廖昌能

（廣西百色市人民醫(yī)院，右江民族醫(yī)學(xué)附屬西南醫(yī)院藥劑科，廣西 百色 533000）

蛇尾草 ［Herminium Lanceum （Thunb.）Vuijk］又名唇角盤蘭、蛇含草、雞心貝母、人頭七、土貝母等，分布于東北至云南、西藏、廣西、臺(tái)灣等地，主要以根莖及全草入藥，性甘、平，歸腎、肝、肺三經(jīng)。具有補(bǔ)腎強(qiáng)筋、潤(rùn)肺抗癆、養(yǎng)血止血之功效，用于跌打損傷、筋骨勞傷、肺結(jié)核、虛勞、刀傷出血、貧血兩眼昏花等疾病治療［1］，但現(xiàn)代藥效學(xué)研究報(bào)道較少。為了驗(yàn)證該藥物是否具有補(bǔ)腎強(qiáng)筋、潤(rùn)肺抗癆功效，該實(shí)驗(yàn)從抗疲勞、耐缺氧、耐低溫、耐高溫入手對(duì)抗應(yīng)激作用進(jìn)行動(dòng)物研究，為該植物資源的開(kāi)發(fā)及臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 試劑與儀器 鈉石灰 （汕頭市西隴化工廠，批號(hào)：121009）。亞硝酸鈉 （上海之臻化工有限公司，批號(hào)：130310）；AR224CN 型電子分析天平 （奧豪斯）；RE－301型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 （北京瑞成設(shè)備有限公司）。

1.2 動(dòng)物 清潔級(jí)昆明種小白鼠，體重 （20±2）g，由右江民族醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.3 藥物的制備

1.3.1 藥材采集 蛇尾草采購(gòu)于百色藥市，經(jīng)右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院中藥房副主任藥師劉春榮鑒定為蘭科植物蛇尾草。

1.3.2 蛇尾草醇提取物的制備 取蛇尾草全草500g，加適量無(wú)水乙醇浸潤(rùn)1h，加入1 000ml無(wú)水乙醇，80℃進(jìn)行回流提取2h，分別回流提取2次，過(guò)濾，合并濾液。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至無(wú)乙醇味，得到乙醇提取物浸膏，備用。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物分組及處理 取小鼠40只，按體重隨機(jī)分成4組，每組10只，即生理鹽水組和蛇尾草醇提取物高、中、低劑量組 （12g／kg、6g／kg、3g／kg），灌胃給藥，2次／天，每次給藥容積為0.1ml／10g，連續(xù)7d。

2.2 小鼠抗疲勞實(shí)驗(yàn)［2－3］末次給藥后1h，在各鼠尾根部束一重量為體重10%的鉛片，投入水溫為 （25±0.5）℃，水深45cm 的水桶中游泳，以頭部沉入水中15s內(nèi)不能游出水面為體力耗竭，觀察記錄小鼠游泳的持續(xù)時(shí)間。

2.3 小鼠常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)［2－3］末次給藥后1h，將各小鼠分別置于盛有10g鈉石灰的250ml玻璃瓶中，每瓶一只，瓶口用凡士林密封，以呼吸停止為死亡指標(biāo)，記錄小鼠自封入瓶中至死亡的時(shí)間為存活時(shí)間。

2.4 小鼠耐亞硝酸鈉組織中毒性缺氧［2，4］：末次給藥后1h，在各小鼠腹腔注射亞硝酸鈉溶液240mg／kg，觀察并記錄小鼠注射亞硝酸鈉后的存活時(shí)間。

2.5 小鼠耐低溫實(shí)驗(yàn)［2，4］末次給藥后1h，將各組小鼠置于 （－5±1）℃冰柜內(nèi)，以小鼠呼吸停止為死亡指標(biāo)，觀察記錄小鼠在低溫條件下的存活時(shí)間。

2.6 小鼠耐高溫實(shí)驗(yàn)［2，4］末次給藥后1h，將各組小鼠置于 （45±1）℃恒溫箱內(nèi)，以小鼠呼吸停止為死亡指標(biāo)，觀察記錄小鼠在高溫條件下的存活時(shí)間。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 17.0for Windows統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以 （±s）表示，實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1 蛇尾草醇提物對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響 從表1的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，蛇尾草醇提物高劑量組與生理鹽水組比較能顯著地延長(zhǎng)小鼠存活時(shí)間，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P ＜0.01）；延長(zhǎng)率提高了74.42%；蛇尾草醇提取物中劑量組與生理鹽水組比較具有一定的延長(zhǎng)小鼠小鼠存活時(shí)間，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P ＜0.05）；延長(zhǎng)率提高了46.89%；低劑量實(shí)驗(yàn)組與生理鹽水組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P ＞0.05）。

3.2 蛇尾草醇提物對(duì)小鼠常壓耐缺氧能力的影響 從表2的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，蛇尾草醇提取物高劑量組、中劑量組與生理鹽水組比較能顯著地延長(zhǎng)小鼠存活時(shí)間，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01），延長(zhǎng)率分別提高了66.67%、37.81%，低劑量實(shí)驗(yàn)組與生理鹽水組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。

表1 蛇尾草醇提取物對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響 （±s，n＝10）

表1 蛇尾草醇提取物對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響 （±s，n＝10）

注：與生理鹽水組比較，a：P ＜0.05，b：P ＜0.01

組別 劑量（g·kg－1）存活時(shí)間（t／min）延長(zhǎng)率（%）－ 7.65±2.76－蛇尾草醇提取物高劑量組 12 13.35±4.29b 74.42蛇尾草醇提取物中劑量組 6 11.24±3.98a 46.89 3 8.52±2.37 11.33蛇尾草醇提取物低劑量組生理鹽水組

表2 蛇尾草醇提取物對(duì)小鼠常壓耐缺氧能力的影響 （±s，n＝10）

表2 蛇尾草醇提取物對(duì)小鼠常壓耐缺氧能力的影響 （±s，n＝10）

注：與生理鹽水組比較，a：P ＜0.01

組別 劑量（g·kg－1）存活時(shí)間（t／min）延長(zhǎng)率（%）－ 23.46±4.61－蛇尾草醇提取物高劑量組 12 39.10±5.30a 66.67蛇尾草醇提取物中劑量組 6 32.33±4.7537.81 3 25.75±4.42 9.76 a 蛇尾草醇提取物低劑量組生理鹽水組

3.3 蛇尾草醇提取物對(duì)小鼠亞硝酸鈉組織中毒性缺氧的影響 從表3的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，蛇尾草醇提取物高劑量組與生理鹽水組比較能延長(zhǎng)小鼠存活時(shí)間，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01），延長(zhǎng)率提高了35.72%。蛇尾草醇提取物中劑量組與生理鹽水組比較 （P ＜0.05）具有一定地延長(zhǎng)小鼠小鼠存活時(shí)間，延長(zhǎng)率提高了26.16%，低劑量實(shí)驗(yàn)組與生理鹽水組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P ＞0.05）。

表3 蛇尾草醇提物對(duì)小鼠亞硝酸鈉組織中毒性缺氧的影響 （±s，n＝10）

表3 蛇尾草醇提物對(duì)小鼠亞硝酸鈉組織中毒性缺氧的影響 （±s，n＝10）

注：與生理鹽水組比較，a：P ＜0.05，b：P ＜0.01

組別 劑量（g·kg－1）存活時(shí)間（t／min）延長(zhǎng)率（%）－ 13.55±3.49－蛇尾草醇提取物高劑量組 12 18.39±3.51b 35.72蛇尾草醇提取物中劑量組 6 3 14.11±4.13 4.15 17.10±2.66a 26.16蛇尾草醇提取物低劑量組生理鹽水組

3.4 蛇尾草醇提取物對(duì)小鼠耐低溫的影響 從表4的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，蛇尾草醇提物高劑量組、中劑量組與生理鹽水組比較能顯著地延長(zhǎng)小鼠存活時(shí)間，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01），延長(zhǎng)率分別提高了51.51%、24.92%；低劑量實(shí)驗(yàn)組與生理鹽水組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P ＞0.05）。

表4 蛇尾草醇提物對(duì)小鼠耐低溫的影響 （±s，n＝10）

表4 蛇尾草醇提物對(duì)小鼠耐低溫的影響 （±s，n＝10）

注：與生理鹽水組比較，a：P ＜0.01

組別 劑量（g·kg－1）存活時(shí)間（t／min）延長(zhǎng)率（%）－ 80.56±14.37蛇尾草醇提取物高劑量組 12 123.50±14.03a 51.51蛇尾草醇提取物中劑量組 6 101.82±13.78a 24.92 3 88.20±15.40 8.21蛇尾草醇提取物低劑量組生理鹽水組

3.5 蛇尾草醇提取物對(duì)小鼠耐高溫的影響 從表5的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，蛇尾草醇提物中劑量組、低劑量組與生理鹽水組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P ＞0.05），不能顯著地延長(zhǎng)小鼠高溫存活時(shí)間，高劑量組與生理鹽水組比較能延長(zhǎng)小鼠高溫存活時(shí)間延長(zhǎng)率提高了31.02%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01）。

表5 蛇尾草醇提取物對(duì)小鼠耐高溫的影響 （±s，n＝10）

表5 蛇尾草醇提取物對(duì)小鼠耐高溫的影響 （±s，n＝10）

注：與生理鹽水組比較，a：P ＜0.01

組別 劑量（g·kg－1）存活時(shí)間（t／min）延長(zhǎng)率（%）－ 43.20±9.89－蛇尾草醇提取物高劑量組 12 56.60±11.35a 31.02蛇尾草醇提取物中劑量組 6 49.20±9.37 13.89 3 5.60±10.56 5.56蛇尾草醇提取物低劑量組生理鹽水組

4 討論

應(yīng)激是機(jī)體受到各種不利因素刺激時(shí)出現(xiàn)的非特異性性全身反應(yīng)，過(guò)度的應(yīng)激反應(yīng)可造成機(jī)體的功能障礙導(dǎo)致疾病或死亡［5］。抗應(yīng)激能力是機(jī)體適應(yīng)環(huán)境變化的一種能力，具有抗應(yīng)激能力的藥物能增強(qiáng)各種對(duì)機(jī)體不利刺激的非特異性反應(yīng)的抵抗能力，延長(zhǎng)在有害刺激下的存活時(shí)間［6］。在實(shí)驗(yàn)研究中分別采用小鼠游泳實(shí)驗(yàn)、耐缺氧實(shí)驗(yàn)、耐寒實(shí)驗(yàn)和耐高溫實(shí)驗(yàn)觀察蛇尾草醇提取物的抗應(yīng)激作用，蛇尾草醇提取物在游泳抗疲勞、常壓耐缺氧、耐低溫實(shí)驗(yàn)中高劑量組小鼠存活延長(zhǎng)率分別為74.42%、66.67%、51.51%；中劑量組小鼠存活延長(zhǎng)率分別為46.89%、37.81%、24.94%；在耐高溫、組織中毒耐缺氧實(shí)驗(yàn)中，蛇尾草醇提取物高劑量組小鼠存活延長(zhǎng)率分別為35.72%、31.02%。通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在抗疲勞、常壓耐缺氧和耐低溫下有顯著的抗應(yīng)激能力，在耐高溫、組織中毒耐缺氧條件下抗應(yīng)激能力相對(duì)較弱。初步判斷蛇尾草醇提取物的抗應(yīng)激能力與蛇尾草具有補(bǔ)腎強(qiáng)筋、補(bǔ)血、潤(rùn)肺功效相關(guān)。

雖然蛇尾草醇提取物具有抗應(yīng)激作用，但是提高抗應(yīng)激能力的機(jī)制均未清楚，仍需進(jìn)一步探討。蛇尾草成分比較復(fù)雜，化學(xué)成分的研究和其他藥理活性均未有相關(guān)報(bào)道，還需要開(kāi)展相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。

［1］ 謝宗萬(wàn).全國(guó)中草藥匯編 ［M］.2 版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1996.

［2］ 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué) ［M］.3 版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：765，769，770.

［3］ 陳百泉，婁麗杰，杜紅巖，等.杜仲雄花茶對(duì)小鼠抗應(yīng)激作用的實(shí)驗(yàn) ［J］.河南大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，29 （3）：198.

［4］ 高月娟，孟妍，張艷麗.太子參抗應(yīng)激作用的實(shí)驗(yàn)研究 ［J］.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，32 （12）：1886.

［5］ 孫琪，敖海清，王全年，等.慢性應(yīng)激動(dòng)物模型的應(yīng)用與思考 ［J］.廣東醫(yī)學(xué)，2012，33 （14）：2182.

［6］ 梁尚華，童遙，梁尚清.中藥對(duì)應(yīng)激動(dòng)物作用的實(shí)驗(yàn)研究概述 ［J］.上海中醫(yī)藥雜志，2004，38 （6）：53.