王延麗，朱西杰，蔡根深，肖清燕，王 儒，李美麗

寧夏醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，銀川 750004

胃癌前病變(Gastric Precancerous Lesions，GPL)是一個(gè)病理性概念，包括腸上皮化生(Intestinal Metaplasia，IM)和異型增生(Dysplasia，Dys)，目前認(rèn)為主要是不完全性結(jié)腸型化生及中、重度異型增生，主要發(fā)生在慢性萎縮性胃炎(Chronic Atrophic Gastritis，CAG)演變過(guò)程中，是正常胃黏膜向胃癌演變的一個(gè)重要階段。胃癌前病變的臨床表現(xiàn)與慢性萎縮性胃炎相似，主要表現(xiàn)為胃痛、胃脹、心下痞滿(mǎn)，滿(mǎn)悶不舒，噯氣等癥，其表現(xiàn)與“痞滿(mǎn)”、“胃痛”相似。于1989 年10 月在江西廬山召開(kāi)的全國(guó)中醫(yī)內(nèi)科學(xué)會(huì)第五屆全國(guó)脾胃病學(xué)術(shù)會(huì)議上將胃癌前病變歸屬于“胃痞”范疇。

胃癌前病變其病因?yàn)槲锢?、化學(xué)及生物性因素長(zhǎng)期反復(fù)作用于人體所致，西醫(yī)治療效不明顯。目前認(rèn)為無(wú)論何種損傷因素通過(guò)何種方式作用于胃黏膜，最終結(jié)果都是造成細(xì)胞的功能破壞，使細(xì)胞的增殖和凋亡失衡造成黏膜損傷。Wnt2、β-catenin、Cyclin-D1 是增殖調(diào)節(jié)基因，因此Wnt2、β-catenin、Cyclin-D1 在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)是決定細(xì)胞發(fā)生增殖凋亡的重要因素。我們臨床應(yīng)用寧夏密點(diǎn)麻蜥組成的驗(yàn)方復(fù)方蜥蜴散不同微粒組合劑(以下簡(jiǎn)稱(chēng)復(fù)方蜥蜴散)治療胃癌前病變?nèi)〉昧肆己玫寞熜?。本研究旨在?yīng)用免疫組化法，觀察該驗(yàn)方對(duì)胃癌前病變模型大鼠胃黏膜細(xì)胞增殖蛋白Wnt2、Cyclin-D1、β-catenin 表達(dá)的影響，探討其對(duì)胃癌前病變的治療機(jī)制，為臨床治療提供依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 動(dòng)物

SPF 級(jí)雄性SD 大鼠120 只，4～6 周齡，體重150～180 g，SPF 大小鼠生長(zhǎng)繁殖飼料，均由寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 藥物及試劑

藥物:N-甲基-N'-硝基-N-亞硝基胍(MNNG):東京化成工業(yè)株式會(huì)社。維酶素(新鄉(xiāng)恒久遠(yuǎn)藥業(yè)有限公司)。復(fù)方蜥蜴散:由蜥蜴粉、鹿角霜粉、海螵蛸粉、炒白術(shù)粉、半枝蓮粉等組成，由寧夏醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)消化病研究所提供。0.9%氯化鈉溶液:吉林省都邦藥業(yè)股份有限公司。

試劑:兔抗大鼠多克隆Wnt2 抗體，購(gòu)自santa cruz 生物技術(shù)公司。兔抗大鼠多克隆β-catenin 抗體、兔抗大鼠多克隆Cyclin-D1 抗體購(gòu)自美國(guó)Immunoway 生物技術(shù)公司。通用型二步法免疫組化檢測(cè)試劑盒，DAB 顯色試劑盒，檸檬酸鹽緩沖液，PBS 磷酸鹽緩沖液，均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 主要儀器與設(shè)備

石蠟切片機(jī)(上海萊卡公司);超低溫冰箱(廣東科龍電器公司);隔水式恒溫培養(yǎng)箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司);高壓蒸汽消毒鍋(廣東Galanz 公司);電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海躍進(jìn)醫(yī)用光學(xué)儀器廠);漂烘片機(jī)(常州市雅博電子設(shè)備有限公司);孵育盒(濕盒)(福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司);病理組織包埋冷凍臺(tái)(常州中威電子儀器廠);圖像采集系統(tǒng)顯微鏡(日本OLYMPUS 公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物分組

120 只SPF 級(jí)SD 雄性大鼠，隨機(jī)分為6 組，即正常對(duì)照組、復(fù)方蜥蜴散80 目治療組、100 目治療組、80 目和100 目等量混合治療組、胃癌前病變模型對(duì)照組、維酶素治療組，編為A-F 組，每組20 只，相同條件下分籠飼養(yǎng)，SPF 大小鼠生長(zhǎng)繁殖飼料喂養(yǎng)，自由飲水，室溫(20 ±2)℃，濕度55%～60%。

2.2 藥物配制

MNNG 溶液:按0.017 mol/L 濃度的MNNG 溶液。維酶素混懸液:維酶素片研末，用生理鹽水配成0.1 g/mL 的混懸液。復(fù)方蜥蜴散不同微粒組合劑混懸液:復(fù)方蜥蜴散80 目、100 目、80 目和100 目等量混合物經(jīng)過(guò)粉碎、高溫滅菌、蒸2.5h，晾干后，用雙蒸水分別配成0.14 g/mL 糊劑混懸液裝瓶。均4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 造模方法及治療方法

2.3.1 PLGC 模型的建立

參閱大量的文獻(xiàn)資料［1，2］，具體造模方法:以0.017 mol/L 的MNNG 溶液，按0.5 mL/100 g 體重對(duì)大鼠灌胃，每日一次，連續(xù)8 周，輔助采取2 日飽食、l 日饑餓的饑飽失常法，飽食日自由食用，饑餓日禁食不禁水，并不時(shí)給予情緒刺激因素，A 組大鼠充足供應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料及清潔蒸餾水。

2.3.2 治療措施

造模8 周后，證實(shí)符合胃癌前病變的病理診斷(見(jiàn)圖4 中HE)。A 組大鼠仍然充足供食及水，B組、C 組、D 組大鼠分別給予復(fù)方蜥蜴散80 目、100目、80 目100 目等量混合糊劑混懸液10 mL/kg·d灌胃;E 組大鼠開(kāi)始給予0.9%氯化鈉溶液10 mL/kg·d 灌胃;F 組大鼠給予0.1 g/mL 維酶素混懸液10 mL/kg·d(1.0 g/kg·d)灌胃。各1 次/天，連續(xù)用藥12 周。

2.4 標(biāo)本采集和處理

2.4.1 標(biāo)本采集

實(shí)驗(yàn)進(jìn)行至預(yù)定階段，大鼠禁食水24 h 后，全部用10%水合氯醛溶液腹腔內(nèi)注射麻醉大鼠。剖腹，距賁門(mén)和幽門(mén)1.5 cm 離斷取出全胃。沿胃大彎側(cè)剖開(kāi)，冰生理鹽水沖洗后，濾紙吸干鋪開(kāi)。胃黏膜標(biāo)本固定于10%的中性福爾馬林溶液中，胃體部取2 cm ×5 mm 縱切條狀組織，固定24 h 后，梯度脫水，石蠟包埋備用。常規(guī)HE 染色做病理組織學(xué)檢驗(yàn)，鄰近切片做免疫組化染色。

2.4.2 免疫組化染色

Wnt2 與β-catenin、Cyclin-D1 免疫組化染色步驟采用通用型二步法，步驟如下:①將實(shí)驗(yàn)用切片置于60 ℃恒溫電烤箱中過(guò)夜(12～16 h)。切片按步驟依次脫蠟水化。②高壓法抗原熱修復(fù):枸櫞酸抗原修復(fù)液修復(fù)。③消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的影響:每張切片加入1 滴(50 μL)3% H2O2，室溫或37 ℃孵育10 min。PBS 洗3 min ×3 次。④消除非特異性染色:每張切片加1 滴(50 μL)的正常山羊非免疫性血清封閉，室溫或37 ℃孵育10 min。⑤加“一抗”:甩去血清，每張切片加1 滴(50 μL)新鮮配制的一抗，置于濕盒內(nèi)放入4 ℃冰箱孵育過(guò)夜。⑥將濕盒從4 ℃冰箱中取出，放入37 ℃電熱恒溫箱中復(fù)溫45 min。PBS 洗5 min ×3 次。⑦加二抗:甩去PBS 液，每張切片加1 滴(50 μL)二抗工作液，室溫或37 ℃孵育30 min。PBS 沖洗，3 min×3 次。⑧顯色:甩去PBS 液，每張切片加2 滴(100 μL)新鮮配制的DAB 染色液，2～10 min 后顯微鏡下觀察，有陽(yáng)性顯色即用自來(lái)水沖洗中止顯色。⑨復(fù)染:按步驟要求進(jìn)行復(fù)染和脫水。⑩封片:二甲苯透明5 min后涼干，中性樹(shù)膠封片。

Wnt2 抗體使用濃度為1:100;β-catenin 抗體使用濃度為1∶150;Cyclin-D1 抗體使用濃度為1∶100。

2.5 圖像采集分析方法與統(tǒng)計(jì)方法

2.5.1 圖像采集分析方法

采用數(shù)碼顯微鏡捕捉免疫組化圖片(jpg 格式):采用Image-Pro Plus 6.0 圖像分析系統(tǒng)，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野測(cè)定陽(yáng)性區(qū)域圖像的平均光密度(AOD)。圖像分割與自動(dòng)計(jì)算:選定分割范圍后，點(diǎn)擊“分割”按鈕選擇手動(dòng)分割，根據(jù)IHC 陽(yáng)性染色區(qū)域的不同，通過(guò)RGB 顏色直方圖來(lái)調(diào)節(jié)分割的范圍及閾值。點(diǎn)擊“自動(dòng)計(jì)算”，對(duì)已分割好的圖像自動(dòng)測(cè)定陽(yáng)性區(qū)域的光學(xué)密度值。

2.5.2 統(tǒng)計(jì)結(jié)果處理

統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS18.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。人工計(jì)數(shù)方法所得結(jié)果采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)比較，圖像采集分析方法所得結(jié)果用單因素方差分析處理，所有計(jì)量資料呈正態(tài)分布，結(jié)果用表示，組間比較經(jīng)方差其同性檢驗(yàn)后采用成組t 檢驗(yàn);多組間比較當(dāng)各組方差齊時(shí)用LSD 法進(jìn)行均數(shù)間的兩兩比較，當(dāng)各組方差不齊時(shí)用Dunnett 法進(jìn)行均數(shù)間的兩兩比較。以P＜0.05 為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 各組大鼠Wnt2 免疫組化染色統(tǒng)計(jì)結(jié)果

Wnt2 蛋白陽(yáng)性信號(hào)呈棕黃色，主要出現(xiàn)在細(xì)胞胞質(zhì)及胞膜。正常對(duì)照組大鼠胃黏膜有極少量陽(yáng)性細(xì)胞即細(xì)胞質(zhì)染色。維酶素組和復(fù)方蜥蜴散組大鼠胃黏膜部分細(xì)胞可見(jiàn)黃色、褐色程度不同的染色，與模型組比較染色較淺。模型組細(xì)胞染色最重。見(jiàn)圖1(W-A～W-F)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果:通過(guò)圖像分析系統(tǒng)對(duì)免疫組化圖像光密度的測(cè)算，B、C、D 各組細(xì)胞Wnt2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率顯著與E 組有顯著差異(P＜0.01)，D 組細(xì)胞Wnt2 蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率顯著與F組有顯著差異(P＜0.01)。見(jiàn)表1。

圖1 正常組(W-A)、TCLP 80 目組(W-B)、TCLP 100 目組(W-C)、TCLP 80 +100 目組(W-D)、模型組(WE)及維酶素(W-F)Wnt2 蛋白陽(yáng)性表達(dá)Fig.1 Expression of Wnt2 in control group (W-A)，TCLP-80 group (W-B)，TCLP-100 group (W-C)，TCLP-80+100 group (W-D)，model group (W-E)and vitacoenzyme group (W-F)

表1 各組大鼠Wnt2 蛋白表達(dá)的平均光密度比較()Table 1 Average optical density of Wnt2 protein expression in each group ()

表1 各組大鼠Wnt2 蛋白表達(dá)的平均光密度比較()Table 1 Average optical density of Wnt2 protein expression in each group ()

注:各治療組與模型E 組比較，▲P＜0.05，△P＜0.01;與維霉素F 組比較，◆P＜0.05，■P＜0.01。Note:Compared with model，▲P＜0.01，△P＜0.01;Compared with vitacoenzyme group，◆P＜0.05，■P＜0.01.

3.2 各組大鼠β-catenin 免疫組化染色統(tǒng)計(jì)結(jié)果

β-catenin 陽(yáng)性信號(hào)主要定位于細(xì)胞-細(xì)胞接觸側(cè)的細(xì)胞膜，在胞質(zhì)僅有很弱的表達(dá)，而在胃癌前病例中可見(jiàn)β-catenin 的異常表達(dá)，即在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中表達(dá)增強(qiáng)。免疫組化結(jié)果顯示，維酶素組和復(fù)方蜥蜴散組大鼠胃黏膜部分細(xì)胞可見(jiàn)黃色、褐色程度不同的染色，與模型組比較染色較淺。模型組細(xì)胞染色最深。見(jiàn)圖2(B-A～B-F)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果:通過(guò)圖像分析系統(tǒng)對(duì)免疫組化圖像光密度的測(cè)算，B、C、D 各組細(xì)胞β-catenin 蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率與E 組有顯著差異(P＜0.01)，D 組細(xì)胞β-catenin 的陽(yáng)性表達(dá)率與F 組有顯著差異(P＜0.01)。見(jiàn)表2。

圖1 正常組(B-A)、TCLP 80 目組(B-B)、TCLP 100 目組(B-C)、TCLP 80 +100 目組(B-D)、模型組(B-E)及維酶素(B-F)組β-catenin 蛋白陽(yáng)性表達(dá)Fig.2 Expression of β-catenin in control group (B-A)，TCLP-80 group (B-B)，TCLP-100 group(B-C)，TCLP-80 +100 group (B-D)，model group (B-E)and vitacoenzyme group (B-F)

表2 各組大鼠β-catenin 蛋白表達(dá)的平均光密度比較()Table 2 Average optical density of β-catenin protein expression in each group ()

表2 各組大鼠β-catenin 蛋白表達(dá)的平均光密度比較()Table 2 Average optical density of β-catenin protein expression in each group ()

注:各治療組與模型E 組比較，▲P＜0.01;與維霉素F 組比較，◆P＜0.05，■P＜0.01。Note:Compared with model，▲P＜0.01;Compared with vitacoenzyme group，◆P＜0.05，■P＜0.01.

3.3 各組大鼠Cyclin-D1 免疫組化染色統(tǒng)計(jì)結(jié)果

Cyclin-D 1 蛋白陽(yáng)性著色位于細(xì)胞漿和細(xì)胞核，細(xì)胞核呈棕黃色細(xì)小顆粒著色為陽(yáng)性細(xì)胞，免疫組化結(jié)果顯示，維酶素組和復(fù)方蜥蜴散組大鼠胃黏膜部分細(xì)胞可見(jiàn)黃色、褐色程度不同的染色，與模型組比較染色較淺。模型組細(xì)胞染色最深。見(jiàn)圖3(C-A～C-F)。陰性對(duì)照片無(wú)表達(dá)。見(jiàn)圖4 中Y-1。統(tǒng)計(jì)結(jié)果:通過(guò)圖像分析系統(tǒng)對(duì)免疫組化圖像光密度的測(cè)算，B、C、D 各組細(xì)胞Cyclin-D1 蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率與E 組有顯著差異(P＜0.01)，D 組細(xì)胞Cyclin-D1 蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率與F 組有顯著差異(P＜0.05)。見(jiàn)表3。

圖3 正常組(C-A)、TCLP 80 目組(C-B)、TCLP 100 目組(C-C)、TCLP 80 +100 目組(C-D)、模型組(C-E)及維酶素(C-F)Cyclin-D1 蛋白陽(yáng)性表達(dá)Fig.3 Expression of Cyclin-D1 in control group (C-A)，TCLP-80 group(C-B)，TCLP-100 group (C-C)，TCLP-80 +100 group (C-D)，model group (C-E)and vitacoenzyme group (C-F)

表3 各組大鼠Cyclin-D1 蛋白表達(dá)的平均光密度比較()Table 3 Average optical density of Cyclin-D1 protein expression in each group ()

表3 各組大鼠Cyclin-D1 蛋白表達(dá)的平均光密度比較()Table 3 Average optical density of Cyclin-D1 protein expression in each group ()

注:各治療組與模型E 組比較，▲P＜0.01;與維霉素F 組比較，◆P＜0.05，■P＜0.01。Note:Compared with model，▲P＜0.01;Compared with vitacoenzyme，◆P＜0.05，■P＜0.01.

3.4 染色圖片

各個(gè)蛋白因子均表現(xiàn)為:正常對(duì)照A 組大鼠胃黏膜有少量陽(yáng)性細(xì)胞染色，且染色最淺，維酶素F組和復(fù)方蜥蜴散B、C、D 各組大鼠胃黏膜部分細(xì)胞可見(jiàn)黃色、褐色程度不同的染色，與模型組比較染色較淺。模型E 組細(xì)胞染色最重。圖4 中HE 圖片顯示細(xì)胞不規(guī)則，核大深染，核漿比例失調(diào)，核分裂象增多，出現(xiàn)高級(jí)別異型增生的異常細(xì)胞。圖4 中Y-1 示正常細(xì)胞表現(xiàn)。

圖4 造膜后HE 染色圖片和陰性對(duì)照?qǐng)D片F(xiàn)ig.4 HE staining images of model and negative control

4 討論

細(xì)胞增殖和凋亡是中醫(yī)陰陽(yáng)學(xué)說(shuō)在細(xì)胞分子水平上的體現(xiàn)。人體正常胃黏膜上皮組織更新較快，以細(xì)胞凋亡和增殖維持著細(xì)胞總數(shù)的平衡，若這一平衡失調(diào)，就有可能導(dǎo)致疾病的發(fā)生。從正常胃黏膜、輕度不典型增生、重度不典型增生、癌前病變、早期胃癌到進(jìn)展期胃癌的發(fā)展過(guò)程中，細(xì)胞凋亡逐漸受抑制，細(xì)胞惡性增生逐漸顯現(xiàn)，胃黏膜病變細(xì)胞凋亡減少，生存期延長(zhǎng)，細(xì)胞大量堆積。細(xì)胞增殖指數(shù)逐漸增大，凋亡指數(shù)逐漸減小，增殖指數(shù)/凋亡指數(shù)比值增大是衡量胃癌發(fā)生、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移的可靠指標(biāo)。同時(shí)也顯現(xiàn)出抑制凋亡的基因表達(dá)增加，促進(jìn)凋亡的基因表達(dá)受到抑制［3］。腫瘤是細(xì)胞增殖相對(duì)超過(guò)其凋亡造成的，凋亡發(fā)生及調(diào)控是細(xì)胞中多種分子之間相互作用的結(jié)果。

Wnt 信號(hào)通路由一系列癌基因和抑癌基因編碼的蛋白質(zhì)組成，各種蛋白質(zhì)之間彼此聯(lián)系、相互制約。經(jīng)典的Wnt 通路貫穿于細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化、凋亡及轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵途徑，Wnt2、β-catenin、Cyclin-D1為Wnt/β-catenin 信號(hào)通路中重要的組成成分，它們?cè)谡{(diào)節(jié)細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞分化及調(diào)控細(xì)胞周期中起重要作用［4］。Wnt 基因編碼的Wnt2 蛋白是啟動(dòng)這一傳導(dǎo)通路的信號(hào)蛋白，它與細(xì)胞增殖分化關(guān)系最為密切，其異常啟動(dòng)可產(chǎn)生致癌作用。β-catenin被認(rèn)為是經(jīng)典Wnt 通路中的關(guān)鍵蛋白及其在胞漿內(nèi)主要的效應(yīng)分子，對(duì)細(xì)胞增殖分化的調(diào)控作用在胚胎發(fā)育和腫瘤發(fā)生中已受到廣泛關(guān)注，在Wnt 信號(hào)通路中是正向調(diào)節(jié)因素。正常情況下，β-catenin通過(guò)與E-cadherin 形成復(fù)合物定位于細(xì)胞膜的胞漿面而介導(dǎo)細(xì)胞間的黏附;當(dāng)細(xì)胞被Wnt 蛋白配體激活后，Wnt2 的表達(dá)上調(diào)能夠使胞漿內(nèi)β-catenin 免受降解，穩(wěn)定化，在胞漿內(nèi)積聚，移位到核內(nèi)，與T細(xì)胞因子結(jié)合，增強(qiáng)一些在正常細(xì)胞增殖中起重要作用的基因的轉(zhuǎn)錄，誘發(fā)癌變。β-catenin 是Wnt 信號(hào)傳導(dǎo)途徑中最為關(guān)鍵的調(diào)控子，其除了介導(dǎo)細(xì)胞粘附外還參與基因表達(dá)，當(dāng)β-catenin 在細(xì)胞核內(nèi)異常蓄積并活化基因時(shí)β-catenin 基因就成了癌基因。Wnt/β-catenin 信號(hào)通路的異常激活是人類(lèi)腫瘤發(fā)生的重要機(jī)制之一，β-catenin 異常蓄積正是此通路激活的主要表現(xiàn)。β-catenin 介導(dǎo)的Wnt 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路異常激活導(dǎo)致腫瘤發(fā)生是腫瘤早期事件。Cyclin-D1 是Wnt 通路下游的關(guān)鍵靶基因，是細(xì)胞周期蛋白家族中調(diào)控細(xì)胞周期G1 期的關(guān)鍵蛋白，生命個(gè)體細(xì)胞周期的關(guān)鍵是G1 期的啟動(dòng)，而細(xì)胞周期調(diào)控異常與細(xì)胞癌變密切相關(guān)。Cyclin-D1 的主要功能是促進(jìn)細(xì)胞增殖，其過(guò)度表達(dá)可致細(xì)胞增殖失控而惡性化，在多種腫瘤發(fā)生發(fā)展及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中扮演重要角色［5］，并且已被公認(rèn)為是一種原癌基因。Wnt 通路致癌的關(guān)鍵是β-catenin 降解障礙致使胞漿內(nèi)游離的β-catenin 聚集并與Tcf/Lef 結(jié)合進(jìn)入細(xì)胞核，啟動(dòng)下游靶基因Cyclin-D1 的轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。

本研究顯示在胃癌前病變模型大鼠中，Wnt2、βcatenin、Cyclin-D1 存在著高表達(dá)，經(jīng)過(guò)復(fù)方蜥蜴散治療后，能顯著降低Wnt2、β-catenin、Cyclin-D1 蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率，并且80 目與100 目不同微粒等量組合在各治療組中效果最好(P＜0.05)。Wnt2、βcatenin、Cyclin-D1 表達(dá)下降提示復(fù)方蜥蜴散可能通過(guò)抑制增殖基因的激活，控制和維持細(xì)胞的正常生長(zhǎng)，阻斷胃癌前病變病變細(xì)胞的增殖，促進(jìn)胃癌前病變病變細(xì)胞的凋亡，從而逆轉(zhuǎn)胃黏膜損傷的病理生化指標(biāo)，修復(fù)胃黏膜損傷，防止胃癌前病變的發(fā)生及發(fā)展。

胃癌前病變的形成是一個(gè)長(zhǎng)期慢性病變過(guò)程，脾胃虛弱是其病理演變的關(guān)鍵，脾胃本弱，加之調(diào)養(yǎng)失當(dāng)，外邪侵襲等因素，導(dǎo)致中氣更虛，氣虛不足以行血，則血行遲緩，逐漸形成壅滯成瘀。因瘀血阻絡(luò)使得胃黏膜腺體血運(yùn)障礙、營(yíng)養(yǎng)匱乏，致各種毒素產(chǎn)物的聚集，因此導(dǎo)師立法益氣養(yǎng)陰、化瘀解毒，并根據(jù)胃癌前病變病程、療程均較長(zhǎng)，中藥煎劑費(fèi)時(shí)費(fèi)力很不方便又不經(jīng)濟(jì)，患者往往依從性差，《臨證指南醫(yī)案》中“慢性疾患，以湯劑蕩滌，速而不達(dá)，乃胃氣不受藥之故”，“積滯宜溫下者，以散劑徐攻，免傷胃氣”，“丸劑、膏劑緩圖，以保胃氣”。因此在胃癌前病變胃黏膜損傷的修復(fù)中，散劑的治療作用優(yōu)于湯劑、丸劑，基于此種認(rèn)識(shí)，導(dǎo)師組成復(fù)方蜥蜴散，而散劑中顆粒的大小是影響其作用關(guān)鍵因素，經(jīng)臨床及實(shí)驗(yàn)證實(shí)過(guò)80 目篩和過(guò)100 目篩的粗細(xì)不同顆粒的結(jié)合才是較好的治療藥物劑型。通過(guò)藥物顆粒大小的不同使中藥制劑口服后可以延長(zhǎng)其藥效及作用于胃腸道的時(shí)間，加上采用糊劑給藥形式，使藥物能夠很好的粘附在胃黏膜上，形成保護(hù)膜，發(fā)揮修復(fù)及逆轉(zhuǎn)黏膜增生、腸化的作用。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，復(fù)方蜥蜴散中君藥蜥蜴具養(yǎng)精血、破結(jié)散瘀、行氣活血、清熱解毒，有抗癌作用，能明顯增強(qiáng)人體免疫功能，消除胃腸道癥狀，對(duì)胃腸道有特殊的親和力和靶向治療作用［6］;臣以黃芪補(bǔ)氣生血、托毒生肌、利水消腫;白術(shù)益氣健脾、燥濕利水，白芍補(bǔ)血斂陰、平肝止痛;三者合用益氣養(yǎng)陰，健脾利濕，既扶助正氣，又提高胃腸動(dòng)力，促進(jìn)胃排空，加速水濕瘀血等“毒性”物質(zhì)的排出，減少刺激性物質(zhì)損傷胃黏膜，邪祛而正不傷;丹參活血祛瘀生新，消癰排膿止痛，三七活血定痛、化瘀止血、消腫生肌，兩者合用可改善胃黏膜微循環(huán)，促進(jìn)胃黏膜損傷的再生修復(fù)。佐以半枝蓮清熱解毒，利濕殺“蟲(chóng)”;烏梅養(yǎng)陰柔肝止痛，健胃生酸助運(yùn)化;鹿角霜補(bǔ)中益血、通利血脈;海螵蛸制酸止痛、收濕斂瘡。使以甘草調(diào)和諸藥的同時(shí)，既可增強(qiáng)半枝蓮清熱解毒之效，又助黃芪、白術(shù)補(bǔ)中益氣，還可增強(qiáng)白芍緩急止痛的功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果發(fā)現(xiàn):從黃芪中提取的黃芪多糖可通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫功能來(lái)增強(qiáng)IL-2/LAK 抗腫瘤作用，通過(guò)促進(jìn)抗癌素的分泌、IL-2R 受體的表達(dá)、LAK 前體細(xì)胞的增生而達(dá)到抗腫瘤作用;白術(shù)對(duì)免疫系統(tǒng)的作用主要是抗炎、抗腫瘤、抗氧化，白術(shù)甲醇提取物能夠誘導(dǎo)人T 淋巴瘤Jurkat 細(xì)胞、U937 和HL-60 白血病細(xì)胞凋亡，而達(dá)到抗腫瘤的作用;從丹參中提取出的脂溶性有效成分丹參酮òA 具有抑制多種腫瘤細(xì)胞(白血病細(xì)胞、實(shí)體瘤細(xì)胞等)增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和/或分化的作用［7］;三七皂苷可通過(guò)直接抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡與分化、增強(qiáng)和刺激機(jī)體免疫功能等多重機(jī)制抗腫瘤。半枝蓮主要在增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抑制腫瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡等方面發(fā)揮抗腫瘤作用［8］。諸藥合用益氣養(yǎng)血扶正，化瘀解毒祛邪，黏膜得養(yǎng)，毒瘀得散，腸化、增生得消，有效干預(yù)甚至逆轉(zhuǎn)癌前病變，避免癌癥的發(fā)生。且臨床療效確切、安全性好、毒副作用小、長(zhǎng)期服用總有效率在90%以上，也證實(shí)了我們對(duì)其修復(fù)作用的判斷［9，10］。

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