加春生，毛澤明，王曉楠，王俊峰，王龍，陳爽，葛蘭云，徐世文

（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，哈爾濱 150030；2.黑龍江農(nóng)業(yè)工程職業(yè)學(xué)院，哈爾濱 150088；3.哈爾濱鑫廣豐牧業(yè)有限公司，哈爾濱 150030）

豬沙門(mén)氏菌的分離鑒定及其耐藥性分析

加春生1,2，毛澤明3，王曉楠2，王俊峰2，王龍2，陳爽2，葛蘭云2，徐世文1*

（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，哈爾濱 150030；2.黑龍江農(nóng)業(yè)工程職業(yè)學(xué)院，哈爾濱 150088；3.哈爾濱鑫廣豐牧業(yè)有限公司，哈爾濱 150030）

對(duì)哈爾濱地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)沙門(mén)氏菌進(jìn)行分離鑒定，分析其對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物的藥敏試驗(yàn)結(jié)果及耐藥情況。采用病原菌的形態(tài)學(xué)觀察、生化鑒定和PCR鑒定，從600份哈爾濱地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)豬直腸糞便中分離出沙門(mén)氏菌,運(yùn)用Kirby-Bauer法檢測(cè)分離菌對(duì)10種β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物的敏感性。結(jié)果表明，在哈爾濱地區(qū)十市縣的豬群中，沙門(mén)氏菌的總檢出率為5.83%（35/600）；不同市縣沙門(mén)氏菌的總分離率介于3.3%～18.3%；沙門(mén)氏菌的分離率與豬日齡有一定關(guān)系；對(duì)臨床常用抗菌藥物均表現(xiàn)出較高的耐藥性，對(duì)氨芐西林100%耐藥，對(duì)頭孢他啶80%耐藥，對(duì)頭孢西丁、哌拉西林、頭孢噻肟、頭孢吡肟、氨曲南存在不同程度耐藥，對(duì)碳青霉烯類(lèi)敏感。結(jié)果表明，哈爾濱地區(qū)豬場(chǎng)存在不同程度的沙門(mén)氏菌感染，耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重。

豬；沙門(mén)氏菌；分離鑒定；耐藥性

豬沙門(mén)氏菌病又稱(chēng)豬副傷寒[1]，常發(fā)于6月齡以下的仔豬，1～4月齡多發(fā)，臨床上可分為急性（敗血癥）、亞急性和慢性3種類(lèi)型，常引起較高死亡率，其中敗血型病死率達(dá)90%，慢性型病死率達(dá)25%～50%。臨床上常選擇抗生素對(duì)沙門(mén)氏菌進(jìn)行預(yù)防與治療，由于β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素價(jià)格相對(duì)低廉，藥效獨(dú)特應(yīng)用廣泛。但豬群沙門(mén)氏菌對(duì)其產(chǎn)生耐藥性屢見(jiàn)報(bào)道[2]。本文對(duì)哈爾濱地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)的豬沙門(mén)氏菌帶菌情況進(jìn)行分離鑒定，研究其對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素耐藥情況，了解豬沙門(mén)氏菌的流行病學(xué)及耐藥特征，為探討防治沙門(mén)氏菌病提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

2012年8月～2012年12月，從黑龍江省哈爾濱地區(qū)的10個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)，分哺乳（19～23 d）、保育（52～58 d）、生長(zhǎng)（115～125 d）3個(gè)階段，用棉拭子采集臨床健康豬直腸糞便樣本，每個(gè)豬場(chǎng)60份，每個(gè)階段各采集20份，共計(jì)600份，將采集的樣品保存于4℃環(huán)境中，在24 h內(nèi)進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)。

1.2 主要試劑

增菌培養(yǎng)、分離培養(yǎng)及生化試驗(yàn)用的各種培養(yǎng)基和沙門(mén)氏菌微量生化發(fā)酵管購(gòu)自北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司產(chǎn)品；沙門(mén)氏菌屬診斷血清購(gòu)自蘭州生物制品研究所，批號(hào)20100101；參考菌株沙門(mén)氏菌等由東北農(nóng)業(yè)大學(xué)家畜傳染病實(shí)驗(yàn)室鑒定保存；革蘭氏染色液，營(yíng)養(yǎng)肉湯、BS、SS和三糖鐵斜面瓊脂培養(yǎng)基均按文獻(xiàn)[3]方法制備。

1.3 細(xì)菌分離培養(yǎng)

在超凈工作臺(tái)中，樣品使用生理鹽水，按100、10-1、10-2、10-3和10-4五個(gè)梯度進(jìn)行稀釋。將各稀釋度的樣品，均勻涂布在BS、SS瓊脂培養(yǎng)基上，在37℃孵化箱內(nèi)培養(yǎng)24 h，得到單個(gè)細(xì)菌菌落。再挑取具有典型特征的疑似菌落，配制成純培養(yǎng)細(xì)菌菌液，取少量于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，將單個(gè)菌落分別接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，并放于37℃恒溫空氣震蕩浴170 r·min-1中進(jìn)行擴(kuò)增12 h。取培養(yǎng)菌苔涂布穿刺接種三糖鐵斜面培養(yǎng)基中，恒溫培養(yǎng)箱37℃恒溫培養(yǎng)24 h。

1.4 沙門(mén)氏菌的篩選

菌落經(jīng)過(guò)分離純化后，根據(jù)革蘭氏染色后的單個(gè)細(xì)菌菌體的形態(tài)，氧化酶和發(fā)酵試驗(yàn)來(lái)篩選沙門(mén)氏菌。

1.4.1 革蘭氏染色

在滅菌的載玻片的中前部滴10 μL菌液，均勻涂布，用酒精燈外焰對(duì)菌液進(jìn)行固定，待冷卻后，然后進(jìn)行染色。其流程如下：

①草酸錢(qián)結(jié)晶紫染色2 min，用去離子水進(jìn)行沖洗；②碘液染色1 s，用去離子水進(jìn)行沖洗；③95%的酒精脫色15～30 s，隨即水洗；④復(fù)染液染色2 min，水洗，直至洗下的水呈無(wú)色為止。

用吸水紙吸取多余水分，待干燥后，油鏡下觀察。呈現(xiàn)紫色的是革蘭氏陽(yáng)性菌，呈現(xiàn)紅色的是革蘭氏陰性菌。將觀察到的革蘭陰性桿狀菌進(jìn)行氧化酶試驗(yàn)和發(fā)酵試驗(yàn)進(jìn)一步篩選。

1.4.2 氧化酶試驗(yàn)

待檢菌用滅菌牙簽均勻涂布在氧化酶試紙上，30 s內(nèi)觀察結(jié)果，呈紫紅色的為陽(yáng)性，陰性呈無(wú)色或淡黃色。沙門(mén)氏菌的氧化酶試驗(yàn)呈陰性菌。

1.4.3 發(fā)酵試驗(yàn)

待檢菌用接種環(huán)挑取接種到發(fā)酵微量生化管中，每株菌接種2支，取出其中一支，加入液體石蠟覆蓋，倒置，在37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h，觀察記錄生化管中顏色變化。不加液體石蠟的變黃色，加液體石蠟管不變色，為氧化型，兩支均變黃色則為發(fā)酵型。沙門(mén)氏菌，發(fā)酵試驗(yàn)為發(fā)酵型。

1.5 沙門(mén)氏菌的鑒定

1.5.1 生化試驗(yàn)

分別用分離的細(xì)菌接種三糖鐵瓊脂斜面，于37℃培養(yǎng)24～48 h后，觀察底部和斜面顏色變化以及產(chǎn)氣情況，按文獻(xiàn)[4]方法對(duì)所有分離株進(jìn)行乳糖、葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、蔗糖、M.R、吲哚、枸櫞酸鹽、V-P10項(xiàng)生化指標(biāo)的測(cè)定。

1.5.2 沙門(mén)氏菌分離株的PCR鑒定

對(duì)分離純化菌株進(jìn)行序列分析，對(duì)其進(jìn)行分子鑒定。

1.5.2.1 16srDNA區(qū)的PCR擴(kuò)增及序列測(cè)定

引物見(jiàn)表1。

表1 擴(kuò)增目的基因的引物序列及目的片段長(zhǎng)度[5]Table 1 Primer sequence and amplification length of destination fragment

反應(yīng)體系為重蒸水41 mL，10xbuffer 5 μL，上游引物l μL，下游引物1 μL，dNTP l μL，模板DNA 0.5 μL，Tap酶0.5 μL。

反應(yīng)條件為94℃預(yù)變性7 min；94℃變性1 min；50℃退火l min；72℃延伸l min；共30個(gè)循環(huán)；72℃延伸10 min。

PCR擴(kuò)增及檢測(cè)：采用細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒提取細(xì)菌總DNA，其具體操作方法可以參考產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。

發(fā)展序列測(cè)定：將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行16SrDNA序列測(cè)定（上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司完成）。

1.5.2.2 16srDNA系列分析

把測(cè)序序列在GenBank（http://www.ncbi.nLm. nih.gov/）中Blast比對(duì)后，然后選取GenBank中相關(guān)序列，利用DNAstar軟件繪制進(jìn)化樹(shù)和同源相似列表，確定菌株的種屬。

1.6 沙門(mén)氏菌血清群的鑒定

首先進(jìn)行O抗原的鑒定，取出一塊玻板，清洗干凈，抽出10 μL不同血清群沙門(mén)氏菌O抗原單因子血清滴于一端，10 μL生理鹽水滴于另一端作對(duì)照。再在三糖鐵上斜面上挑取少量菌苔，與血清混勻，1 min內(nèi)觀察結(jié)果。通過(guò)O抗原判斷所分離的沙門(mén)氏菌屬于哪一血清群。鑒定O抗原后，再鑒定H（鞭毛）抗原，最后根據(jù)H抗原判斷沙門(mén)氏菌所屬種。

1.7 藥敏試驗(yàn)

按照CLSI標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行操作[6]，采用K-B紙片擴(kuò)散法測(cè)定6類(lèi)10種β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素作為藥物敏感性試驗(yàn)用抗生素，其中包括頭霉素類(lèi)（FOX）；青霉素類(lèi)（AMP、PIP）；碳青霉烯類(lèi)（ETP、MEC、IPM）；第三代頭孢菌素類(lèi)（CAZ、CTX）；第四代頭孢菌素類(lèi)（FEP）；氧頭孢烯類(lèi)（ATM）。具體抗菌藥物粉劑的批號(hào)，效價(jià)及來(lái)源詳見(jiàn)表2。

表2 藥物敏感性試驗(yàn)所用抗菌藥物粉劑的批號(hào)、效價(jià)及來(lái)源Table 2 Lot number,potency and sources of antibiotic in drug susceptibility testing

采用瓊脂平皿稀釋法測(cè)定被測(cè)菌株對(duì)CTX、CAZ和CIP的MIC值，結(jié)果按照CLSI標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判斷[6]。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床健康豬直腸沙門(mén)氏菌的分離鑒定結(jié)果

2.1.1 沙門(mén)氏菌分離培養(yǎng)

經(jīng)增菌培養(yǎng)后的棉拭子樣品接種于BS和SS選擇性瓊脂平板進(jìn)行純化，從其中選擇有金屬光澤的黑色、灰色或棕褐色，菌落周?chē)囵B(yǎng)基可呈棕色或黑色，有些菌株形成灰綠色的菌落，產(chǎn)生硫化氫，周?chē)囵B(yǎng)基不變的菌落（BS），以及無(wú)色透明、細(xì)小、圓整、光滑、中心為黑色的菌落（SS）。挑取可疑菌落接種三糖鐵培養(yǎng)基，底面黃色，斜面紅色，產(chǎn)H2S涂片、革蘭氏染色鏡檢為革蘭氏陰性短小桿菌。

2.1.2 沙門(mén)氏菌分離株生化試驗(yàn)鑒定結(jié)果

分離菌株能分解葡萄糖、甘露醇、麥芽糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣；不利用乳糖和蔗糖；能利用枸櫞酸鹽；不分解尿素；甲基紅試驗(yàn)陽(yáng)性；硫化氫試驗(yàn)產(chǎn)生H2S。由生化試驗(yàn)結(jié)果可知分離菌株各項(xiàng)生化試驗(yàn)指標(biāo)大部分符合沙門(mén)氏菌生化特征。

2.1.3 沙門(mén)氏菌分離株P(guān)CR鑒定結(jié)果

對(duì)分離菌株進(jìn)行沙門(mén)氏菌16SrDNA序列分析，結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.2 規(guī)模豬場(chǎng)臨床健康豬沙門(mén)氏菌帶菌情況

采用常規(guī)法與PCR技術(shù)結(jié)合對(duì)600份樣本進(jìn)行檢測(cè)，共分離到沙門(mén)氏菌35株，總檢出率為5.83%（35/600）。保育階段檢出率最高為9.44%（17/ 180），結(jié)果見(jiàn)表3。

可知保育階段檢出率與哺乳階段1.5%（3/200）和生長(zhǎng)階段檢出率2%（4/200）差異均極顯著（P≤0.01），而哺乳階段與生長(zhǎng)階段檢出率差異不顯著P＞0.05）。

圖1 35株沙門(mén)氏菌PCR擴(kuò)增電泳Fig.1 PCR electrophoretogram of 35 Salmonella isolates

表3 不同飼養(yǎng)階段沙門(mén)氏菌的檢出率Table 3 Detectable rate of Salmonella in different growth phases

被調(diào)查的十個(gè)豬場(chǎng)中，以巴彥縣豬場(chǎng)檢出率最高為18.89%（17/90），結(jié)果見(jiàn)表4。

由結(jié)果可知巴彥縣豬場(chǎng)與其余九個(gè)地區(qū)豬場(chǎng)之間的檢出率差異均極顯著（P≤0.01），而這九個(gè)豬場(chǎng)之間檢出率差異均不顯著（P＞0.05）。

2.3 血清型分布

35株沙門(mén)氏菌共分為3種不同的血清型，其中豬霍亂沙門(mén)氏菌為最主要的血清型，共25株，占71.4%（25/35），其次為豬傷寒沙門(mén)氏菌，共8株（22.9%），鼠傷寒沙門(mén)氏菌2株（5.7%）。具體生長(zhǎng)階段分布情況見(jiàn)表5，地區(qū)及豬場(chǎng)分布情況表6。

2.4 藥敏試驗(yàn)

35株被測(cè)沙門(mén)氏菌對(duì)10種β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素存在不同的耐藥性，對(duì)氨芐西林均耐藥，80%對(duì)頭孢他啶耐藥，對(duì)頭孢西丁、哌拉西林、頭孢噻肟、頭孢吡肟、氨曲南存在不同程度耐藥，對(duì)厄他培南、美羅培南、亞胺培南均敏感。35株豬沙門(mén)氏菌對(duì)抗菌藥物的耐藥譜見(jiàn)表7。

表4 哈爾濱地區(qū)不同縣市十個(gè)豬場(chǎng)沙門(mén)氏菌的檢出率Table 4 Detectable rate of Salmonella in ten swine farms of different regions in Harbin Citys

表5 不同飼養(yǎng)階段沙門(mén)氏菌的血清型Table 5 Serotype of Salmonella in different growth phases

表6 哈爾濱地區(qū)不同縣市十個(gè)豬場(chǎng)沙門(mén)氏菌的血清型Table 6 Serotype of Salmonella in ten swine farms of different regions in Harbin Citys

表7 35株豬霍亂沙門(mén)氏菌對(duì)抗菌藥物的耐藥譜Table 7 Drug resistant tests of 35 Salmonella spp to 10 antibiotics (%)

3 討論

沙門(mén)氏菌是條件致病菌，常存于病豬各臟器及糞便中，對(duì)外界環(huán)境的抵抗力較強(qiáng)。當(dāng)豬受其他病原感染或豬場(chǎng)飼養(yǎng)管理狀況不佳時(shí)，易產(chǎn)生并發(fā)癥狀[5]。Julie等對(duì)美國(guó)加州商品豬進(jìn)行直腸沙門(mén)氏菌分離，檢出率為9.0%（21/228）[7]；張瑋對(duì)安徽省540份臨床健康豬直腸樣本調(diào)查，發(fā)現(xiàn)沙門(mén)氏菌檢出率為4.07%（22/540）[8]。目前尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道指出沙門(mén)氏菌的檢出率在合格范圍，本試驗(yàn)使用微生物學(xué)鏡檢、生化試驗(yàn)并輔助PCR方法進(jìn)行鑒定，確保分離準(zhǔn)確性。

本試驗(yàn)沙門(mén)氏菌總分離率為5.83%（35/600），檢出率低于Julie研究結(jié)果[7]。與美國(guó)相比，我國(guó)使用抗菌促生長(zhǎng)劑比例偏大，與預(yù)混料中普遍使用抗菌促生長(zhǎng)劑[8]有關(guān)。但由于沙門(mén)氏菌在糞便中存在量少、菌株生長(zhǎng)緩慢以及雜菌的污染嚴(yán)重等因素均可降低該菌分離率，沙門(mén)氏菌實(shí)際的感染率可能高于此結(jié)果，這也是沙門(mén)氏菌對(duì)豬群危害被低估的重要原因[9]。張瑋對(duì)安徽省6個(gè)地區(qū)豬場(chǎng)沙門(mén)氏菌的檢測(cè)結(jié)果顯示，檢出率的高低存在區(qū)域性[8]。本研究分離結(jié)果可見(jiàn)，沙門(mén)氏菌在哈爾濱地區(qū)十個(gè)市縣的豬群中廣泛存在，不同市縣的分離率除巴彥縣具有極顯著差異外，其他市縣差異不顯著。這可能與不同地區(qū)豬場(chǎng)飼料中抗生素的添加及添加量有關(guān)。若將飼料中的抗生素消除或減少，豬體沙門(mén)氏菌的帶菌率是否會(huì)提高尚需進(jìn)一步調(diào)查研究。

任娟研究報(bào)道在豬生長(zhǎng)過(guò)程各階段均檢出沙門(mén)氏菌，保育階段檢出率顯著高于生長(zhǎng)和哺乳階段，認(rèn)為生長(zhǎng)階段豬的自身免疫機(jī)能健全，細(xì)菌難以在體內(nèi)長(zhǎng)期存在，而哺乳階段仔豬得到母源抗體的保護(hù)，細(xì)菌也難以造成隱性感染，但保育階段的豬缺乏母源抗體保護(hù)，自身免疫機(jī)能尚不健全，較易受到沙門(mén)氏菌感染[11]。本研究發(fā)現(xiàn)，沙門(mén)氏菌在3個(gè)階段中均檢出，其分離率與豬日齡有關(guān)，與任娟研究結(jié)果[11]一致，以保育階段豬分離率最高，感染程度最重。哺乳和生長(zhǎng)階段的豬沙門(mén)氏菌分離率較低（P≤0.01）。分析認(rèn)為，這與動(dòng)物易感性有關(guān)，由于大齡動(dòng)物對(duì)沙門(mén)氏菌不易感，而保育期之前豬群相互接觸機(jī)會(huì)較少，推測(cè)仔豬在保育期大量合群時(shí)，發(fā)生相互感染。因此，對(duì)養(yǎng)殖過(guò)程每一環(huán)節(jié)嚴(yán)加管理，才能消除生豬感染沙門(mén)氏菌的機(jī)會(huì)[12]。

不合理運(yùn)用抗生素，導(dǎo)致耐藥性普遍存在，使臨床上對(duì)沙門(mén)氏菌的臨床防治困難[13]。崔忠光利用13種抗菌藥物對(duì)沙門(mén)氏菌藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，沙門(mén)氏菌對(duì)青霉素耐藥率最高達(dá)100%，對(duì)氟苯尼考耐藥率最低為12.5%，對(duì)頭孢噻吩的耐藥率為25%[14]。李淑梅通過(guò)對(duì)豫北地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)病原菌的分離及其耐藥性研究發(fā)現(xiàn)，沙門(mén)氏菌對(duì)大觀霉素、克林霉素、頭孢噻吩敏感，對(duì)紅霉素、慶大、鏈霉素、痢菌凈、阿莫西林耐藥率均較高[15]。從表6可以看出，沙門(mén)氏菌對(duì)氨芐西林100%，對(duì)頭孢他啶80%耐藥，對(duì)頭孢西丁、哌拉西林、頭孢噻肟、頭孢吡肟、氨曲南存在不同程度的耐藥，對(duì)臨床上較少應(yīng)用的藥物厄他培南、美羅培南、亞胺培南敏感，結(jié)果不一致。這可能與不同地區(qū)不同養(yǎng)殖場(chǎng)的用藥習(xí)慣及用藥史有關(guān)，沙門(mén)氏菌是人獸共患病，如果在臨床上經(jīng)常使用同一種類(lèi)的抗生素對(duì)其進(jìn)行治療，導(dǎo)致沙門(mén)氏菌的耐藥性在人獸之間進(jìn)行傳遞，對(duì)公共衛(wèi)生安全造成潛在威脅，臨床用藥應(yīng)根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選擇治療用抗菌藥物。有研究認(rèn)為沙門(mén)氏菌主要產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶，水解β-內(nèi)酰胺抗生素的β-內(nèi)酰胺環(huán)，是使β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素失去抗菌活性的主要原因[16]?？咕幬锏哪退帉?dǎo)致抗生素雖可暫時(shí)控制疫情發(fā)展或減輕畜禽病情，但停藥后復(fù)發(fā)，有效藥物漸成低效或無(wú)效藥物[17]。

4 結(jié)論

本研究從哈爾濱地區(qū)不同市縣均分離并鑒定出豬源沙門(mén)氏菌，對(duì)沙門(mén)氏菌在哈爾濱地區(qū)十個(gè)市縣豬群中的流行病學(xué)分布進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)在哈爾濱地區(qū)十個(gè)市縣豬群中病原攜帶與感染情況非常嚴(yán)重，在保育階段中檢出率最高。β-內(nèi)酰胺環(huán)類(lèi)抗生素如氨芐西林、頭孢他啶等是豬沙門(mén)氏菌病防治中的常用藥物，但由于長(zhǎng)期廣泛使用，耐藥率很高，療效嚴(yán)重下降，但對(duì)于臨床應(yīng)用較少碳青霉烯類(lèi)抗生素均敏感，臨床上應(yīng)根據(jù)藥敏試驗(yàn)合理用藥，取得良好效果。采用交叉用藥、聯(lián)合用藥、輪換用藥，不但使療效增加，充分發(fā)揮抗生素之間協(xié)同作用，可避免沙門(mén)氏菌與某一種藥物長(zhǎng)期接觸，使產(chǎn)生耐藥性幾率降低[18-19]。

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Identification and resistance ofSalmonellaisolated from pigs

JIA Chunsheng1,2,MAO Zeming3,WANG Xiaonan2,WANG Junfeng2,WANG Long2,CHEN Shuang2, GE Lanyun2,XU Shiwen1(1.School of Veterinary Medicine,Northeast Agricultural University, Harbin 150030,China;2.Heilongjiang Agricultural Engineering Profession College,Harbin 150088,China;3.Harbin Xinguangfeng Husbandry Limited Company,Harbin 150030,China)

Serological identification ofSalmonellain the large-scale pig farms of Haerbin,and analyzed the differentSalmonellaantimicrobial susceptibility testresults and drug resistance.Methods Up to 35Salmonellastrains were isolated from 600 feces in the rectal of pigs by morphological observation and biochemical system.The sensitivity tests of 35 strains to 10 Beta lactam antibacterials were performedby Krby-Bauer method.These microorganisms were further confirmed by corresponding specific bio-chemistry assay and polymerase chain reaction(PCR).The reasults showed that the overall detection rate ofSalmonellawas 5.83%and the total rate of separation was from 3.3%to 18.3% in the different citys of Harbin.The resistant rate of 35 strains to ampicillin,ceftazidime,cefoxitin, piperacillin,cefotaxime,cefepime and aztreonam was 100%,80%,17%,71%,66%,6 3%and 29% respectively.However,they were still sensitive to ertapenem,meropenem and imipenem．The resultsshowed thatSalmonellainfections exist in pig farms in Harbin and the antimicrobial resistance of Salmonella is very serious.

pig;Salmonella;isolation and identification;resistance

S858.283

A

1005-9369（2014）08-0049-06

2014-03-03

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（30170711）

加春生（1981-），男，講師，博士，研究方向?yàn)榄h(huán)境毒理。E-mail:jcs552@163.com

*通訊作者：徐世文，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)榄h(huán)境毒理，E-mail:1009598967@qq.com

時(shí)間2014-7-18 14:57:24[URL]http://www.cnki.net/kcms/detail/23.1391.S.20140718.1457.002.html

加春生,毛澤明,王曉楠,等.豬沙門(mén)氏菌的分離鑒定及其耐藥性分析[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2014,45(8):49-54.

Jia Chunsheng,Mao Zeming,Wang Xiaonan,et al.Identification and resistance ofSalmonellaisolated from pigs[J].Journal of Northeast Agricultural University,2014,45(8):49-54.(in Chinese with English abstract)