曾 嶸，黃建春，陳春霞，付書婕，黃仁彬*

1廣西醫(yī)科大學藥學院;2 廣西江濱醫(yī)院，南寧 530021

玉郎傘是一種尚未開發(fā)利用的民間草藥，為蝶形花科植物疏葉崖豆［Millettia pulchra Kurz var.laxior (Dunn)Z.Wei］的塊根，用于治療高血壓、跌打損傷、消化不良、病后虛弱等。研究表明本品具有保護心肌、保肝及抗自由基、調(diào)節(jié)免疫等作用［1-3］。本實驗主要研究玉郎傘水提物及從玉郎傘中分離提取三種有效成份——黃酮、皂苷、多糖的抗炎作用。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

JA1003 型上皿電子天平(上海天平儀器廠);DH-X 型電熱恒溫干燥箱(上海躍進醫(yī)療器械一廠)。地塞米松磷酸鈉注射液(天津藥業(yè)集團新鄭股份有限公司);角叉菜膠(sigma 公司);巴豆油(本實驗室自制);玉郎傘水提物、黃酮、皂苷、多糖均由本課題研究小組自行提取，另文報道，并取得專利一項［4］。

1.2 動物

小鼠，20～25 g，雌雄兼用，由本校動物實驗中心提供。飼養(yǎng)條件2 級，室溫保持在22～24 ℃，相對濕度50%，光照時間7:00～17:00。試驗動物生產(chǎn)許可證:SCXK 桂2003-0003。

2 實驗方法

2.1 小鼠足跖腫脹法

參照文獻方法［5］，取小鼠100 只，隨機分成10組，每組10 只，雌雄各半，分別為空白組(生理鹽水，10 mL/kg);陽性組(地塞米松，5 mg/kg);玉郎傘水提物、黃酮、皂苷、多糖(以上四種藥物大劑量均為30 g 生藥/kg，小劑量均為15 g 生藥/kg)。分組后即開始灌胃給藥，每天給藥一次，連續(xù)7 d，末次給藥后1 h 每只小鼠以0.5%角叉菜膠液(用生理鹽水配制)0.1 mL 皮下注射于左后足趾部致炎。致炎5 h 后處死小鼠，剪取后雙足等同部位，稱重，以左右足重量之差為腫脹度(mg)，并計算用藥組腫脹抑制率，評價藥物對角叉菜膠所致足腫脹的影響。

2.2 小鼠耳片腫脹法

參照文獻方法［6］，取小鼠100 只，隨機分為10組，每組10 只，雌雄各半，分組及給藥劑量同上。每天灌胃給藥1 次，連續(xù)7 d，末次給藥后1 h，用混合致炎液(內(nèi)含2%巴豆油、20%無水乙醇、5%蒸餾水、73%乙醚)涂于小鼠左耳前后兩面，每鼠50 μL，5 h 后將小鼠頸椎脫臼致死，延耳廓基線剪下兩耳，用9 mm 直徑打孔器分別在同一部位打下圓耳片，稱重。以耳片腫脹度(兩耳片重量之差)作為炎癥指標，計算用藥組腫脹抑制率，來評價藥物對巴豆油所致耳廓炎癥的影響。

2.3 對小鼠棉球肉芽腫形成的影響［6］

取小鼠100 只，雌雄各半。20%烏拉坦腹腔注射麻醉(0.05 mL/10g 體重)，在無菌條件下作胸部切口，將5 mg 的滅菌棉球植入右側(cè)腋窩部皮下。術(shù)后選合格小鼠隨機分為10 組，分組同上。術(shù)后第2 d，各組分別給藥(i.g.)，劑量同上，每天一次，連續(xù)7 d。于第8 d 處死小鼠，剝離并取出棉球肉芽腫組織，放入90 ℃烘箱內(nèi)干燥1 h 后取出精確稱重，減去原棉球重量即為肉芽腫凈重(mg)。以mg/10 g體重表示肉芽腫重量。

2.4 統(tǒng)計方法

3 實驗結(jié)果

3.1 玉郎傘水提物及各成份對小鼠足跖腫脹的抑制作用

實驗結(jié)果如表1、圖1 所示，除黃酮、多糖低劑量組外，其余各組與空白組比較，小鼠足跖腫脹度均明顯降低。說明YLS 水提物及三種成份對角交菜膠所致小鼠足跖腫脹有較好的抑制作用。

表1 玉郎傘水提物及各成份對小鼠足跖腫脹的抑制作用(，n=10)Table 1 The inhibitory effects of YLS water extract and three purified components on hind paw edema in mice(，n=10)

注:與空白組對照，* P＜0.05，＊＊P＜0.01。Note:Compare with blank，* P＜0.05，＊＊P＜0.01.

圖1 玉郎傘水提物及各成份對小鼠足跖腫脹的抑制作用Fig.1 The inhibitory effects of TYLS and three purified components on hind paw edema in mice

3.2 玉郎傘水提物及各成份對耳片腫脹的抑制作用

實驗結(jié)果如表2、圖2 所示，除皂苷、多糖低劑量組外，其余各組與空白組比較，小鼠耳片腫脹度均明顯降低。說明YLS 水提物及三種成份對巴豆油所致小鼠耳片腫脹有較好的抑制作用。

表2 玉郎傘水提物及各成份對小鼠耳片腫脹的抑制作用(，n=10)Table 2 The inhibitory effects of TYLS and three purified components on ear swelling in mice(，n=10)

表2 玉郎傘水提物及各成份對小鼠耳片腫脹的抑制作用(，n=10)Table 2 The inhibitory effects of TYLS and three purified components on ear swelling in mice(，n=10)

注:與空白組對照，* P＜0.05，＊＊P＜0.01。Note:Compare with blank，* P＜0.05，＊＊P＜0.01.

圖2 玉郎傘水提物及各成份對小鼠耳片腫脹的抑制作用Fig.2 The inhibitory effects of TYLS and three purified components on ear swelling in mice

3.3 玉郎傘各成份對小鼠棉球肉芽腫形成的抑制作用

實驗結(jié)果如表3、圖3 所示，除水提物、皂苷低劑量組外，其余各組與空白組比較，小鼠棉球肉芽腫腫脹度均明顯降低。說明YLS 水提物及三種成份對小鼠棉球肉芽腫的形成有較好的抑制作用。

4 討論

炎癥是機體組織受損傷時所發(fā)生的一系列保護性應答，以局部血管為中心，典型特征是紅、腫、熱、痛和功能障礙，可參與清除異物和修補組織等。巴豆油致小鼠耳片腫脹及角叉菜膠誘發(fā)小鼠足爪腫脹是常用的急性炎癥模型。主要表現(xiàn)為局部的充血、水腫及滲出等病理反應過程，是應用最多的研究藥物抗炎作用的方法之一。研究結(jié)果表明，除了YLS皂苷低劑量組及多糖低劑量組外，其余各組藥物均可顯著抑制小鼠耳片腫脹及足爪腫脹，表明玉郎傘水提物、黃酮、皂苷、多糖具有較強的抑制急性炎癥的作用。小鼠棉球肉芽腫模型是一亞急性(慢性)炎癥模型，是發(fā)展局部異物持續(xù)刺激的遲緩性變態(tài)反應，有異物的病灶內(nèi)表現(xiàn)為肉芽腫的形成。實驗結(jié)果表明，除玉郎傘水提物低劑量組及皂苷低劑量組外，其余各組藥物均能顯著抑制小鼠棉球肉芽腫的生長，說明玉郎傘水提物、黃酮、皂苷、多糖對慢性炎癥也有較強的抑制作用。

表3 玉郎傘各成份對小鼠棉球肉芽腫形成的抑制作用(，n=10)Table 3 The inhibitory effects of TYLS and three purified components on cotton granuloma in mice

表3 玉郎傘各成份對小鼠棉球肉芽腫形成的抑制作用(，n=10)Table 3 The inhibitory effects of TYLS and three purified components on cotton granuloma in mice

注:與空白組對照，* P＜0.05，＊＊P＜0.01。Note:Compare with blank，* P＜0.05，＊＊P＜0.01.

圖3 玉郎傘各成份對小鼠棉球肉芽腫形成的抑制作用Fig.3 The inhibitory effects of TYLS and three purified components on cotton granuloma in mice

1 Li JL(李健玲)，Chen ZN(陳兆霓)，Lv JH(呂紀華)，et al.Effect of saponin of Yulangsan on myocardial ischemia reperfusion injury in isolated rat hearts.Chin J Exp Tradit Med Form(中國實驗方劑學雜志)，2012，18:250-253.

2 Duan XQ (段小群)，Jiao Y(焦陽)，Huang RB(黃仁彬)，et al.Effects of Yulangsan polysaccharide on proliferation and collagen I production of hepatic stellate cells.Chin J Mod Med(中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志)，2008，18:423-425.

3 Cai WE(蔡文娥)，Zhang XD(張緒東)，Huang RB(黃仁彬)，et al.Study on immunological effect of Yulangsan polysaccharides.Lishizhen Med Mater Med Res (時珍國醫(yī)國藥)，2011，22:1681-1683.

4 Huang RB.Preparation and application of Yulangsan extracts(玉郎傘提取物的制備及應用).CN200710034771.2，2007-04-16.

5 Chen Q.Research Methods in Pharmacology of Chinese Materia Medica，Vol 3(中藥藥理研究方法學，3 卷)Beijing:People's Publishing House，2011.353.

6 Wolfgang HV.Drug Discovery and Evalution-Pharmacological Assays(藥理學實驗指南-新藥發(fā)現(xiàn)和藥理學評價).Beijing:Science Publishing House，2001.535，583.