郝紅偉，劉 敏，王唯霖，劉新愚，馬 蕾，趙 文

河北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院 河北省農(nóng)產(chǎn)品加工工程技術(shù)中心，保定 071001

目前醫(yī)療、食品等領(lǐng)域使用較多的是合成抗氧化劑，而動(dòng)物試驗(yàn)表明，合成抗氧化劑如二丁基羥基甲苯(BHT)、丁基羥基茴香醚(BHA)等有潛在的毒副作用，因此許多研究者開始從我國(guó)豐富的中草藥資源中尋求高效、低毒的純天然抗氧化劑［1］。目前，中草藥抗氧化劑的開發(fā)已成為現(xiàn)代中藥發(fā)展的主流，而復(fù)方中草藥更是獲得了研究者的青睞。復(fù)方中草藥由不同藥理作用的單味中藥組成，不僅具有藥效互補(bǔ)以及療效增強(qiáng)的作用，而且各單味中藥的單劑量與不良作用可相應(yīng)地降低，因此在實(shí)際使用中具有更大的優(yōu)勢(shì)［2，3］。

近幾年的研究發(fā)現(xiàn)，某些中草藥如黃芪、烏梅、何首烏等均具有良好的抗氧化作用。吳驍?shù)龋?］研究發(fā)現(xiàn)，黃芪注射液可有效提高機(jī)體抗氧化酶活性，增強(qiáng)免疫器官性能，具有較好的抗衰老作用。Guo等［5］研究證實(shí)，通過(guò)黃柏、白術(shù)等中藥所熬制的成分也具有一定的抗氧化功能。李競(jìng)等［6］研究表明，由黃芪、丹參、枸杞等十味中藥所組成的復(fù)方制劑對(duì)小白鼠機(jī)體的抗氧化功能具有一定的增強(qiáng)作用，可減少多余的自由基對(duì)機(jī)體造成的損傷。本實(shí)驗(yàn)室通過(guò)前期研究獲得該復(fù)方中草藥提取物，該復(fù)方中草藥提取物能夠增強(qiáng)免疫功能，改善腸道菌群。為了研究其抗氧化活性，本試驗(yàn)采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法，觀察復(fù)方中草藥提取物對(duì)小鼠外周血和不同組織器官氧化及抗氧化指標(biāo)，以明確復(fù)方中草藥提取物的保健功能提供了一定的理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 復(fù)方中草藥提取物的制備

烏梅、馬齒莧、大青葉、野菊花、魚腥草、柴胡、黃柏、香薷、生地均購(gòu)于河北省保定市樂(lè)仁堂大藥房，提取液按照參照文獻(xiàn)［7］所敘述的方法進(jìn)行制備，4℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

SPF 級(jí)昆明種雌性小鼠(18～22 g)，購(gòu)于河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào):SCXK(冀)2008-1-0003。

1.3 主要儀器

超聲細(xì)胞破碎儀(Scientz-ⅡD，寧波新芝生物科技股份有限公司)，酶標(biāo)儀(1500-823，Thermo Scientific 公司)，96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板(Corning 公司)，80-2離心機(jī)(金壇市榮華儀器制造有限公司)，漩渦混合器(上海上登實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)，HW·SY11-K 型電熱恒溫水浴鍋(北京市長(zhǎng)風(fēng)儀器儀表公司)。

1.4 主要試劑

超氧化物歧化酶、丙二醛、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶、考馬斯亮藍(lán)測(cè)定蛋白質(zhì)試劑盒，均購(gòu)于江蘇省南京市建成生物工程研究所。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 劑量設(shè)計(jì)與動(dòng)物處理

將小鼠隨機(jī)分為4 組，為溶劑對(duì)照組，復(fù)方中草藥提取物低、中、高劑量組，每組10 只。每日定時(shí)等體積灌胃，處理劑量分別為100、200 和400 mg/kg·bw，溶劑對(duì)照組灌胃蒸餾水。持續(xù)28 d。

1.5.2 樣本采集與制備

末次給藥24 h 后，禁食12 h，稱重，摘眼球取血，制備血清。采用頸椎脫臼法處死小鼠，解剖，取其心、肝、脾以及腎組織，所有樣本均儲(chǔ)存于-80 ℃冰箱中備用。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書中的操作進(jìn)行樣本制備。

1.5.3 指標(biāo)測(cè)定

采用酶標(biāo)儀對(duì)SOD［8］和GSH-Px［9］的活性以及MDA［10］的含量進(jìn)行測(cè)定，蛋白定量采用BCA法［11］。

1.5.4 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 17.0 進(jìn)行ANOVA 單因素方差分析。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 復(fù)方中草藥提取物對(duì)小鼠臟器指數(shù)的影響

從表1 可知，三個(gè)劑量組小鼠的心臟指數(shù)均高于對(duì)照組，低劑量組的心臟系數(shù)與對(duì)照組相比上升了15.38%，存在顯著差異(P＜0.05);腎臟系數(shù)也表現(xiàn)為劑量組高于對(duì)照組，且隨劑量的增加呈上升趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而各劑量組的肝、脾指數(shù)與對(duì)照組之間均無(wú)明顯差別。

表1 復(fù)方中草藥提取物對(duì)小鼠心、肝、脾、腎指數(shù)的影響Table 1 Effects of herbal medicament extracts on the index of heart，liver，spleen and kidney of mice

2.2 復(fù)方中草藥提取物對(duì)小鼠外周血抗氧化和脂質(zhì)過(guò)氧化指標(biāo)的影響

從表2 可知，三個(gè)劑量組小鼠的外周血SOD、GSH-PX 活性均高于對(duì)照組，MDA 含量均低于對(duì)照組。SOD 活性中、高劑量組與對(duì)照組比較差異極顯著(P＜0.01);MDA 含量三個(gè)劑量組與對(duì)照組比較均差異顯著(P＜0.05);GSH-PX 活性中、高劑量組與對(duì)照組比較差異極顯著(P＜0.01)。

2.3 復(fù)方中草藥提取物對(duì)小鼠心臟抗氧化及脂質(zhì)化氧化指標(biāo)的影響

從表3 可知，三個(gè)劑量組小鼠的SOD 活性均高于對(duì)照組，MDA 含量均低于對(duì)照組。SOD 活性三個(gè)劑量組與對(duì)照組比較差異極顯著(P＜0.01);MDA含量三個(gè)劑量組與對(duì)照組比較差異極顯著(P＜0.01);GSH-PX 活性三個(gè)劑量組均高于對(duì)照組，但 差異無(wú)顯著(P＜0.05)。

表2 復(fù)方中草藥提取物對(duì)小鼠外周血SOD、GSH-Px 和MDA 的影響Table 2 Effects of herbal medicament extracts on SOD，GSH-Px and MDA content in the peripheral blood of mice

表3 復(fù)方中草藥提取物對(duì)小鼠心臟SOD，GSH-Px 和MDA 的影響Table 3 Effects of herbal medicament extracts on SOD，GSH-Px and MDA content in the heart of mice

2.4 復(fù)方中草藥提取物對(duì)小鼠肝臟抗氧化及脂質(zhì)過(guò)氧化指標(biāo)的影響

從表4 可知，三個(gè)劑量組小鼠的SOD、GSH-PX活性均高于對(duì)照組，MDA 含量均低于對(duì)照組。SOD活性三個(gè)劑量組與對(duì)照組比較差異極顯著(P＜0.01);MDA 含量三個(gè)劑量組與對(duì)照組比較差異顯著(P＜0.05);GSH-PX 活性三個(gè)劑量組與對(duì)照組比較差異極顯著(P＜0.01)。

表4 復(fù)方中草藥提取物對(duì)小鼠肝臟SOD、GSH-Px 和MDA 的影響Table 4 Effects of herbal medicament extracts on SOD，GSH-Px and MDA content in the liver of mice

2.5 復(fù)方中草藥提取物對(duì)小鼠脾臟抗氧化及脂質(zhì)過(guò)氧化指標(biāo)的影響

從表5 可知，三個(gè)劑量組小鼠的SOD、GSH-PX活性均高于對(duì)照組，MDA 含量均低于對(duì)照組。SOD活性中、高劑量組與對(duì)照組比較差異極顯著(P＜0.01);MDA 含量三個(gè)劑量組與對(duì)照組比較差異極顯著(P＜0.01);GSH-PX 活性三個(gè)劑量組與對(duì)照組比較差異極顯著(P＜0.01)。

2.6 復(fù)方中草藥提取物對(duì)小鼠腎臟抗氧化及脂質(zhì)過(guò)氧化指標(biāo)的影響

從表6 可知，三個(gè)劑量組小鼠的SOD、GSH-PX活性均高于對(duì)照組，MDA 含量均低于對(duì)照組。SOD活性中、高劑量組與對(duì)照組比較差異極顯著(P＜0.01);MDA 含量中、高劑量組與對(duì)照組比較差異極顯著(P＜0.01);GSH-PX 活性中、高劑量組與對(duì)照組比較差異極顯著(P＜0.01)。

表5 復(fù)方中草藥提取物對(duì)小鼠脾臟SOD、GSH-Px 和MDA 的影響Table 5 Effects of herbal medicament extracts on SOD，GSH-Px and MDA content in the spleen of mice

表6 復(fù)方中草藥提取物對(duì)小鼠腎臟SOD、GSH-Px 和MDA 的影響Table 6 Effects of herbal medicament extracts on SOD，GSH-Px and MDA content in the kidney of mice

3 討論

本試驗(yàn)以小鼠血清及心、肝、脾、腎組織的SOD、GSH-Px 活性和MDA 含量為檢測(cè)指標(biāo)，研究了復(fù)方中草藥提取物的抗氧化活性。結(jié)果表明，與溶劑對(duì)照組比較，復(fù)方中草藥提取物可顯著提高小鼠血清、心、肝、脾、腎組織中SOD 活性及小鼠血清、肝、脾、腎組織中GSH-Px 活性，并顯著降低小鼠血清、心、肝、脾、腎組織中MDA 含量。

倪愛(ài)威等［12］研究表明，馬齒莧提取物的高劑量1200 mg/kg·bw·d 可極顯著提高經(jīng)D-gal 致氧化損傷的小鼠血清及肝中SOD 和GSH-PX 的活性，低劑量300 mg/kg·bw·d 可極顯著減少D-gal 致氧化損傷的小鼠血清及肝中MDA 的含量。本研究表明，復(fù)方中草藥提取物中劑量200 mg/kg·bw 可極顯著提高小鼠外周血中SOD 和GSH-PX 的活性，活性分別提高46.43%和17.23%，顯著降低了小鼠肝臟中MDA 的含量，其含量降低了11.60%;低劑量100 mg/kg·bw 可極顯著提高小鼠肝臟SOD 和GSH-PX 的活性，活性分別提高了29.78% 和15.38%，極顯著降低了血清中MDA 的含量，含量降低了14.56%。該復(fù)方中草藥提取物中馬齒莧占20%，馬齒莧及其他單味中草藥組成的復(fù)方中草藥提取物抗氧化活性強(qiáng)于單味馬齒莧提取物的抗氧化活性，這可能與各單味中草藥之間的相互協(xié)同作用有關(guān)。

吳玉臣等［13］研究發(fā)現(xiàn)，由炙黃芪、何首烏、黃柏等中草藥組成的復(fù)方提取物可顯著提高雞血液中SOD 的活性以及總抗氧化能力。寧鵬［14］研究表明，由當(dāng)歸、益母草等中草藥組成的濃度為0.43 g/mL的復(fù)方提取物并以0.2 mL/d 口腔灌服衰老小鼠，結(jié)果顯示，該復(fù)方提取物能使衰老小鼠除腎臟外的其他臟器如心臟、肝臟、脾臟和肺臟中SOD 的活性增強(qiáng)和MDA 的含量下降。本研究證明復(fù)方中草藥提取物低劑量100 mg/kg·bw 可極顯著提高小鼠心臟中SOD 的活性及降低MDA 的含量，SOD 活性可提高14.13%，MDA 含量可降低12.48%;中劑量200 mg/kg·bw 可極顯著提高小鼠脾臟中SOD 和GSHPx 的活性及降低MDA 的含量，SOD 活性分別提高了34.71%和16.63%，MDA 含量降低了49.94%;中劑量200 mg/kg·bw 顯著提高了小鼠腎臟中SOD和GSH-Px 的活性及降低了MDA 的含量，SOD 活性分別提高了83.74%和28.73%，MDA 含量降低了22.49%。與寧鵬研究的復(fù)方中草藥結(jié)果比較，本研究中該復(fù)方中草藥提取物對(duì)小鼠機(jī)體顯示出更強(qiáng)的抗氧化能力。

綜上所述，該復(fù)方中草藥提取物有很好的抗氧化活性，通過(guò)增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體清除超氧自由基的能力，阻斷動(dòng)物體內(nèi)超氧自由基與過(guò)氧化脂質(zhì)所發(fā)生的一系列反應(yīng)，進(jìn)而保護(hù)機(jī)體細(xì)胞免受過(guò)氧化損傷，減緩衰老。與溶劑對(duì)照組相比，該復(fù)方中草藥提取物劑量組不僅能提高血清及臟器中SOD 和GSH-Px 的活性，而且也能降低MDA 的含量。而對(duì)于該復(fù)方中草藥提取物的有效抗氧化成分以及抗氧化機(jī)制尚未明確，有待進(jìn)一步探索。

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