劉軍杰，黃忠仕，曾慶春，黃岑漢②

（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530001 E－mail：513567797＠qq.com；2.右江民族醫(yī)學(xué)院，廣西 百色 533000）

衰老一直被認(rèn)為是生命發(fā)展過程中的必然規(guī)律，是不可避免的。但近年來，人們逐漸認(rèn)識(shí)到采取干預(yù)措施延緩衰老對(duì)人體更有益?！秲?nèi)經(jīng)》曰：“夫精者生之本?！泵鞔輦?《醫(yī)學(xué)正傳》曰：“腎氣盛則壽延，腎氣衰則壽天。”王正引等［1］認(rèn)為腎虛是人體衰老的主要原因。氣血［2］是人體生命活動(dòng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。氣血充足則健康長(zhǎng)壽；氣血虛則生病、衰老。壯精合劑是根據(jù)壯醫(yī)學(xué)理論及虛則補(bǔ)之的治療原則，從精血論治的角度由土人參、絞股藍(lán)、扶芳藤、大地椋根等配伍而成。全方能夠補(bǔ)益精氣、調(diào)經(jīng)養(yǎng)血，使精氣旺盛、氣血調(diào)和、龍路通達(dá)。筆者通過分析壯精合劑對(duì)初老大鼠血清、肝、腦、卵巢等組織總超氧化物歧化酶 （T－SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶 （GSH－Px）活性及丙二醛 （MDA）含量的影響，以探討其抗衰老作用，從而為臨床選用抗衰老藥物提供科學(xué)數(shù)據(jù)及參考?，F(xiàn)將實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果報(bào)告如下：

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物 選用12 月齡健康雌性SD 大鼠50 只，體重（300±20）g，由右江民族醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供 （許可證：SCXK 桂2012－0003）。自動(dòng)控制光照，在通風(fēng)、溫度及濕度適宜的動(dòng)物室內(nèi)常規(guī)飼養(yǎng)。

1.2 藥物及試劑 壯精合劑 （土人參30g，絞股藍(lán)25g，扶芳藤20g，大地椋根10g）。陽性藥對(duì)照組：古漢養(yǎng)生精（批號(hào)：902630－126904）。T－SOD （總超氧化物歧化酶試劑盒，批號(hào)：20131030）、GSH－PX （谷胱甘肽過氧化物酶試劑盒，批 號(hào)：20131026）、MDA （丙 二 醛 試 劑 盒，批 號(hào)：20131106）均由南京建成生物工程研究所提供。

2 方法

2.1 模型建立 采用自然老化法。初老大鼠模型：選12月齡雌性大鼠，采取陰道脫落細(xì)胞涂片巴氏染色連續(xù)觀察4個(gè)動(dòng)情周期，以陰道細(xì)胞學(xué)表現(xiàn)動(dòng)情周期長(zhǎng)，之后持續(xù)動(dòng)情、反復(fù)假妊娠時(shí)，作為自然衰老的初老大鼠模型［3－5］。

2.2 分組與給藥 將造模成功的50只12月齡雌性SD 初老大鼠隨機(jī)分為5組，分別為空白對(duì)照組、壯精合劑低劑量組、壯精合劑中劑量組、壯精合劑高劑量組、陽性藥對(duì)照組，每組10只?？瞻讓?duì)照組給予純凈水，10 ml·kg－1，壯精合劑低、中、高劑量組分別給予壯精合劑6g·kg－1、15g·kg－1、30g·kg－1，陽性藥對(duì)照組給予古漢養(yǎng)生精4.8g·kg－1。以上各組每日灌胃給藥1次，連續(xù)8周。

2.3 儀器與設(shè)備 高速分散勻質(zhì)機(jī)，WFZ－UV2000紫外可見分光光度計(jì)，離心機(jī)，水浴鍋，移液器，電子天平等均由右江民族醫(yī)學(xué)院科學(xué)實(shí)驗(yàn)中心提供。

2.4 樣本處理和指標(biāo)測(cè)定 治療結(jié)束后，摘大鼠眼球取血，血液經(jīng)3 000r／min－1離心10min，分離血清；同時(shí)迅速剝離大鼠腦組織，摘取肝、卵巢等組織于4℃預(yù)冷的生理鹽水漂洗除去血液，用濾紙吸干多余水分，于電子天平上稱重，并分別加9倍體積 （重量／體積）的冰生理鹽水，用高速分散勻質(zhì)機(jī)制成10%的相應(yīng)組織勻漿，按試劑盒操作說明分別對(duì)各組大鼠血清、腦勻漿、肝勻漿、卵巢勻漿等進(jìn)行SOD、GSHPx、MDA 測(cè)定。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，各指標(biāo)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 （±s）表示，組間樣本均數(shù)比較采用方差分析和t檢驗(yàn)，以P ＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 大鼠血清中自由基含量測(cè)定 見表1。統(tǒng)計(jì)處理表明，與空白對(duì)照組比較，陽性藥對(duì)照組及壯精合劑高、中、低劑量組T－SOD、GSH－Px活性升高，MDA 含量降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P ＜0.01或P ＜0.05）。與陽性藥對(duì)照組比較，壯精合劑高劑量組T－SOD、GSH－Px活性升高，MDA 含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P ＜0.01 或P ＜0.05）。

表1 壯精合劑對(duì)各組初老大鼠血清中自由基含量檢測(cè)結(jié)果 （±s，n＝10）

表1 壯精合劑對(duì)各組初老大鼠血清中自由基含量檢測(cè)結(jié)果 （±s，n＝10）

注：與空白對(duì)照組比較，a：P ＜0.05，b：P ＜0.01；與陽性藥對(duì)照組比較，c：P ＜0.05，d：P ＜0.01

T－SOD GSH－Px MDA空白對(duì)照組組別130.24±5.42 141.50±6.24 10.85±1.15陽性藥對(duì)照組 153.72±4.51b223.57±19.19b 7.04±0.96b壯精合劑高劑量組 163.74±7.96bc270.78±14.36bd 6.28±0.58bc壯精合劑中劑量組 151.08±7.49b224.26±15.96b 7.16±0.53b壯精合劑低劑量組 140.71±6.72a190.59±15.42b 7.66±0.45 b

3.2 大鼠肝臟組織中自由基含量測(cè)定 見表2。統(tǒng)計(jì)處理表明，與空白對(duì)照組比較，陽性藥對(duì)照組及壯精合劑高、中、低劑量組T－SOD、GSH－Px 活性升高，MDA 含量降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P ＜0.01）。與陽性藥對(duì)照組比較，壯精合劑高劑量組T－SOD、GSH－Px活性升高，MDA 含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P ＜0.01或P ＜0.05），壯精合劑中劑量組MDA 含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P ＜0.01）。

表2 壯精合劑對(duì)各組初老大鼠肝臟中自由基含量檢測(cè)結(jié)果 （±s，n＝10）

表2 壯精合劑對(duì)各組初老大鼠肝臟中自由基含量檢測(cè)結(jié)果 （±s，n＝10）

注：與空白對(duì)照組比較，a：P ＜0.05，b：P ＜0.01；與陽性藥對(duì)照組比較，c：P ＜0.05，d：P ＜0.01

T－SOD GSH－Px MDA空白對(duì)照組組別176.88±4.60 638.59±34.80 22.55±2.37陽性藥對(duì)照組 201.01±8.12b972.85±40.49b18.59±1.40b壯精合劑高劑量組 219.94±7.78bd1152.59±49.07bd15.99±1.51bd壯精合劑中劑量組 206.50±7.97b 53.39±32.61b 16.81±1.16bd壯精合劑低劑量組 185.18±6.22b 770.88±29.97b 17.93±1.24 b

3.3 大鼠腦組織中自由基含量測(cè)定 見表3。統(tǒng)計(jì)處理表明，與空白對(duì)照組比較，陽性藥對(duì)照組及壯精合劑高、中、低劑量組T－SOD、GSH－Px 活性升高，MDA 含量降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P ＜0.01）。與陽性藥對(duì)照組比較，壯精合劑高劑量組GSH－Px活性升高，MDA 含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P ＜0.01或P ＜0.05）。

表3 壯精合劑對(duì)各組初老大鼠腦中自由基含量檢測(cè)結(jié)果 （±s，n＝10）

表3 壯精合劑對(duì)各組初老大鼠腦中自由基含量檢測(cè)結(jié)果 （±s，n＝10）

注：與空白對(duì)照組比較，a：P ＜0.05，b：P ＜0.01；與陽性藥對(duì)照組比較，c：P ＜0.05，d：P ＜0.01

T－SOD GSH－Px MDA空白對(duì)照組組別82.62±5.22 16.19±1.97 6.28±0.92陽性藥對(duì)照組 116.39±8.94b 26.83±1.88b 2.83±0.65b壯精合劑高劑量組 116.17±7.70b 31.26±2.63bd 2.32±0.36bc壯精合劑中劑量組 105.64±7.40b 27.86±1.41b 2.82±0.20b壯精合劑低劑量組 93.03±7.85b 23.03±1.50b 3.31±0.65 b

3.4 大鼠卵巢組織中自由基含量測(cè)定 見表4。統(tǒng)計(jì)處理表明，與空白對(duì)照組比較，陽性藥對(duì)照組及壯精合劑高、中、低劑量組T－SOD、GSH－Px 活性升高，MDA 含量降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P ＜0.01）。與陽性藥對(duì)照組比較，壯精合劑高劑量組T－SOD、GSH－Px活性升高，MDA 含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P ＜0.01）。

表4 壯精合劑對(duì)各組初老大鼠卵巢中自由基含量檢測(cè)結(jié)果 （±s，n＝10）

表4 壯精合劑對(duì)各組初老大鼠卵巢中自由基含量檢測(cè)結(jié)果 （±s，n＝10）

注：與空白對(duì)照組比較，a：P ＜0.05，b：P ＜0.01；與陽性藥對(duì)照組比較，c：P ＜0.05，d：P ＜0.01

T－SOD GSH－Px MDA空白對(duì)照組組別25.12±1.85 5.13±0.38 5.42±0.50陽性藥對(duì)照組 39.46±2.59b 8.09±0.59b 2.97±0.46b壯精合劑高劑量組 48.52±2.47bd 11.61±0.90bd 2.95±0.16b壯精合劑中劑量組 40.79±2.39b 7.93±0.89b 3.14±0.31b壯精合劑低劑量組 32.36±2.14b 6.75±0.61b 3.57±0.31 b

4 討論

衰老機(jī)制的研究從整體水平和器官水平到細(xì)胞水平與分子水平已取得重大的進(jìn)展。1956年由英國(guó)學(xué)者Harman［6］首先提出的自由基學(xué)說 （free radical theory）是具有代表性的衰老學(xué)說之一。其認(rèn)為在人體內(nèi)存在清除自由基的防御系統(tǒng)比如T－SOD、GSH－Px等。伴隨年齡的增長(zhǎng)，機(jī)體抗氧化防御物質(zhì)合成和活性下降，清除自由基的能力亦隨之降低，導(dǎo)致自由基代謝產(chǎn)物MDA 等大量堆積，從而加速機(jī)體的衰老［7－9］。因此，在抗衰老的實(shí)驗(yàn)研究中，測(cè)定自由基的代謝含量有重大意義。

中醫(yī)藥在抗衰老抗氧化的研究中，以其特有的效果占據(jù)著越來越重要的地位。中醫(yī)認(rèn)為臟腑虛衰是導(dǎo)致人衰老、死亡的原因［10－11］。腎虛是人體衰老的主要原因。根據(jù)治病求本的原則，由黃芪、枸杞、黃精、淫羊藿等藥物組成的古漢養(yǎng)生精，補(bǔ)腎益氣、填精補(bǔ)髓，具有抗衰老的功效，已上市銷售，故選作陽性藥對(duì)照組。

4.1 壯精合劑抗氧化作用 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示給予初老大鼠壯精合劑灌胃8周以后，與空白對(duì)照組比較，壯精合劑各組大鼠血清及肝、腦、卵巢等組織T－SOD、GSH－Px含量有明顯提高；與陽性對(duì)照組相比，壯精合劑高劑量組血清及肝、卵巢等組織T－SOD、GSH－Px 有明顯提高，大鼠腦組織GSH－Px含量有明顯提高。在壯精合劑高、中、低劑量組對(duì)比中，高劑量數(shù)據(jù)在趨勢(shì)上呈現(xiàn)出明顯優(yōu)勢(shì)，可以初步判斷高劑量效果最佳。

4.2 壯精合劑清除代謝產(chǎn)物的能力 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示給予初老大鼠壯精合劑灌胃8周以后，與空白對(duì)照組比較，壯精合劑各組大鼠血清及肝、腦、卵巢等組織MDA 含量有高度明顯降低；與陽性藥對(duì)照組相比，壯精合劑高劑量組大鼠血清及肝、腦等組織MDA 含量有降低，在卵巢組織中比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明壯精合劑高劑量組在卵巢中與古漢養(yǎng)生精作用差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在血清及肝、腦等組織作用明顯優(yōu)于古漢養(yǎng)生精。

綜上所述，壯精合劑能夠明顯提高初老大鼠機(jī)體抗氧化能力和降低自由基的生成，從而起到延緩衰老的功效。但是中藥的成分是復(fù)雜多樣的，復(fù)方更是如此，對(duì)于機(jī)體的調(diào)節(jié)是多種成分綜合作用的結(jié)果，壯精合劑對(duì)體內(nèi)其他激素變化是否存在作用尚需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)。

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