李克明，唐漢慶，竇錫彬，李曉華，朱曉瑩，鄭建宇

（右江民族醫(yī)學(xué)院，廣西 百色 533000 E－mail：4895235＠qq.com）

在哮喘炎癥過程中，Th2 細胞起著重要的介導(dǎo)作用，其釋放的IL－4、IL－5、IL－13等細胞因子與哮喘的炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，胸腺基質(zhì)淋巴細胞生成素 （thymic stromal lymphopoietin，TSLP）對Th2 細胞優(yōu)勢分化有調(diào)控作用［1］。本研究工作通過設(shè)立實驗組和對照組，觀察哮喘患者痰液TSLP、白細胞介素 （IL）－4、IL－5、IL－13及血清免疫球蛋白E （IgE）水平并研究其相關(guān)性，探討TSLP調(diào)控Th2 細胞優(yōu)勢分化的效應(yīng)。

1 資料

1.1 一般資料 30例病例為2011年10月～2013年4月在本院呼吸內(nèi)科診治的符合納入標準的門診或住院哮喘患者，作為實驗組；另外通過健康體檢中心選取近4周內(nèi)無呼吸道感染、肺功能正常健康成年人30例作為對照組。實驗組男17例，女13例，急性發(fā)作期8 例，慢性緩解期22 例，平均年齡（42.46±14.22）歲，平均病程 （7.65±4.56）年，對照組男16 例，女14 例，平均年齡 （45.88±11.65）歲，兩組患者性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義 （P ＞0.05）。本研究告知研究對象并獲得同意。

1.2 病例選擇 ①納入標準：符合中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會哮喘學(xué)組的支氣管哮喘防治指南的診斷標準［2］，無吸煙史或至少戒煙2年以上，近4周內(nèi)無呼吸道感染史和激素等哮喘藥物使用史。②排除標準：支氣管哮喘重度患者和哮喘持續(xù)狀態(tài)者；合并變應(yīng)性鼻炎者；合并有心血管、肝、腎、內(nèi)分泌或造血系統(tǒng)等嚴重原發(fā)病及精神病患者；妊娠期或哺乳期婦女；口服激素患者；茶堿類制劑過敏患者。

1.3 主要試劑和儀器 IgE 檢測試劑盒 （批號：ZP10911，R＆B公司，U.S.A）；IL－4檢測試劑盒 （批號：2011021，北京博奧公司）、IL－5檢測試劑盒 （批號：2011421，北京博奧公司）、IL－13檢測試劑盒 （批號：4023A，Pierce，U.S.A）；TSLP檢測試劑盒 （批號：211304A，BD，U.S.A）。酶標儀 （MK3型，Thermo Labsystem 公司）；高速低溫離心機 （PK121R 型，ALC 公司）；超低溫冰箱 （MDF－U72V型，日本三洋公司）。

2 方法

2.1 血清IgE水平檢測 取實驗組和對照組每位組員外周靜脈血5ml，置于試管中，靜置30min后，離心 （1 000r·min－1，6min），取血清并凍存于－70 ℃待檢。采用ELISA法檢測。按照試劑盒說明書進行操作。

2.2 TSLP、IL－4、IL－5、IL－13水平檢測 實驗組和對照組均使用超聲霧化吸入4%高滲鹽水，按常規(guī)方法收集痰液10ml，加入50ml 0.1%DTT 溶液，500r·min－1，搖床振蕩6min，37 ℃溫水孵育10min，再加入100 ml的PBS，500r·min－1，搖床振蕩6 min，48μm 孔徑濾網(wǎng)過濾，濾液離心，1000r·min－1，離心10min，取上清液于－70 ℃保存待測。采用ELISA 法檢測。按照試劑盒說明書進行操作。

2.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 13.0 統(tǒng)計軟件進行，計量資料以 （±s）表示，t檢驗分析組間差異。采用Spearman方法分析相關(guān)性，以P ＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 兩組痰液TSLP、IL－4、IL－5、IL－13及血清IgE水平 和對照組比較，實驗組TSLP、IL－4及IgE 水平均顯著升高 （P ＜0.01），實驗組IL－5及IL－13水平升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義 （P ＜0.05）。見表1。

表1 兩組痰液TSLP、IL－4、IL－5、IL－13及血清IgE水平 （±s）

表1 兩組痰液TSLP、IL－4、IL－5、IL－13及血清IgE水平 （±s）

注：與對照組比較：a：P ＜0.05，b：P ＜0.01

組別 n TSLP（ng·ml－1）IL－4（ng·ml－1）IL－5（ng·ml－1）IL－13（ng·ml－1）IgE（IU·ml－1）對照組 30 1.12±0.45 1.8±0.95 4.8±1.35 110.12±12.36 1.36±0.14實驗組 30 2.82±0.92b 8.6±2.32b 14.8±2.14a 403.23±25.68a 281.06±22.14 b

3.2 實驗組痰液TSLP、IL－4、IL－5、IL－13及血清IgE水平相關(guān)性 實驗組TSLP與IL－4、IL－5、IL－13及血清IgE水平均存在正相關(guān) （r 值分別為0.742，0.351，0.424，0.679，P ＜0.01）；IL－4與IgE 存在正相關(guān) （r值為0.548，P ＜0.01），見表2。

表2 實驗組TSLP、IL－4、IL－5、IL－13及血清IgE水平相關(guān)性 （n＝30）

4 討論

關(guān)于哮喘的臨床研究已有許多報道［3－4］，對于哮喘發(fā)病與TSLP關(guān)系的基礎(chǔ)研究，國內(nèi)外的研究尚不多見，已有研究顯示，TSLP在不同的組織中著重表達于上皮細胞，在抗原呈遞細胞觸發(fā)Th2 在外周變態(tài)反應(yīng)性疾病中起著關(guān)鍵作用［5－6］。TSLP通過樹突狀細胞引起Th2優(yōu)勢分化，Th2細胞分化后釋放細胞因子IL－4、IL－5、IL－13引起肥大細胞、嗜酸性粒細胞浸潤及系列變態(tài)炎性反應(yīng)［7－9］，使氣道發(fā)生病理改變導(dǎo)致哮喘發(fā)作［10］。IL－4、IL－5、IL－13可誘導(dǎo)B 細胞產(chǎn)生IgE，在過敏性疾病炎癥反應(yīng)中起著重要作用［11－12］。本研究觀察哮喘患者痰液TSLP與IL－4、IL－5、IL－13及血清IgE 水平變化并討論其相關(guān)性。

我們在前期對哮喘模型小鼠的動物實驗研究中觀察到，和對照組比較，哮喘模型組TSLP mRNA 相對表達量及IL－4水平均顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 （P ＜0.01）；模型組的IL－5、IL－13水平也升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 （P ＜0.05）。 ［上述研究結(jié)果將發(fā)表在 《中國中醫(yī)急癥》2014 年1期］。為探討TSLP和IL－4、IL－5、IL－13及IgE水平是否存在正相關(guān)，我們回到臨床研究上，對哮喘患者的TSLP、IL－4、IL－5、IL－13及IgE 水平進行檢測并進行各指標的相關(guān)性分析，在本研究工作中觀察到，哮喘患者的TSLP、IL－4、IL－5、IL－13及IgE 水平均升高，和對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 （P ＜0.01或P ＜0.05），這和我們前期的哮喘模型動物實驗研究結(jié)果一致，也驗證了報道結(jié)果［11］，提示我們TSLP的表達及含量在哮喘的發(fā)作中是一個關(guān)鍵因素，同時，通過對TSLP、IL－4、IL－5、IL－13及IgE水平的相關(guān)性分析，我們也注意到，哮喘患者TSLP與IL－4、IL－5、IL－13及血清IgE水平均存在正相關(guān)，IL－4與IgE也存在正相關(guān)，說明在哮喘中TSLP與IL－4、IL－5、IL－13及血清IgE的變化趨勢是一致的，提示針對TSLP靶向治療有可能減輕哮喘的炎癥反應(yīng)。

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