley等數(shù)據(jù)庫(kù)搜索結(jié)果顯示，2013年大約有133篇被SCI期刊收錄的與蜂產(chǎn)品質(zhì)量安全相關(guān)的英文文獻(xiàn)，涉及蜂蜜的有102篇、蜂王漿5篇、蜂膠21篇和蜂花粉5篇。

從中國(guó)知網(wǎng)、維普網(wǎng)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)知識(shí)服務(wù)平臺(tái)和國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局檢索數(shù)據(jù)庫(kù)的數(shù)據(jù)顯示，2013年與蜂產(chǎn)品質(zhì)量安全相關(guān)的中文學(xué)術(shù)文獻(xiàn)約為111篇，涉及蜂蜜的有54篇、蜂王漿11篇、蜂膠35篇、蜂蠟1篇，蜂花粉10篇，主要涉及蜂產(chǎn)品中的獸藥和農(nóng)藥殘留，重金屬以及溯源分析。

2 研究進(jìn)展

2.1 獸藥殘留分析

免疫傳感器技術(shù)已經(jīng)被用來(lái)分析蜂蜜樣品中抗生素殘留。Valera E[1]利用基于標(biāo)記CdS納米粒子的特異性抗體的免疫傳感器分析蜂蜜中磺胺類抗生素藥物殘留。免疫傳感器使用免疫試劑專門用來(lái)廣泛識(shí)別磺胺類藥物，一個(gè)石墨復(fù)合電極，生物功能性的磁性粒子和通過(guò)在特異性抗體標(biāo)記CdS納米粒子來(lái)實(shí)現(xiàn)的電化學(xué)納米探針。免疫反應(yīng)后，CdS納米粒子溶解，釋放的金屬離子在電極被還原并且被陽(yáng)極剝離技術(shù)以電流或電荷信號(hào)讀出。由于CdS納米粒子產(chǎn)生的安培型信號(hào)的放大作用使其能達(dá)到高的檢測(cè)能力。因此，在緩沖溶液內(nèi)可檢測(cè)到磺胺嘧啶濃度為0.20±0.25μg/L。磁性粒子的使用將基質(zhì)效應(yīng)最大程度的降低，并且檢出限達(dá)到0.11μg/kg，遠(yuǎn)低于一些國(guó)家分析蜂蜜中此類化合物的檢出限。磁性分離架的使用能夠同時(shí)分析多個(gè)樣品，整個(gè)分析過(guò)程約在22min內(nèi)完成。激光二極管熱解析-大氣壓化學(xué)電離-串聯(lián)質(zhì)譜法也可以快速分析蜂蜜中氯霉素。

激光二極管熱解析是一種與液相色譜完全不同的分析技術(shù)。將2～10μL的樣品注入到96孔板中。每一個(gè)孔底部植入一塊金屬。將該盤室溫干燥。用激光二極管加熱孔，使干燥的樣品迅速產(chǎn)生熱解析。完整的熱解析分子被載氣帶入到大氣壓化學(xué)電離區(qū)域進(jìn)行離子化。大氣壓化學(xué)電離不需要溶劑或流動(dòng)相就可以完成，這改變了離子化的特征，可以分析那些在普通大氣壓化學(xué)電離不能有效離子化的化合物?；诩す舛O管熱解析(LDTD)和大氣壓化學(xué)電離串聯(lián)質(zhì)譜(APCI-MS/MS)是一種高通量，快速，可靠的用來(lái)定性和定量分析蜂蜜中氯霉素殘留的方法。與傳統(tǒng)的色譜法分析需要幾分鐘相比，本方法全部分析時(shí)間小于6秒，本研究證明了LDTD-APCI-MS/MS能被用來(lái)快速有效地定量分析蜂蜜中的氯霉素殘留[2]。

攪拌棒吸附萃取是一種新型的固相微萃取樣品前處理技術(shù),具有固定相體積大、萃取容量高、無(wú)需外加攪拌子、可避免競(jìng)爭(zhēng)性吸附、能在自身攪拌的同時(shí)實(shí)現(xiàn)萃取富集等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于食品、環(huán)境和生物樣品分析的前處理。其主要原理是在磁力攪拌器上放置一個(gè)特殊的磁力攪拌棒，攪拌棒表面帶有一個(gè)聚二甲基硅烷（PDMS）涂層，可以很有效地從水基質(zhì)中萃取有機(jī)組分。攪拌棒吸附萃取技術(shù)結(jié)合液相色譜-電噴霧-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)可以靈敏地檢測(cè)蜂蜜中青霉素。采用一種方便靈敏的方法檢測(cè)蜂蜜中六種青霉素（阿莫西林、氨芐青霉素、盤尼西林、苯唑青霉素、氯唑西林和雙唑青霉素）。蜂蜜樣品用水稀釋，然后基于聚合（乙烯基咪唑、二乙烯苯）單片電路材料作為涂層直接攪拌棒吸附萃取處理。對(duì)萃取參數(shù)包括萃取和解析時(shí)間，pH值，離子強(qiáng)度在基質(zhì)中進(jìn)行了詳細(xì)的研究。在最優(yōu)提取條件下，估算的目標(biāo)物檢測(cè)限低至蜂蜜中0.18～1.42 ng/kg。本方法成功的應(yīng)用到蜂蜜中青霉素殘留分析中[3]。

多殘留檢測(cè)技術(shù)是近年來(lái)獸藥和農(nóng)藥研究的熱點(diǎn)。王偉等[4]建立了同時(shí)測(cè)定蜂蜜中60種獸藥殘留的LC-MS/MS檢測(cè)方法。蜂蜜樣品采用Mcllvaine緩沖溶液(pH＝4)稀釋，5%乙酸乙腈提取，提取液經(jīng)鹽析，NH2吸附劑分散固相萃取凈化，LC-MS/MS動(dòng)態(tài)多反應(yīng)監(jiān)控模式測(cè)定。對(duì)16個(gè)市售蜂蜜樣品進(jìn)行測(cè)定，其中5個(gè)樣品中檢出磺胺類、喹諾酮類、硝基咪唑類等獸藥殘留。該方法具有一次處理樣品，可同時(shí)測(cè)定60種獸藥殘留的特點(diǎn)，適合于蜂蜜中多類獸藥的高通量篩查檢測(cè)。

湍流色譜是一種直接進(jìn)樣預(yù)處理技術(shù)，采用5～10 mL/min的高流速，形成非線性的液流，加快待測(cè)物在吸附劑上的分布速度，使得大分子的生物基質(zhì)成分與小分子藥物得到良好分離?；谕牧髁鲃?dòng)的液相色譜法結(jié)合超高效液相色譜-軌道阱質(zhì)譜也能夠快速半自動(dòng)分析蜂蜜中獸藥殘留[5]。建立一種采用湍流流動(dòng)的液相色譜法結(jié)合超高效液相色譜-軌道阱質(zhì)譜 (TFC-UHPLC-Orbitrap-MS)簡(jiǎn)單快速地用于檢測(cè)蜂蜜中40種獸藥殘留的方法。樣品用含有Na2EDTA的水溶液稀釋。然后注入到配備有湍流流動(dòng)柱的液相色譜儀，之后分析物轉(zhuǎn)移到配備有軌道阱質(zhì)譜檢測(cè)器的超高效液相色譜分析柱中。對(duì)于大多數(shù)化合物，在三個(gè)濃度條件水平的平均回收率范圍是68~121%。該方法快速，省力并可應(yīng)用到蜂蜜樣品分析中。

分散液相微萃取是最近發(fā)展起來(lái)的一種新型樣品前處理技術(shù)，該方法操作簡(jiǎn)單、成本低、富集效率高、所需有機(jī)溶劑用量極少，是一種環(huán)境友好的液相微萃取新技術(shù)。通過(guò)建立固相萃取和分散液液微萃取 (SPEDLLME)結(jié)合的方法可以檢測(cè)蜂蜜中的新煙堿類殺蟲劑[6]。固相萃取凈化后，乙腈洗脫分析物。液液微萃取通過(guò)將乙腈提取液快速注入到含10% (w/v)NaCl和100μL CHCl3的水中來(lái)實(shí)現(xiàn)。離心后有機(jī)相蒸干，乙腈復(fù)溶，用二極管陣列-液相色譜上機(jī)檢測(cè)。二極管陣列檢測(cè)器 (DAD)和大氣壓化學(xué)電離-離子阱-串聯(lián)質(zhì)譜(APCI-IT-MS/MS)?；|(zhì)效應(yīng)通過(guò)使用二極管陣列檢測(cè)器時(shí)外部水校準(zhǔn)來(lái)評(píng)價(jià)和定量，基質(zhì)匹配校準(zhǔn)方法應(yīng)用于MS/MS中。采用DAD和MS/MS方法分析新煙堿類殺蟲劑，檢測(cè)限分別可達(dá)到0.2～1.0和0.02～0.13 ng/ g。

分子印跡技術(shù)是指將各種生物大分子從凝膠轉(zhuǎn)移到一種固定基質(zhì)上的過(guò)程。當(dāng)模板分子（印跡分子）與聚合物單體接觸時(shí)會(huì)形成多重作用點(diǎn)，通過(guò)聚合過(guò)程這種作用就會(huì)被記憶下來(lái)，當(dāng)模板分子除去后，聚合物中就形成了與模板分子空間構(gòu)型相匹配的具有多重作用點(diǎn)的空穴，這樣的空穴將對(duì)模板分子及其類似物具有選擇識(shí)別特性。一種新的印有氧氟沙星的分子印記預(yù)柱在線固相萃取技術(shù)結(jié)合反相高效液相色譜方法可以分析蜂蜜中喹諾酮類藥物的殘留檢測(cè)[7]。分子印記整體柱在不銹鋼色譜柱原位聚合制備，用甲基丙烯酸作為功能單體，乙二醇二甲基丙烯酸酯作為交聯(lián)劑，氯仿和十二烷醇作為混和溶劑。研究了最佳的合成條件和在線固相萃取條件。分子印記整體柱通過(guò)斯卡查德分析和突破曲線分別得出最大的結(jié)合能力 (51.50 mg/g)和動(dòng)態(tài)結(jié)合能力(434.92μg/mL)，高于非分子印記整體柱(43.15mg/g和96.52 μg/mL)。

煙曲霉素(Fumagillin)，又叫夫馬潔林，是由煙曲霉(Aspergillus fumigatus)的發(fā)酵培養(yǎng)液中分離得到的一種抗生素。煙曲霉素作為防治微孢子蟲病特效藥在蜜蜂養(yǎng)殖中被廣泛的應(yīng)用,這必然導(dǎo)致其殘留問(wèn)題，而研究表明，煙曲霉素除具有抗生素活性外，還具有致癌作用并且可誘發(fā)遺傳毒性[8]。煙曲霉素通過(guò)反相聚合物固相提取分離和濃縮。最終的提取液用電噴霧-液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC/MS/MS）法在正模式下分析，甲酸和甲酸胺乙腈作為流動(dòng)相，利用不同廠家的兩種分析系統(tǒng)來(lái)測(cè)定方法的不確定性。LC/MS/MS法用來(lái)檢測(cè)煙曲霉素經(jīng)驗(yàn)證的總的回收率是99.3%，5.9%的精度，擴(kuò)大的不確定度是13.2%。該法已經(jīng)成功的應(yīng)用到來(lái)自于加拿大食品檢驗(yàn)局煙曲霉素檢驗(yàn)項(xiàng)目部分的30個(gè)蜂蜜樣品的檢測(cè)中，同時(shí)也通過(guò)能力測(cè)試評(píng)估，對(duì)其進(jìn)行粗略估計(jì)，并且證明該法是適合實(shí)際應(yīng)用的[9]。

2.2 溯源分析

氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜和頂空進(jìn)樣技術(shù)結(jié)合分析蜂蜜樣品中的易揮發(fā)組分，通過(guò)尋找這些組分含量的差異進(jìn)而判斷蜂蜜的植物源和地理源特征，尤其是頂空固相微萃取-二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)（SPME-GC×GC-TOF/MS）已經(jīng)成為蜂蜜溯源分析的主要工具。由于蜂蜜基質(zhì)的復(fù)雜性，頂空固相微萃取（二乙烯基苯/Carboxen/涂層纖維聚二甲基硅氧烷）結(jié)合二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜(GC×GC-TOF/MS)用于分析來(lái)自于波蘭不同地理位置蜂蜜的揮發(fā)性有機(jī)化合物成分[10]。在金合歡、椴樹、油菜籽、蕎麥和蜜露等蜂蜜中共發(fā)現(xiàn)并確認(rèn)了329種化合物，其中82種化合物通過(guò)分析物標(biāo)準(zhǔn)識(shí)別，實(shí)驗(yàn)性認(rèn)證的247種化合物基于分別將解卷積質(zhì)譜和線性程序升溫保留指數(shù)與NIST 2005圖書館和文獻(xiàn)值比較。很多波蘭蜂蜜確證的揮發(fā)性物質(zhì)也普遍存在于歐洲其他地理區(qū)域（如意大利科西嘉島）。這些易揮發(fā)組分包括非環(huán)和環(huán)狀烷烴、非環(huán)和環(huán)狀烯烴、芳香烴、氧化芳香烴、醇類、醛類、酮類、醚類、腈類、有機(jī)硫化物、多酚類化合物和萜類。相同類型蜂蜜的GC×GC-TOF/MS圖譜是非常相似的，在所有化合物中選出了8個(gè)植物源類別。通過(guò)比較真實(shí)的標(biāo)準(zhǔn)確認(rèn)識(shí)別。而且，驗(yàn)證了波蘭蜂蜜的可能地理區(qū)分，包括19個(gè)金合歡、3個(gè)油菜和蕎麥、6個(gè)蜜露蜂蜜。

將電化學(xué)傳感器和化學(xué)計(jì)量學(xué)分析結(jié)合也為分析蜂蜜中大米糖漿摻假提供了很好的研究思路。采用一個(gè)簡(jiǎn)單的電化學(xué)傳感器結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)方法基于抗氧化物質(zhì)的減少分析中國(guó)當(dāng)歸蜂蜜大米糖漿摻假[11]。當(dāng)蜂蜜摻入大米糖漿后，循環(huán)伏安圖會(huì)有明顯的改變。首次從循環(huán)伏安圖里的電化學(xué)信號(hào)中提取出十二個(gè)變量特征。電流和數(shù)量的變量在主成分分析處理后進(jìn)行判別分析中起著重要作用。主成分分析線性判別分析(PCA-LDA)和LDA模型能夠很好的鑒別真假蜂蜜，識(shí)別率均達(dá)到100%。蜂蜜摻假的定量分析中，多元線性回歸(MLR)模型能夠準(zhǔn)確地在12個(gè)主成分中預(yù)測(cè)R-c 0.921和R-p 0.898。這說(shuō)明，電子傳感器結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)分析方法在鑒別蜂蜜及其他食物中摻假中有巨大的潛力。此外，研究表明，將紫外光譜法結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)分析鑒定單花蜜中，如也門錫德蜂蜜[12]。用13種真實(shí)的錫德蜂蜜構(gòu)建模型，25個(gè)不同植物源樣品進(jìn)行驗(yàn)證。HCA和PCA分析成功地建立了初步聚類模型并區(qū)分真實(shí)蜂蜜，低價(jià)格的本地多花蜜和非錫德蜂蜜。SIMCA模型能有明確清晰的界定樣品，用來(lái)鑒別真實(shí)Sidr蜂蜜并且通過(guò)檢測(cè)限＞10%檢測(cè)價(jià)格低的多花蜜添加物。

(未完待續(xù))

A review 2013：Domestic and international research on quality safety of bee products

Zhou Jinhui,Guo Weihua,Li Yi,Wu Liming,Xue Xiaofeng,Zhang Jinzhen, Chen Fang,Chen Lanzhen,Wang Peng,Huang Jingping,Yue Jin,Zhao Jing*

This review summarized the domestic and international research on quality safety of bee products and present the distribution of literatures in database and research field.Using data and results from the research in 2013, plus 27 new references from 224 papers,the latest research progeress was provided.We have made a brief summary about multi-residue analysis of veterinary medicine,pesticides and trace elements,endogenous compositions and the latest methods of sample preparaton in bee products.This review has broadened outlook of studies of quality safety in bee products,improved effectiveness,accuracy and rapidity of the developed method,especially for the routine analysis.

bee products,multi-residue residue,authenticity analysis,the minerals,active compositions

國(guó)家蜂產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)資金資助(CARS-45)和國(guó)家自然科學(xué)基金(Project No.31201859)

趙靜，研究員，從事蜂產(chǎn)品質(zhì)量安全研究與評(píng)價(jià)工作，E－mail:zhaojingjun@sina.com.