摘要：利用微波輔助技術(shù)提取黑龍江產(chǎn)蒼耳（Xanthium sibiricum）莖中的總黃酮。結(jié)果表明，以乙酸乙酯提取，在微波功率為800 W條件下處理2 min，料液比為1∶15（g/mL），與傳統(tǒng)提取方法相比，該法提取時間短、提取效率高。黑龍江產(chǎn)的蒼耳莖中總黃酮含量較高。

關(guān)鍵詞：蒼耳（Xanthium sibiricum）莖；微波輔助提取；總黃酮

中圖分類號：R284.2 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）24-6126-03

蒼耳（Xanthium sibiricum）為菊科（Compositae） 蒼耳屬（Xanthium L.）植物，俗稱羊帶歸、狗耳朵草、疔瘡草、野茄子、粘粘葵、蒼子棵、卷耳、爵耳等[1]。廣泛分布于我國各地，目前均為野生狀態(tài)，適應(yīng)性強，可生長于各種環(huán)境下，尤其是荒野、路邊、田間地頭廣布，全國資源豐富[2-3]。蒼耳是傳統(tǒng)的藥用植物，其成熟的果實入藥，被稱為蒼耳子，可應(yīng)用于治療多種疾病[4-8]，已被中國藥典收錄。蒼耳子中富含油脂，蒼耳子油目前已被確認為有一定的營養(yǎng)價值，還具有抗菌、 抗病毒、 消炎等作用，是潛在的食用油和保健食品開發(fā)資源[9]。蒼耳莖葉也具有較高的營養(yǎng)價值，可被開發(fā)為牲畜飼料，有報道蒼耳莖葉作為添加劑飼喂生豬可提高豬肉品質(zhì)[10]。蒼耳全草也可入藥，治療痢疾、 中耳炎、 鼻炎、 功能性子宮出血、濕疹、皮膚癌、瘙癢等[11-13]，蒼耳中目前已確認含有多種化學(xué)成分，包括水溶性苷類、倍半萜內(nèi)酯類、揮發(fā)油類等[14，15]。黃酮類物質(zhì)廣泛存在于多種植物體內(nèi)，其分子結(jié)構(gòu)中存在兩個具有酚羥基的苯環(huán)通過中央三碳原子連結(jié)的基本結(jié)構(gòu)。黃酮類物質(zhì)具有抗氧化、抗炎、降血糖、降膽固醇、調(diào)節(jié)免疫力、抗腫瘤等多方面藥理作用[16-18]。蒼耳在黑龍江分布普遍、適應(yīng)性強、資源儲量大，目前尚未被充分利用。本研究根據(jù)相關(guān)研究成果[19，20]探討了微波輔助提取蒼耳莖中總黃酮方法。微波提取的基本原理是基于微波的穿透性，透入基質(zhì)內(nèi)部形成內(nèi)熱源，其加熱具有選擇性，可使細胞內(nèi)各細胞器升壓，從而使細胞壁破裂，使目標成分從細胞中釋放出來并溶解于溶劑中[21]，以微波輔助提取蒼耳莖中總黃酮，提取效率高，操作簡便，能更準確測定黑龍江蒼耳莖中總黃酮含量，對于黑龍江產(chǎn)蒼耳植株的綜合開發(fā)和利用具有重要的參考和借鑒意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 蒼耳 9月15日采摘于黑龍江省綏化市北林區(qū)郊區(qū)公路旁。

1.1.2 儀器與試劑 752型紫外-可見光分光光度計（北京普析儀器設(shè)備有限公司），HH4型數(shù)顯恒溫水浴鍋（國華電器有限公司），101AS2型不銹鋼數(shù)顯電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海浦東躍欣科學(xué)儀器廠），SY-2000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠），美的EG823MF4-NR1型微波爐（美的微波電器制造有限公司）；蘆丁對照品（Rutin，Merck，中國藥品生物制品檢定所），其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 方法

1.2.1 蒼耳莖黃酮類化合物的提取 ①蒼耳莖的處理：采集來的蒼耳植株經(jīng)自然干燥后，去除果實、葉片、根部等，用剪刀將莖剪碎，組織搗碎機粉碎成粗粉；②蒼耳莖總黃酮的粗提?。簩⒎鬯楹玫纳n耳莖粉末1 g置于100 mL錐形瓶中，加入15 mL乙酸乙酯，首先微波爐800 W加熱2 min，水浴蒸干乙酸乙酯，取出后加入相當于15倍粉末質(zhì)量的60%乙醇，在85 ℃水浴的條件下進行回流，再浸提25 min。浸提完成之后過濾，收集浸提液，得到的就是蒼耳莖樣品總黃酮粗提取液，把每個樣品的粗黃酮液定容至50 mL。取一定體積的粗黃酮液，經(jīng)水浴加熱濃縮后，于103 ℃下烘干至恒重，從而得到粗黃酮粉，計算粗黃酮粉的得率。作為對比，取蒼耳莖粗粉10 g，以紗布包成小包，置于索氏提取器中，加入300 mL 60%乙醇， 90 ℃水浴回流提取3 h，過濾，收集濾液，定容至500 mL，得粗黃酮提取液，取一定體積的粗黃酮提取液，進行測定。

1.2.2 蒼耳莖黃酮提取物的顏色反應(yīng) 取0.010 g 蘆丁用60%的乙醇定容至100 mL，連同粗黃酮液、粗黃酮粉進行鹽酸鎂粉反應(yīng)的定性顏色反應(yīng)。分別取總黃酮粗提取液、總黃酮粗粉適量以乙醇配制的溶液和蘆丁液約1 mL于試管中，加入少量鎂粉，再加3滴濃鹽酸，至沸水浴上加熱，觀察記錄現(xiàn)象。

1.2.3 蒼耳莖總黃酮含量的測定 根據(jù)黃酮類化合物與鋁鹽可以生成具有特征紅色的絡(luò)合物的性質(zhì)，首先以蘆丁為對照品，將待測樣品以蘆丁為標準樣品，在500 nm處比色，測定樣品中總黃酮含量。精密稱取0.014 0 g的干燥至恒重的蘆丁對照品，然后在25 mL容量瓶中加入適量去離子水，放置于超聲清洗儀超聲10 min溶解，以去離子水定容。移取10 mL至100 mL容量瓶中，加水至刻度定容，即得0.056 mg/mL蘆丁對照品溶液。精密量取蘆丁對照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分別置于25 mL容量瓶中，加水至6.0 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，混勻，靜置6 min，加5%硝酸鋁溶液1 mL，混勻，靜置6 min，加4%氫氧化鈉溶液10 mL，加水定容至刻度，搖勻，放置15 min，以相應(yīng)的試劑為參比，在500 nm處測其吸光度，得吸光度與蘆丁濃度線性方程。

取1.2.1項中粗黃酮提取液25 mL，精密量取10 mL至100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，作為待測液。精密量取6 mL待測液置于25 mL容量瓶中，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，混勻，靜置6 min，加5%硝酸鋁溶液1 mL，混勻，靜置6 min，加4%氫氧化鈉溶液10 mL，加水定容至刻度，搖勻，放置15 min，以相應(yīng)的試劑為參比，在500 nm處測其吸光度，并依據(jù)標準曲線，計算總黃酮得率。

2 結(jié)果與分析

2.1 蒼耳莖總黃酮含量

2.1.1 蘆丁標準曲線制作 由圖1可以看出，在濃度為0.011 2～0.134 4 mg/mL，蘆丁濃度與吸光度有較好的線性關(guān)系，吸光度（A）與蘆丁標準品濃度（C，mg/mL）的回歸方程為：A=8.298 8C+0.001 5，r=0.998 5。

2.1.2 蒼耳莖總黃酮含量 4個不同的蒼耳莖樣本，分別采用微波輔助萃取和溶劑回流提取蒼耳莖總黃酮，測定蒼耳莖中總黃酮含量，結(jié)果見表1。從表1可以看出，采用傳統(tǒng)熱溶劑回流提取，總黃酮得率較低，浪費溶劑，耗時也較長。

2.2 黃酮提取物的顏色反應(yīng)

蒼耳莖粗黃酮提取液和粗黃酮粉的乙醇配制溶液的鹽酸-鎂粉反應(yīng)均呈現(xiàn)紅色，與蘆丁顏色反應(yīng)相同，說明在該提取條件下黃酮類物質(zhì)較為穩(wěn)定。

2.3 蒼耳莖粗黃酮粉的得率

由微波輔助萃取所得蒼耳莖干粉的粗黃酮粉的平均得率為 11.08%，經(jīng)測定粗黃酮粉中總黃酮含量為12.01%，說明在蒼耳莖中黃酮類物質(zhì)含量較高。

3 討論

蒼耳作為黑龍江省廣泛分布的野生植物資源，雖然其果實部分作為中藥目前得到重視，但儲量更大的莖葉資源還未受到重視，本研究通過微波輔助提取蒼耳莖中的具有生理活性的黃酮類物質(zhì)并測定了其含量，通過研究確定在蒼耳莖中含有較為豐富的黃酮類物質(zhì)。蒼耳這種野生植物的全株具備全面開發(fā)的潛力，對于將野生資源儲量豐富的蒼耳開發(fā)為有潛力的新型生物資源提供了參考。蒼耳莖這一潛在資源在藥品、保健品和動物飼料等領(lǐng)域?qū)⒂袕V闊的開發(fā)前景。

參考文獻：

[1] 韓迎辰.蒼耳的藥用價值[J].實用醫(yī)藥雜志，2005，22（3）：262-263.

[2] 呂益濤，侯海宮，蘇耀海，等.蒼耳屬植物的鑒別研究[J].中國中藥雜志，2001，26（1）：17-20.

[3] 歐麗紅，秦路平.蒼耳屬藥用植物資源及其化學(xué)成分和生物活性[J].藥學(xué)實踐雜志，2000，18（5）：346.

[4] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典（上冊）[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1985.

[5] 姜建庭，趙東銘，凌延昭，等.復(fù)方蒼耳子丸的制備與臨床療效觀察[J].河南中醫(yī)藥學(xué)刊，2000，15（1）：52.

[6] 韓秀麗.蒼耳子散在鼻科的應(yīng)用[J].山東中醫(yī)雜志，2003，22（2）：121-122.

[7] 趙辰良，仇志軍.蒼耳蟲外用治療皮膚瘡瘍[J].新中醫(yī)，2003， 35（3）：8.

[8] 郭淑芬，樊可民.蒼耳子溫藥浴治療小兒腹瀉的臨床研究[J] .中國鄉(xiāng)村醫(yī)藥雜志，2003，10（2）：34.

[9] 熊 穎，劉啟德，宓穗卿.蒼耳子化學(xué)研究進展[J].廣東藥學(xué)，2005，15（6）：65-68.

[10] 趙晨霞，王麗瓊.飼用蒼耳保健粉的開發(fā)應(yīng)用[J].糧油食品科技，2002，10（5）：31-32.

[11] 國家中醫(yī)藥管理局.中華本草（第7冊）[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999.7084.

[12] 母則力，夏東臣，郭 堅.蒼耳草膏治療皮膚癌38例臨床觀察[J].甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1999，16（1）：24-25.

[13] 胡樹慧.蒼耳的利用價值[J].特種經(jīng)濟動植物，2001（6）：29.

[14] CUMANDA J，MARINONI G， DEBERNARDI M，et al. New sesquit-erpenes from xanthium catharticum[J]. Nat Prod，1991，54（2）：460-465.

[15] SALINAS A，DERUIZ R E L， RUIZ S O， et al. Sterols，flavonoids and sesquiterpenic lactones from Xanthium spinosum（Aster-aceae）[J]. Acta Farm Bonaerense，1998，17（4）：297-300.

[16] 代英輝，崔 征，李建林.蒼耳屬植物化學(xué)成分及藥理作用研究進展[J]. 沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2007，24（12）：786-789.

[17]蘇新國，宓穗卿，王寧生，等.蒼耳子藥用進展[J].中華新藥與臨床藥理，2006，17（1）：68-72.

[18] 陳乃富.蕨菜黃酮類化合物的提取及其抗氧化作用[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2003（11）：63-66.

[19] 范菁華，徐懷德，李鈺金，等.超聲波輔助提取花椒葉總黃酮及其體外抗氧化性研究[J].中國食品學(xué)報，2010，10（6）：22-27.

[20] 趙文英，朱慶書，金 青.微波輔助提取蒼耳子油的研究[J].食品科技，2008，34（2）：203-205.

[21] 湯大衛(wèi).微波提取[J].醫(yī)藥工程設(shè)計雜志，2003，24（5）：5-6.