雞新城疫（ND）是由新城疫病毒（NDV）引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，發(fā)病急、傳播快、死亡率高，發(fā)病率可達(dá)90%。臨床上常見呼吸困難，排水樣或黃綠色糞便，產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋量急劇下降，軟殼蛋、畸形蛋明顯增多。雞只接種新城疫疫苗后體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生特異性抗體，借助間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（間接ELISA），可對(duì)血清中新城疫抗體水平進(jìn)行檢測，有效評(píng)估雞群的免疫效果。為摸清汾陽市散養(yǎng)雞新城疫抗體水平，筆者于2013年5月對(duì)汾陽市3個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)散養(yǎng)雞新城疫抗體進(jìn)行了血清學(xué)檢測，現(xiàn)報(bào)告如下：

一、材料與方法

1. 血樣的采集

對(duì)汾陽市3個(gè)養(yǎng)殖集中鄉(xiāng)鎮(zhèn)散養(yǎng)雞隨機(jī)采血，每只翅下靜脈采血2毫升，共采集血樣178份，其中冀村75份，杏花46份，陽城57份。

2. 血樣的處理

采集的血樣傾斜靜置1小時(shí)，待析出血清后，2000轉(zhuǎn)/分鐘離心8～10分鐘，取上層血清待檢。

3. 儀器與試劑

單道、多道微量移液器；吸頭；D-9602酶標(biāo)分析儀，北京普朗新技術(shù)有限公司生產(chǎn)；新城疫病毒抗體檢測試劑盒，北京維德維康生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為121202。

4. 試驗(yàn)方法與原理

①試驗(yàn)方法。間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（間接ELISA）。

②原理。特異的NDV被包被在96孔平底聚苯乙烯板上。在反應(yīng)過程中，檢測樣本被加入反應(yīng)孔中，樣本中的特異性抗體會(huì)與孔中包被的特異性抗原反應(yīng)，在洗板的過程中不會(huì)被清洗掉，當(dāng)添加酶標(biāo)復(fù)合物時(shí)，這些酶標(biāo)復(fù)合物就會(huì)與雞血清的抗體發(fā)生反應(yīng)。沒有結(jié)合的酶標(biāo)復(fù)合物在洗板的過程中被清洗。再加入底物顯色，顯色的深淺與樣本所含NDV的抗體濃度成正比。

③操作步驟。第一步樣本稀釋，將被檢血清用稀釋液做1∶100稀釋。第二步加樣，陰性血清和陽性血清各占1孔做對(duì)照，其余孔加1∶100稀釋的被檢血清，每孔100微升，加樣位置做好記錄，反應(yīng)板蓋上膜，置37℃環(huán)境下作用30分鐘后洗滌3次。第三步加酶標(biāo)抗體，每孔加酶標(biāo)抗體液100微升，反應(yīng)板蓋上膜，置37℃環(huán)境下作用30分鐘后洗滌3次。第四步加底物使用液，每孔100微升，置室溫避光顯色2～3分鐘。第五步加終止液，每孔100微升，使其終止反應(yīng)。

④結(jié)果判定。在酶標(biāo)儀490納米波長處，測定酶標(biāo)板的每孔吸光值（P），除以同板標(biāo)準(zhǔn)陰性對(duì)照的吸光值（N），測得每份被檢樣品的P/N值。P/N≥2.5時(shí)，樣品判定為陽性；P/N<2.5時(shí)，樣品判定為陰性；N≥0.3時(shí)，結(jié)果不準(zhǔn)確，必須查找原因，重新測定。

二、結(jié)果分析

178份待檢血清吸光值見表1、表2。H11孔為陰性血清吸光值，H12孔為陽性血清吸光值。冀村75份血清對(duì)應(yīng)孔為表1的A行、B行、C行、D行、E行、F行和G1～G3；杏花46份血清對(duì)應(yīng)孔為表1的G4～G12與H1～H10和表2的A行、B行、C1～C3；陽城57份血清對(duì)應(yīng)孔為表2的C4～C12、D行、E行、F行、G行。冀村合格數(shù)62份，合格率82.7%；杏花合格數(shù)27份，合格率58.7%；陽城合格數(shù)51份，合格率89.5%。總的合格數(shù)140份，合格率78.7%，見表3。

三、討論

我市要求新城疫免疫密度達(dá)到100%，從本次檢測結(jié)果來看，冀村、陽城的新城疫免疫合格率達(dá)到了農(nóng)業(yè)部的要求（70%以上），但值得注意的是杏花鎮(zhèn)的新城疫合格率（58.7%）遠(yuǎn)低于農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)。筆者通過調(diào)查了解，分析主要原因如下：

1. 疫苗保存不當(dāng)。部分養(yǎng)殖戶為圖省事，將油乳劑滅活苗、凍干苗都放在4℃冷藏箱中，導(dǎo)致凍干苗因儲(chǔ)存溫度過高而失效。

2. 飼養(yǎng)條件和飼料質(zhì)量差。一些農(nóng)村散養(yǎng)戶的雞舍通風(fēng)不良、衛(wèi)生條件差，雞群長期處于應(yīng)激狀態(tài)，免疫力下降。有的飼料黃曲霉素超標(biāo)、營養(yǎng)物質(zhì)缺乏，影響新城疫抗體產(chǎn)生。

3. 防疫員責(zé)任心亟待加強(qiáng)。有的防疫員在接種疫苗時(shí)沒有按照規(guī)定劑量免疫，有的過分追求防疫進(jìn)度而忽視效果，有的嫌注射疫苗麻煩，而采用飲水免疫，這都造成新城疫抗體水平低下，必須加強(qiáng)防疫員的責(zé)任心。

（作者聯(lián)系地址：山西省汾陽市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 郵編：032200）