摘要：為了建立湖北省建始縣丹皮的高效液相色譜指紋圖譜，并為科學評價及有效控制其質(zhì)量提供可靠方法。采用C18色譜柱，甲醇-水梯度洗脫，流速1.0 mL/min，檢測波長242 nm，柱溫25 ℃。對建始丹皮10批次藥材進行指紋圖譜分析，通過HPLC技術(shù)指認指紋圖譜共有12個共有峰，相似度0.926～0.995。結(jié)果表明，該方法具有較好的準確性和穩(wěn)定性，10個批次的丹皮樣品生成的指紋圖譜可作為建始丹皮的標準指紋圖譜。

關(guān)鍵詞：丹皮；高效液相色譜法；指紋圖譜

中圖分類號：R284.1 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）22-5521-03

丹皮屬毛莨科（Ranunculaceae）植物牡丹（Paeonia suffruticosa）的根皮[1，2]，《本草綱目》：“滋陰降火，解斑毒，利咽喉，通小便血滯”?，F(xiàn)代研究表明，丹皮酚有鎮(zhèn)靜、降溫、解熱、鎮(zhèn)痛、解痙等中樞抑制作用和抗動脈粥樣硬化的作用[3，4]，可用于治療闌尾炎初起、吐血、跌打損傷等[5，6]。湖北省建始縣處于武陵山區(qū)，春有梅雨，夏伏旱較長，冬季雨量較少，適宜中藥材的生長。20世紀80年代末期開始種植牡丹，現(xiàn)種植面積達200多hm2。目前，丹皮主要有高效液相色譜法[7，8]、高效液相色譜-質(zhì)譜法[9]和高效毛細管電泳色譜法[10]等分析方法。本試驗著重研究建始丹皮的HPLC指紋圖譜，為丹皮藥材的質(zhì)量評價提供重要的參考指標。

1 材料與方法

1.1 材料

U3000型戴安液相色譜儀；KQ-250D型超聲波清洗器；丹皮酚對照品（上海源葉生物科技有限公司，批號20120210），色譜乙腈，去離子水，甲醇等試劑均為分析純。丹皮樣品來源見表1。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 依利特色譜柱C18（4.6 mm×200 mm，5 μm），流動相甲醇-水連續(xù)梯度，柱溫25 ℃，檢測波長242 nm，流速1.0 mL/min。

1.2.2 丹皮酚對照品溶液的制備 取丹皮酚對照品適量，用甲醇分別配制成含丹皮酚100 μg/mL的對照品溶液。丹皮酚對照品HPLC指紋圖譜見圖1。

1.2.3 供試品的制備 精密稱取丹皮藥材粉末（過30目篩）約0.5 g，置于錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量。超聲提取30 min后冷至室溫，稱質(zhì)量，補足減失質(zhì)量。用0.45 μm濾膜過濾即得。

1.2.4 10個批次丹皮HPLC指紋圖譜建立 精密吸取對照品和供試品溶液，按照1.2.1色譜條件進行測定。10個批次的丹皮HPLC指紋圖譜見圖2。

2 結(jié)果與分析

2.1 精密度試驗

按照“1.2.1”的色譜條件連續(xù)進同一供試品溶液5次，考察色譜峰相對保留時間和相對峰面積的一致性。結(jié)果表明，12個共有峰的相對保留時間RSD為0.03%～0.50%，主要色譜峰的相對峰面積RSD為0.63%～1.84%。

2.2 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，按每隔2 h測定一次，考察色譜峰相對保留時間和相對峰面積的一致性。結(jié)果表明，12個共有峰的相對保留時間和主要色譜峰的相對峰面積基本一致，RSD分別為0.42%～0.69%、0.65%～1.43%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3 重復性試驗

取丹皮藥材5份，按照“1.2.3”的方法平行制備5份供試品，考察色譜峰相對保留時間和相對峰面積的一致性。結(jié)果表明，12個共有峰相對保留時間和主要色譜峰相對峰面積基本一致，RSD分別為0.49%～0.57%、0.51%～1.59%，證明該方法的重復性較好。

2.4 共有峰的確定

取表1中的10個批次丹皮藥材，按“1.2.3”的方法制備供試品溶液進樣、測定。比較其色譜圖，得到12個共有峰，以丹皮酚的色譜峰（共有峰-7）為參照峰（相對保留時間和相對峰面積分別為1.00和1.000 0），計算色譜圖中各共有峰的相對保時間和相對峰面積，見表2、表3。由表2、表3可知，10個批次丹皮藥材的相對保留時間的RSD為0.25%～0.53%，表明樣品各共有峰之間的重合性好。相對保留峰面積RSD在11.06%～24.52%，不同批次丹皮藥材各成分含量有所差異。

2.5 相似度的計算

根據(jù)國家藥典委員會《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》2004年A版進行相似度評價。選取色譜圖中的12個共有峰，以10個批次丹皮藥材的相對峰面積的均值作為對照模板，由中藥色譜圖分析和數(shù)據(jù)管理軟件自動進行峰匹配，確定12個共有峰。利用相關(guān)系數(shù)法計算指紋圖譜的相似度，結(jié)果見表4。由表4可知，10批次丹皮藥材的相似度在0.926～0.995之間，相似度較高。

3 小結(jié)與討論

1）建立了建始丹皮的HPLC指紋圖譜方法，通過對其柱效、分離度及方法學的考察，證明了所選的色譜系統(tǒng)適應性較好，能較好地反應建始丹皮中的色譜峰特征。

2）對色譜條件進行了摸索，通過試驗發(fā)現(xiàn)，波長在242 nm處，除丹皮酚的吸收較強外，還有幾個共有峰的吸收也很強，且雜質(zhì)較少?？梢杂眉状?水作為流動相，進行梯度洗脫，能有效將各個色譜峰分離開來。

3）對比色譜圖，確認10批次丹皮藥材有12個共有峰，以共有峰-7作為參照峰，并計算相對保留時間和相對保留峰面積。相對保留時間的RSD在2%以內(nèi)，表明10批次的樣品共有峰重合性較好，方法穩(wěn)定。共有峰相對峰面積RSD在11.06%～24.52%，10批次之間各成分含量有差別，原因可能與土壤類型、海拔高度，栽培技術(shù)及后期管理等有關(guān)。

4）用衛(wèi)生部藥典委員會頒布的“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)”（2004版）軟件對丹皮指紋圖譜進行相似度計算。結(jié)果表明，以10個批次丹皮藥材的相對峰面積的均值作為對照模板，相似度在0.926～0.995之間，相似度較高。

本試驗采用HPLC法，建立建始丹皮的HPLC指紋圖譜，有效地反映和衡量了建始丹皮藥材的化學成分，能應用到建始丹皮的鑒定和質(zhì)量評價中。運用相似度的計算，為丹皮的質(zhì)量控制提供科學依據(jù)。

參考文獻：

[1] 國家藥典委員會.中國藥典（一部）[S].北京：化學工業(yè)出版社，2005.

[2] 吳 普.神農(nóng)本草經(jīng)[M].沈陽：遼寧科學技術(shù)出版社，1997.

[3] 邢國勝，房德敏，周詠梅，等.丹皮酚的制備及藥理作用研究進展[J].中草藥，2006，37（11）：2-7.

[4] 趙學龍，丁安偉，張 麗，等. 牡丹皮炮制歷史沿革的研究[J].中華中醫(yī)藥刊，2008，26（9）：1907-1910.

[5] 黃泰康.常用中藥成分與藥理手冊[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，1998.

[6] 南京中醫(yī)藥大學. 中藥大辭典[M].上海：上海科學技術(shù)出版社，1998.

[7] 于 超，劉世堯，范俊安，等.川丹皮藥材HPLC色譜指紋圖譜研究[J].中成藥，2006，28（8）：1098-1101.

[8] 周立艷，梁生旺，王淑美，等.牡丹皮高效液相色譜“藥效指紋圖譜”研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2008，19（6）：1337-1342.

[9] 梁瓊麟，溫華珍，王玉莉，等.丹皮藥材的高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜研究[J].分析化學，2005，33（11）：1555-1559.

[10] 谷 巍，巢建國，劉訓紅，等.安徽道地藥材牡丹皮高效毛細管電泳指紋圖譜研究[J].中國實驗方劑學雜志，2011（17）：58-61.

（責任編輯 童志婷）