摘要：目的 建立高效液相色譜測定葛根芩連丸中葛根素含量的方法。方法 色譜柱：Diamonsil C18 （250x4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（15：85）；流速：1 mL/min；波長：250 nm；柱溫：30℃。結果 葛根素濃度在2.0～50.0 μg/mL（r=0.9999）范圍內線性關系良好，平均回收率為99.8%（RSD=1.03%）。結論 建立的方法簡便、準確可靠，可用于葛根芩連丸中葛根素含量測定。

關鍵詞：葛根芩連丸；葛根素；高效液相色譜

Determination of Puerarin in Gegen Qinlian Pellets by HPLC

HE Xin-xin

（Zhejiang Province Taizhou Luqiao Chinese Medicine Hospital， Taizhou， Zhejiang 318050， China）

Abstract：Objective To establish a HPLC method for determination of puerarin in Gegen Qinlian pellets. Method Chromatographic column： Diamonsil？ C18 （250x4.6 mm，5 μm）； mobile phase： methanol-water（15：85）； flow rate： 1.0 mL·min-1； detection wavelength： 250 nm；column temperature： 30 ℃. Result Puerarin showed a good linear relationship at the range of 2.0～50.0 μg·mL-1（r=0.9999）.The average recovery of puerarin was 99.8%（RSD=1.03%）. Conclusion This method is simple，reliable and Reproducible， can be used for quality control of the Gegen Qinlian pellets.

Key words：Gegen Qinlian pellets； Puerarin； HPLC

葛根芩連丸收載于2010版《中國藥典》一部，處方出自東漢醫(yī)圣張仲景《傷寒論》\"葛根芩連湯\"，由葛根、黃芩、黃連、炙甘草組成，具有解肌、清熱、止瀉止痢等功效。用于泄瀉痢疾、身熱煩渴、下痢臭穢；菌痢、腸炎等癥[1]。葛根素的含量測定已有報道[2-4]，本文借鑒報道，建立高效液相色譜測定葛根芩連丸中葛根素含量的方法，簡便、準確、可靠，可用于葛根芩連丸中葛根素含量測定。

1儀器與試藥

1.1儀器 Agilent 1100液相色譜儀，包括G1311A四元泵，G1313A自動進樣器，G1322A脫氣機，G1314A紫外可見檢測器，G1316A柱溫箱（美國安捷倫公司）；島津UV-260紫外可見分光光度計（日本島津公司）；CP225D型電子天平（德國Sartorius公司）；SIGMA HSK1-18K高速冷凍離心機（德國Sigma公司）；USC-512超聲器振蕩器（上海波龍公司）；XW-80A渦旋混合器（上海醫(yī)科大學儀器廠）；YB-1A真空恒溫干燥箱（天津金州科儀廠）。

1.2試藥 葛根芩連丸3批（批號：20101101，20110111，20110226，廣西壯族自治區(qū)花紅藥業(yè)股份有限公司）；葛根素對照品（批號：110752-200912，中國藥品生物制品檢定所）；甲醇為色譜純、水為重蒸水、其他試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18 （250×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（15∶85）；流速：1 mL/min；波長：250 nm；柱溫：30℃；進樣量：20 μL。

2.2對照品溶液制備 精密稱取葛根素對照品適量，用40%乙醇溶解，稀釋，搖勻。制成每1 mL中含葛根素500 μg。

2.3供試品溶液制備 取本品適量，研細，取約1.0 mg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入40%乙醇50 mL。稱定重量，超聲處理（250V50Hz） 40min，放冷，再稱定重量，用40%乙醇補足減失的重量，搖勻，經0.45 μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

2.4陰性對照品溶液制備 按葛根芩連丸的處方，取除葛根外的所有藥材，得葛根芩連丸陰性樣品，取陰性樣品1.0 g，按\"2.3 供試品的制備\"方法的陰性溶液。

2.5方法學考察

2.5.1方法專屬性 按\"2.1 色譜條件\"測定，結果表明理論板數(shù)按葛根素峰計算應不低于3000，見圖1。

圖1 葛根芩連丸中葛根素含量測定色譜圖

注：A. 陰性溶液；B.對照品溶液；C.樣品溶液；1.葛根素

2.5.2線性關系 精密吸取0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 mL，分別置50 mL容量瓶中，稀釋至刻度。吸取 20 μL注入液相色譜儀，記錄峰面積，以濃度為x軸，峰面積為y軸，進行線性回歸，葛根素的回歸方程為y=6.732X-1.587（r=0.9999，n=5）。結果表明，葛根素濃度在2.0～50.0 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

2.5.3精密度實驗 取對照品溶液5份，按照\"2.1 色譜條件\"測定，進樣20 μL，考察日內及日間精密度。結果表明，葛根素日內精密度（n=5）為1.26%，日間精密度（n=5）分別為0.83%。

2.5.4回收率實驗 稱取已知含量的葛根芩連丸100 mg（含葛根素5.6 mg/g），精密加入一定量的葛根素對照品，按\"2.3 供試品溶液的制備\"操作，平行操作9份，按\"2.1 色譜條件\"測定，計算回收率，見表1。

2.5.5樣品穩(wěn)定性實驗 精密吸取對照品溶液，按\"2.1 色譜條件\"測定，分別在0、2、4、8、12、24 h進樣20 μL，記錄峰面積，葛根素RSD均<0.86%，結果表明，樣品溶液在24 h內穩(wěn)定。

2.6樣品含量測定 取批號為20101101、20110111、20110226樣品，按\"2.3 供試品溶液的制備\"操作制備供試品溶液，按\"2.1 色譜條件\"測定，計算樣品中葛根素的含量，見表2。

3討論

3.1檢測波長 采用紫外可見分光光度計對樣品進行掃描，葛根素在212、250、268、312 nm處均有吸收峰，參考文獻報道及雜志峰的大小，最后選擇250 nm作為檢測波長。

3.2樣品處理 采用加熱回流及超聲提取，對樣品進行處理，兩種方法處理后葛根素含量無明顯差異，但加熱回流提取時間較長、過程較繁瑣，而超聲提取時間短、過程簡單，故本實驗選擇超聲提取制備樣品。同時考察了超聲時間（20、40、60 min） 與提取溶劑（20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇）對樣品的影響，結果表明，超聲40和60 min時葛根素含量較20 min時高，超聲40和60 min時無明顯差異，因此選擇超聲時間為40 min；選擇40%乙醇為提取溶劑時，葛根素含量最高，故本實驗最終確定40%乙醇為溶劑，超聲時間40 min。

3.3色譜條件 本實驗比較了甲醇-0.1%磷酸和甲醇-水兩種流動相，經實驗，發(fā)現(xiàn)甲醇-0.1%磷酸為流動相，基線噪音較大，且明顯下移。本實驗采用的甲醇-水（15∶85），基線平穩(wěn)，樣品分離度好，峰形對稱，保留時間適宜，無雜質干擾，故最終選擇了甲醇-水（15∶85）作為流動相。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：1146.

[2]程嵐，王博，張海燕，等. RP-HPLC法同時測定山葛降脂分散片中葛根素和牡荊素鼠李糖苷的含量[J].中國中醫(yī)藥學刊，2010，28（3）：548-549.

[3]張春霞，周愛珍，尹華.高效液相色譜法測定心血寧片中葛根素的含量[J].中國中醫(yī)藥學刊，2008，26（11）：2515-2517.

[4]欒爽，王冬梅，趙懷清，等.HPLC同時測定心腦聯(lián)通膠囊中葛根素、虎杖苷和野黃芩苷的含量[J].中國藥學雜志，2008，43（19）：1510-1512.編輯/張燕