摘要：對引起湖北武漢地區(qū)豇豆根腐病的病菌（茄類鐮刀菌，F(xiàn)usarium solani Schl.）進(jìn)行了生物學(xué)特性及室內(nèi)殺菌劑毒力研究。結(jié)果表明，病菌菌絲生長的適宜溫度為25～35 ℃；適宜pH 6～9；光照有利于菌絲生長；病菌能夠利用多種碳源和氮源，最適碳源是麥芽糖，最適氮源是硝酸鈉；菌絲的致死溫度為65 ℃（10 min）。室內(nèi)殺菌劑毒力測定結(jié)果表明，70%甲基托布津超微可濕性粉劑對病菌菌絲抑制效果最好，其后依次為50%硫磺·多菌靈可濕性粉劑和40%福星乳油，這3種殺菌劑均可用于防治豇豆根腐??；80%多菌靈可濕性粉劑和10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑的EC50也較低，也可作為防治豇豆根腐病的殺菌劑。

關(guān)鍵詞：豇豆根腐病菌（Fusarium solani Schl.）；生物學(xué)特性；殺菌劑；毒力測定

中圖分類號：S432.4+4；S436.411 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）22-5479-03

為進(jìn)一步了解湖北武漢地區(qū)豇豆根腐病菌（茄類鐮刀菌，F(xiàn)usarium solani Schl.）的生物學(xué)特性，篩選出防治效果較好的藥劑，本試驗系統(tǒng)研究了該菌在不同光照、溫度、pH、碳源、氮源條件下的生長特性及菌絲的致死溫度，并測定了7種殺菌劑對該菌的抑制作用，以期為該病害的防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試病菌

豇豆根腐病菌菌株JGF，由武漢市農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)研究院武漢市蔬菜科學(xué)研究所于2009年9月從該所基地采集標(biāo)樣，經(jīng)分離培養(yǎng)獲得，并進(jìn)行了致病性測定、形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定[1，2]。

1.2 不同光照對菌絲生長的影響

病原菌在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)5 d后，用打孔器從菌落邊緣取直徑6 mm菌絲塊，接種于PDA培養(yǎng)基平板上，每皿接種1個菌絲塊。將接種后的平皿置于HP250GS型智能人工氣候培養(yǎng)箱培養(yǎng)，溫度25 ℃。設(shè)置連續(xù)黑暗、連續(xù)光照、12 h/d光暗交替3個處理（光源為普通日光燈，18 W，距離22 cm），每個處理3個重復(fù)，4 d后用十字交叉法測量菌落直徑。

1.3 不同溫度對菌絲生長的影響

病原菌在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)5 d后，用打孔器從菌落邊緣取直徑6 mm菌絲塊接種于PDA培養(yǎng)基平板上，每皿接1個菌絲塊。設(shè)置5、10、15、20、25、30、35、40 ℃共8個溫度處理，將接好菌種的平皿分別置于不同溫度的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每個處理5個重復(fù)。7 d后用十字交叉法測量菌落直徑。

1.4 不同pH對菌絲生長的影響

用1 mol/L NaOH和1 mol/L HCl溶液調(diào)節(jié) PDA培養(yǎng)基pH，終值分別為3、4、5、6、7、8、9、10、11、12，然后在不同pH的平板中央接種直徑6 mm的菌絲塊，置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每個處理3 個重復(fù)，5 d后用十字交叉法測量菌落的直徑。

1.5 不同碳源、氮源對菌絲生長的影響

以Czapek培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基[3]，用含碳量相同的葡萄糖、麥芽糖、乳糖、木糖、果糖、可溶性淀粉代替其中的蔗糖，以不加碳源作對照。以Czapek培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，用含氮量相同的尿素、硝酸鈉、硝酸銨、氯化銨、精氨酸代替其中的硝酸鉀，以不加氮源作對照。打取直徑為6 mm的菌絲塊接種在不同碳、氮源培養(yǎng)基平板中央，每處理3個重復(fù)，置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中，5 d后采用十字交叉法測量菌落直徑。

1.6 菌絲致死溫度測定

用6 mm打孔器在活化好的PDA培養(yǎng)基菌落邊緣取菌絲塊并置于無菌試管中，加入2 mL無菌水。分別在35、40、45、50、55、60、65、70 ℃水浴鍋中處理10 min后取出迅速冷卻，將菌絲塊取出置于PDA平板上25 ℃恒溫培養(yǎng)，5 d后觀察菌絲生長情況，每處理重復(fù)5次。

1.7 不同殺菌劑對豇豆根腐病菌的室內(nèi)毒力測定

1.7.1 供試藥劑 70%甲基托布津超微可濕性粉劑（西安美邦藥業(yè)有限公司）、40%福星乳油（上海農(nóng)樂生物制品股份有限公司）、80%多菌靈可濕性粉劑（美國農(nóng)友集團(tuán)有限公司）、50%硫磺·多菌靈可濕性粉劑（河北冠龍農(nóng)化有限公司）、75%百菌清可濕性粉劑（成都皇牌作物科學(xué)有限公司）、80%?！じｄ\可濕性粉劑（河北冠龍農(nóng)化有限公司）、10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑（北京綠色農(nóng)華植?？萍加邢薰荆?。

1.7.2 含藥平板制備 根據(jù)預(yù)備試驗結(jié)果，確定各個供試藥劑的濃度梯度和配制時的系列劑量，70%甲基托布津超微可濕性粉劑、80%?！じｄ\可濕性粉劑、10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑濃度梯度為31.25、62.50、125.00、250.00、500.00 μg/mL；80%多菌靈可濕性粉劑、50%硫磺·多菌靈可濕性粉劑、40%福星乳油濃度梯度為62.5、125.0、250.0、500.0、1 000.0 μg/mL；75%百菌清可濕性粉劑濃度梯度為125、250、500、1 000、2 000 μg/mL。將供試藥劑稀釋成相應(yīng)系列濃度后，準(zhǔn)確吸取一定量的藥液加入到熔化的培養(yǎng)基中，以1 mL藥液加入9 mL培養(yǎng)基為標(biāo)準(zhǔn)，3次重復(fù)。

1.7.3 測定方法 采用抑制菌絲生長速率法測定[4]。在超凈工作臺上，將供試藥劑配成不同濃度的帶藥培養(yǎng)基，制成PDA培養(yǎng)基平板，每處理3皿，同時設(shè)加等量無菌水的培養(yǎng)基為空白對照，然后用打孔器在培養(yǎng)5 d的菌落邊緣打取直徑6 mm菌絲塊，分別放在不同藥劑培養(yǎng)基平板中央，菌絲面朝上，在25 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)，5 d后用十字交叉法測量菌落的直徑，計算殺菌劑對菌絲生長的（相對）抑制率，并用DPS數(shù)據(jù)分析軟件求毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)和EC50，比較幾種供試藥劑的毒力大小。

抑制率=（空白對照菌落直徑-處理菌落直徑）/（空白對照菌落直徑-菌餅直徑）×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 光照對菌絲生長的影響

病原菌在PDA培養(yǎng)基平板上連續(xù)黑暗、連續(xù)光照、12 h/d光暗交替條件下培養(yǎng)7 d，菌落平均直徑分別為45.20、52.15、48.15 mm。可見光照有利于菌絲的生長（圖1）。

2.2 溫度對菌絲生長的影響

在PDA培養(yǎng)基平板上，菌絲在10～35 ℃溫度范圍均能生長，25～35 ℃為菌絲生長的適宜溫度，30 ℃為最適生長溫度；菌絲在5 ℃和40 ℃不生長（圖2）。

2.3 pH對菌絲生長的影響

在PDA培養(yǎng)基平板上，菌株在pH 3～12均可生長，pH 6～9為適宜生長范圍，pH 8最適于生長，說明偏堿性環(huán)境更適宜病原菌生長（圖3）。

2.4 碳源、氮源對菌絲生長的影響

葡萄糖、蔗糖、麥芽糖等7種碳源均能被利用，其中菌絲在麥芽糖中生長最好（圖4）；供試6種氮源均能被利用，其中以硝酸鈉、硝酸銨、硝酸鉀等硝態(tài)氮利用較好，氯化銨利用最差（圖5）。

2.5 菌絲致死溫度

由菌株菌絲的致死溫度測定結(jié)果（表1）可以看出， 60 ℃及以下水溫處理10 min后的菌絲在PDA 培養(yǎng)基上均能再生長，而65 ℃和70 ℃水浴處理10 min后，所有重復(fù)均無菌絲生長。說明該病原菌菌絲致死溫度為65 ℃（10 min）。

2.6 不同殺菌劑對豇豆根腐病菌的室內(nèi)毒力

由不同殺菌劑對豇豆根腐病菌室內(nèi)毒力測定結(jié)果（表2）可知，7種殺菌劑對豇豆根腐病菌的抑制作用有較大差異，以70%甲基托布津超微可濕性粉劑為最好；50%硫磺·多菌靈可濕性粉劑、40%福星乳油和80%多菌靈可濕性粉劑效果次之；10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑EC50雖較前幾種高，但數(shù)值并不大，也可用于此病害的防治。75%百菌清可濕性粉劑抑菌效果較差。

3 小結(jié)與討論

豇豆根腐病由茄類鐮刀菌引起，茄類鐮刀菌寄主范圍較廣，可以單獨侵染、混合侵染導(dǎo)致植物發(fā)病。周洪友等[5]報道，沙打旺根腐病由茄類鐮刀菌和尖孢鐮刀菌導(dǎo)致；王文君等[6]報道中國甜菜根腐病病原包括茄類鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、木賊鐮刀菌、層出鐮刀菌等；而茄子根腐病、花椒根腐病、辣椒根腐病、西瓜根腐病等也是由茄類鐮刀菌侵染所致[7-10]。

本試驗對引起豇豆根腐病的病原進(jìn)行生物學(xué)特性及幾種殺菌劑的室內(nèi)藥效研究。結(jié)果表明，光照利于菌絲生長；菌絲生長適溫為25～35 ℃，最適生長溫度為30 ℃；pH 6～9為菌絲適宜生長范圍，pH 8最適于生長；該菌的致死溫度為65 ℃（10 min）。該菌能利用多種單糖、多糖作為碳源，能利用精氨酸有機(jī)氮和硝酸鈉等無機(jī)硝態(tài)氮作氮源，說明其對營養(yǎng)要求不嚴(yán)格，具有廣泛的適應(yīng)性。因茄類鐮刀菌能在土壤中存活，常引起辣椒、茄子、西瓜等多種植物發(fā)病。

室內(nèi)殺菌劑藥效試驗結(jié)果表明，70%甲基托布津超微可濕性粉劑對該病菌菌絲生長的抑制效果最好，EC50值為0.000 1 μg/mL，其下依次為50%硫磺·多菌靈可濕性粉劑、40%福星乳油、80%多菌靈可濕性粉劑、10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑，它們均可用于防治豇豆根腐病。后續(xù)研究可在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步進(jìn)行溫室盆栽和大田防治試驗，以明確這幾種藥劑的實際防治效果，為藥劑防治豇豆根腐病提供科學(xué)依據(jù)。

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（責(zé)任編輯 陳 焰）