顧冬花 李國平

不同海產(chǎn)品中副溶性弧菌的監(jiān)測

顧冬花 李國平

（青海省大通縣樺林畜牧獸醫(yī)站 810100） （青海省大通縣斜溝畜牧獸醫(yī)站）

對大通縣幾個農(nóng)貿(mào)市場采集的32份海產(chǎn)品樣品，應(yīng)用常規(guī)細(xì)菌分離法進(jìn)行副溶血性弧菌的檢測，經(jīng)細(xì)菌分離、增菌培養(yǎng)、形態(tài)觀察、染色鏡檢、三塘鐵、生化特性和嗜鹽性試驗測定，檢出的4份陽性菌是副溶血性弧菌，陽性率為12.5%，同時通過小白鼠致病性試驗證明4份陽性菌都有致死效應(yīng)。

不同海產(chǎn)品 副溶血性弧菌 檢測

副溶血性性弧菌(Vibrio Parahaemolyticus, VP)是一種革蘭氏陰性嗜鹽菌(Halophilic bacteria)，最早1950年日本從一次爆發(fā)性食物中毒中分離發(fā)現(xiàn)。主要分布于魚類、海帶、蝦等海洋生物、海水、海底沉積物及其他產(chǎn)品中，人們食用被副溶血性弧菌污染的食品后，引起主要以腹痛、腹瀉、惡心、嘔吐、發(fā)熱為癥狀的食源性疾病。特別是在一些沿海城市由該菌引起的食物中毒占細(xì)菌性食物總數(shù)的比例高達(dá)60%以上[1]。由VP引起的食物中毒占日本食物中毒病例數(shù)的20%~30%[1]。在歐洲和北美地區(qū)也曾多次爆發(fā)過VP食物中毒事件[2]。VP已成為引起細(xì)菌性食物中毒的主要致病菌。為了初步掌握我縣不同種類海產(chǎn)品中VP的帶菌率及污染狀況，降低食源性疾病的發(fā)病率并引起相關(guān)部門的重視，2013年對本縣幾個農(nóng)貿(mào)市場采集的32份不同樣品進(jìn)行VP病原分離，現(xiàn)將結(jié)果報告如下：

1 材料與方法

1.1 樣品來源 隨機抽檢幾個農(nóng)貿(mào)市場樣品32份，包括魚類、貝類、甲殼類。置4℃冰箱備用。

1.2 材料 （1）培養(yǎng)基：3%氯化鈉堿性蛋白胨水((APW)、硫代硫酸鈉-檸檬酸鈉-膽鹽-蔗糖瓊脂(TCBS)平板，3%氯化鈉三糖鐵(TSI)、嗜鹽性胰酪胨肉湯(STB)，氯化鈉蔗糖瓊脂平板，SS平板，3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板TSA，瓊脂斜面，0.3%、6%、8%、10%氯化鈉胰蛋白胨肉湯水及各種生化培養(yǎng)基均由青海大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院動物醫(yī)學(xué)系傳染病實驗室自制。（2）試驗動物：健康昆明系小白鼠5只(14~16g)均購于青海地方病研究所

1.3 方法 按國標(biāo)(GB/T4789.7-2003)中描述對食品中副溶血性弧菌做定性檢測的方法。該方法采用氯化鈉增菌液增菌后，接種于氯化鈉蔗糖瓊脂和選擇性瓊脂平板，可疑菌落經(jīng)氯化鈉三塘鐵斜面、革蘭氏染色和嗜鹽性試驗進(jìn)行初步判斷，最后進(jìn)生化試驗及動物實驗進(jìn)行確定其是否為副溶血性弧菌。

2 結(jié)果

2.1 菌落形態(tài)及培養(yǎng)特性觀察 在嗜鹽性平板上為圓形、邊緣整齊的淺黃色菌落，經(jīng)過2~3次傳代純培養(yǎng)后，呈黃色、光滑、濕潤、隆起、直徑0.2~1mm、中心稍混濁的均勻小菌落；在氯化鈉蔗糖瓊脂平板上為半透明或不透明、直徑2~3mm、沒有粘性圓形菌落；在SS瓊脂平板上為圓形、扁平、光滑濕潤、邊緣整齊、蠟滴狀、直徑1~2mm的菌落；在TCBS平板上有4個藍(lán)綠色可疑菌落生長，菌落邊緣整齊、濕潤半透明、直徑2~4mm、圓形。

2.2 涂片、染色及鏡檢 挑取可疑菌落涂片、革蘭氏染色鏡檢可見到兩端濃染，呈棒狀、弧狀或卵圓狀多形態(tài)的革蘭氏陰性菌。

2.3 3%氯化鈉三糖鐵試驗 底層變黃、斜面變紅、不產(chǎn)氣、不產(chǎn)生硫化氫。

2.4 嗜鹽性試驗 在3%、6%和8%氯化鈉胰胨水中生長良好，0%和10%氯化鈉胰胨水中不生長。

2.5 生化鑒定 結(jié)果見表1。

表1 副溶血性弧菌生化反應(yīng)結(jié)果

注：“+”為陽性；“-”為陰性；

2.6 致病性試驗 4只小白鼠于36~72h內(nèi)死亡，對照組小白鼠飼喂1周仍健活。剖檢采取死亡小白鼠臟器進(jìn)行細(xì)菌分離，獲得與原分離菌株一致的陰性小桿菌，試驗結(jié)果表明原分離菌具有較強的致病性。

2.7 檢測結(jié)果 見表2。

表2 海產(chǎn)品中副溶性弧菌的檢測結(jié)果 （%）

3 討論

（1）在32份樣品中檢出副溶血性弧菌陽性4份，陽性率13.33%。3種樣品(魚類、貝類、甲殼類)中均有不同程度的副溶血性弧菌存在，13份魚類樣品中VP陽性率7.69%；9份貝類中VP陽性率是22.22%；10份甲殼類中VP陽性率是10%。以貝類最高，其次是甲殼類，最低魚類。（2）檢測結(jié)果表明，大通縣市售海產(chǎn)品中存在副溶血性弧菌污染，食用海產(chǎn)品存在一定的安全隱患。由于本縣銷售的海產(chǎn)品均由外省調(diào)入，在運輸或包裝過程中污染VP的機率可能增加，因此，在食用各類海產(chǎn)品時一定要注意對該菌的衛(wèi)生防范，嚴(yán)把食品質(zhì)量關(guān)，避免交叉污染，避免該菌引起食物中毒。（3）從試驗結(jié)果分析，不同種類海產(chǎn)品中副溶血性弧菌帶菌率高低不同，這可能與各自的生活習(xí)性、攝食方式等有關(guān)，如貝類多生活在海底泥沙中，是濾過性攝食，其體內(nèi)副溶血性弧菌濃縮而帶菌率較高[2]。副溶血性弧菌為嗜鹽菌，主要分布于海水和海產(chǎn)品中，生食魚、蝦等海產(chǎn)品可造成本菌食物中毒。這次抽檢的陽性菌株來自冷凍海產(chǎn)品，這說明本縣市售冷凍海產(chǎn)品存在二次污染或交叉污染。（4）預(yù)防副溶血性弧菌食物中毒的措施。在我國由于從業(yè)人員衛(wèi)生意識不強，交叉污染和再次污染的現(xiàn)象經(jīng)常發(fā)生，據(jù)資料反映引起副溶血性弧菌中毒的食物除海產(chǎn)品外，還有涼拌菜和熟食制品等[3-4]。因此，生、熟食物的廚具要分開，用完后進(jìn)行嚴(yán)格的消毒處理。同時，生、熟食物應(yīng)分開放置，避免造成交叉污染，特別是熟食制品[4]。副溶血性弧菌不耐熱，56℃加熱5min，或90℃加熱1min，即可將其殺滅。因此加工過程中要煮熟、煮透。禁止生吃或吃半生不熟的海產(chǎn)品。監(jiān)管部門加大對副溶血性弧菌的污染狀況的監(jiān)控。對污染程度較大的海域可采取禁止捕獲或關(guān)閉養(yǎng)殖場等措施，防止高風(fēng)險食品進(jìn)入消費市場；對污染較輕的海域可采取控制海產(chǎn)品的采收數(shù)量或暫養(yǎng)凈化[5]等措施降低該菌的污染。

[1] 陳瑞英，魯建章. 食品中副溶血性弧菌的危害分析、檢測與預(yù)防控制[J], 食品科學(xué), 2007, 28: 341-347.

[2] 陳炳卿. 營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)第3版[M]. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 1994: 212-214.

[3] 丁建華, 周壽榮一起副溶血清弧菌引起的學(xué)生集體食物中毒[J]. 中國校醫(yī), 2004, 18(12): 155.

[4] 羅坤祿. 一起由副溶血清弧菌引起食物中毒[J]. 報告預(yù)防醫(yī)學(xué)情報雜志, 2004, 20(4): 453-455.

[5] 楊文斌, 王紅美. 海南省中學(xué)一起食物中毒的調(diào)查分析[J]. 中國熱帶醫(yī)學(xué), 2004, 4(2): 258.

[6] ANDREWSLS. Strategies to Control Vibrios in molluscan shellish. Food protection Trends, 2004, 24(2): 70-76.

（2014–02–09）

Q939.14+9

A

1007-1733(2014)05-0017-02