張 勇，黃愛文，宋洪濤

(中國人民解放軍南京軍區(qū)福州總醫(yī)院藥學(xué)科，福建 福州 350025)

多效胃鏡乳是我院研制的一種一次性給藥即可同時達到局部麻醉、解痙、消泡、潤滑和減少分泌效果的胃鏡乳，是由鹽酸達克羅寧、消旋山莨菪堿、二甲基硅油、西黃蓍膠等在80 ℃條件下乳化制成的復(fù)方制劑。鹽酸達克羅寧化學(xué)名稱為對-丁氧-β-哌啶苯基乙基酮，是一種起效快、作用時間長、不良反應(yīng)小、安全性高的局部麻醉藥[1-2]。原標(biāo)準(zhǔn)中鹽酸達克羅寧的含量測定方法為紫外-可見分光光度法(UV 法)的一階導(dǎo)數(shù)法，實際應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)其測定結(jié)果較實際含量高，且原標(biāo)準(zhǔn)中沒有收錄消旋山莨菪堿的含量測定方法[3-4]。為了保證該制劑的臨床療效和控制其質(zhì)量，本試驗中建立了測定制劑中鹽酸達克羅寧和消旋山莨菪堿含量的高效液相色譜(HPLC)法，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200 型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)。多效胃鏡乳(南京軍區(qū)福州總醫(yī)院制劑室，批號為130922，130923，130924);鹽酸達克羅寧對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號為100423-201102);消旋山莨菪堿對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號為100249 -200902);甲醇為色譜純，水為純化水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 鹽酸達克羅寧含量測定

2.1.1 色譜條件

色譜柱:Ecilent XDB-CN 柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm，美國安捷倫公司);流動相:0.01 mol/L 磷酸二氫鉀溶液(含0.15% 三乙胺溶液，用磷酸調(diào)pH 至6.5)-甲醇(20 ∶80);檢測波長:282 nm;流速:1.0 mL/min;進樣量:10 μL;柱溫:30 ℃。

2.1.2 溶液制備

振搖供試品2 min，取約2.5 g，精密稱定，置50 mL 容量瓶中，加0.05 mol/L 鹽酸10 mL，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為供試品貯備液;精密量取5 mL 貯備液，置100 mL 容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL 中約含25 μg 的溶液，用0.22 μm 微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。取鹽酸達克羅寧對照品約50 mg，精密稱定，置50 mL 容量瓶中，加0.05 mol/L 鹽酸10 mL，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液;精密量取2.5 mL 貯備液，置10 mL 容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，用0.22 μm微孔濾膜濾過，作為對照品溶液。按處方量除不加鹽酸達克羅寧外其他成分制備陰性樣品，并按供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。

2.1.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗:取2.1.2 項下3 種溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，色譜圖見圖1。結(jié)果表明，方中其他成分及輔料對鹽酸達克羅寧的測定無干擾，方法專屬性好，鹽酸達克羅寧的保留時間約為5.2 min，分離度為8.38，理論板數(shù)為11 875。

圖1 鹽酸達克羅寧高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密量取鹽酸達克羅寧對照品貯備液0.75，1.50，2.50，5.00，7.50 mL，分別置100 mL 容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，分別進樣10 μL，記錄色譜圖。以鹽酸達克羅寧質(zhì)量濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)(X)、相應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進行線性回歸，得線性回歸方程Y=29.18 X+12.114，r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明，鹽酸達克羅寧質(zhì)量濃度在7.5 ～75.0 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液，重復(fù)進樣6 次，按鹽酸達克羅寧色譜條件測定其含量。結(jié)果的RSD 為0.098%(n=6)，表明儀器精密度良好。

加樣回收試驗:按處方量比例稱取處方中除鹽酸達克羅寧外所有組分(約相當(dāng)于多效胃鏡乳0.125 g )共9 份，置25 mL 容量瓶中，3 份為一組，各組分別精密加入鹽酸達克羅寧對照品貯備液(976.044 μg/mL)0.75，0.625，0.500 mL，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，制得所需溶液，按鹽酸達克羅寧色譜條件測定其含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗結(jié)果(n=9)

重復(fù)性試驗:取同一批樣品6 份，依法制備供試品溶液，按鹽酸達克羅寧色譜條件測定含量。結(jié)果的RSD 為0.43%(n=6)，表明該方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，室溫下放置，分別于0，2，4，6，8，10，12，24 h 時測定鹽酸達克羅寧的峰面積。結(jié)果的RSD為0.33%(n=8)，表明供試品溶液在24 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.1.4 樣品含量測定

精密稱取樣品適量，按供試品溶液制備方法進行處理，取10 μL 注入液相色譜儀，記錄色譜圖;另取鹽酸達克羅寧對照品適量，制成每1 mL 中約含鹽酸達克羅寧25 μg 溶液，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計算。3 批樣品中鹽酸達克羅寧含量測定結(jié)果見表2?？梢?，3 批樣品中鹽酸達克羅寧含量均為標(biāo)示含量的90.0% ～110.0%，符合規(guī)定。

另配制3 批多效胃鏡乳及不含鹽酸達克羅寧的陰性對照品，分別以新建立的HPLC 法和原標(biāo)準(zhǔn)中UV 法進行含量測定，結(jié)果見表2。原UV 法為，振搖供試品2 min，精密量取供試品1 mL，置100 mL 容量瓶中，加入0.05 mol/L 硫酸溶液至刻度，振搖使溶解;精密量取10 mL，置50 mL 容量瓶中，用0.05 mol/L 硫酸溶液至刻度，搖勻，用0.45 μm 水性微孔濾膜濾過;濾液按標(biāo)準(zhǔn)曲線項下方法測定吸光度值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計算含量。結(jié)果表明，3 批樣品中，2 種方法對比，UV 法測得值均比HPLC 法高約4%。

2.2 消旋山莨菪堿含量測定

2.2.1 色譜條件

色譜柱:Ecilent XDB-CN 柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm，美國安捷倫公司);流動相:0.01 mol/L 磷酸二氫鉀溶液(含0.15%三乙胺溶液，用磷酸調(diào)pH 至6.5)-甲醇(75 ∶25);檢測波長:220 nm;流速:1.0 mL/min;進樣量:10 μL;柱溫:30 ℃。

表2 樣品含量測定結(jié)果(標(biāo)示量的%)

2.2.2 溶液制備

振搖供試品2 min，取約2.5 g，精密稱定，置50 mL 容量瓶中，加0.05 mol/L 鹽酸10 mL，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL 中約含50 μg 的溶液，用0.22 μm 微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。取消旋山莨菪堿對照品約10 mg，精密稱定，置200 mL 容量瓶中，加0.05 mol/L 鹽酸20 mL，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.22 μm 微孔濾膜濾過，作為對照品溶液。按處方量除不加消旋山莨菪堿外的其他組分制備陰性樣品，并按供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗:取2.2.2 項下3 種溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，色譜圖見圖2。結(jié)果表明，其他成分及輔料對測定無干擾，方法專屬性好，消旋山莨菪堿順、反式異構(gòu)體的保留時間分別約為9.1 min 和10.2 min，分離度分別為11.88 和2.24，理論板數(shù)分別為9 090 和8 858。

圖2 消旋山莨菪堿高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密量取消旋山莨菪堿對照品貯備液0.5，1.5，2.5，4.0，5.0 mL，分別置10 mL 容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，分別進樣10 μL，記錄色譜圖。以消旋山莨菪堿質(zhì)量濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)(X)、消旋山莨菪堿順及反式異構(gòu)體的峰面積和為縱坐標(biāo)(Y)進行線性回歸，得線性回歸方程Y=6.190 1 X+5.413 9，r = 0.999 9(n = 5)。結(jié)果表明，消旋山莨菪堿質(zhì)量濃度在10 ～100 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積和線性關(guān)系良好。

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液，重復(fù)進樣6 次，按消旋山莨菪堿色譜條件測定其含量。結(jié)果的RSD=0.37%(n=6)，表明儀器精密度良好。

加樣回收試驗:按處方量比例稱取處方中除消旋山莨菪堿外所有組分(約相當(dāng)于多效胃鏡乳1.25 g )共9 份，置25 mL 容量瓶中，3 份為一組，各組分別精密加入消旋山莨菪堿對照品貯備液(204 μg/mL)7.50，6.25，5.00 mL，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，制得所需溶液，按消旋山莨菪堿色譜條件測定其含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

重復(fù)性試驗:取同一批樣品6 份，依法制備供試品溶液，按消旋山莨菪堿色譜條件測定其含量。結(jié)果的RSD 為0.98%(n=6)，表明該方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，置室溫下放置，分別于0，2，4，6，8，10，12，24 h 時測定消旋山莨菪堿的峰面積。結(jié)果的RSD為1.03%(n=8)，表明供試品溶液在24 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.4 樣品含量測定

精密稱取樣品適量，按供試品溶液制備方法進行處理，取10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖;另取消旋山莨菪堿對照品適量，制成每1 mL 中約含消旋山莨菪堿50 μg 溶液，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計算。3 批樣品消旋山莨菪堿含量測定結(jié)果見表2。結(jié)果表明，3 批樣品中消旋山莨菪堿含量均為標(biāo)示含量的90.0% ～110.0%，符合規(guī)定。

3 討論

鹽酸達克羅寧和消旋山莨菪堿均有較強的水溶性，水溶液均在酸性條件下穩(wěn)定。鹽酸達克羅寧在282 nm 波長處有最大吸收;消旋山莨菪堿在220 nm 波長處有最大吸收，且在282 nm 波長處基本無吸收。經(jīng)試驗，確定了文中的色譜條件，結(jié)果兩成分色譜峰均峰形對稱，分離度良好，柱效較高。

分別以HPLC 法和原標(biāo)準(zhǔn)中的UV 法對3 批樣品及不含鹽酸達克羅寧的陰性對照品進行鹽酸達克羅寧的含量測定，結(jié)果表明，UV 法測得值均比HPLC 法高約4%。UV 法的二階導(dǎo)數(shù)法不能排除陰性溶液的干擾，專屬性差。HPLC 法專屬性好、分離度較好、簡便、準(zhǔn)確，可作為多效胃鏡乳的質(zhì)量控制方法。

多效胃鏡乳為我院自制非標(biāo)制劑，原標(biāo)準(zhǔn)收錄的含量測定項下只有鹽酸達克羅寧的UV 法的二階導(dǎo)數(shù)法，本試驗將原有鹽酸達克羅寧含量測定方法改進為HPLC 法，并增加了測定消旋山莨菪堿含量的HPLC 法。HPLC 法對以上兩成分具有良好的專屬性及穩(wěn)定性，擬收錄到非標(biāo)制劑標(biāo)準(zhǔn)中的含量測定項下，以進一步完善標(biāo)準(zhǔn)，更好地控制制劑質(zhì)量，確保臨床用藥安全、有效。

[1] 劉錫鈞. 實用藥物指南[M]. 北京:人民軍醫(yī)出版社，2000:127.

[2] 陳新謙，金有豫. 新編藥物學(xué)[M]. 第14 版. 北京:人民衛(wèi)生出版社，2000:222.

[3] 王 玨，吳秀華，徐漢琴.HPLC 法同時測定復(fù)方達克羅寧含漱液中主要成分的含量[J]. 藥物分析雜志，2012，32(6):1 010 -1 012.

[4] 凌 宵，徐志洲. HPLC 法測定鹽酸消旋山莨菪堿注射液的含量及有關(guān)物質(zhì)[J]. 藥物分析雜志，2011，31(10):1 947 -1 949.