摘要：采用浸漬法測定野生與種植伏毛鐵棒錘（Aconitum flavum Hand Mazz）乙醇提取物及生物堿對小菜蛾（Plutella xylostella）的觸殺活性。結(jié)果表明，野生與種植伏毛鐵棒錘30.0 mg/mL乙醇提取物對小菜蛾的72 h校正死亡率分別為86.67%、90.00%，LC50分別為13.14、12.37 mg/mL；野生與種植伏毛鐵棒錘生物堿20.0 mg/mL用量時小菜蛾72 h校正死亡率均為90.00%，LC50分別為6.535、6.576 mg/mL。野生與種植伏毛鐵棒錘提取物對小菜蛾的觸殺活性相近。研究結(jié)果可為伏毛鐵棒錘這一野生植物資源的有效保護提供一定的依據(jù)。

關(guān)鍵詞：野生；種植；伏毛鐵棒錘（Aconitum flavum Hand Mazz）；小菜蛾（Plutella xylostella）；殺蟲活性

中圖分類號：S436.341.2+4；TQ453.3 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）22-5470-03

伏毛鐵棒錘為毛茛科烏頭屬植物伏毛鐵棒錘（Aconitum flavum Hand Mazz）塊根，是中國傳統(tǒng)民族藥材，主要用于風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨折、跌打瘀痛等的治療[1，2]。伏毛鐵棒錘又稱為鐵棒錘、斷腸草等，主要分布于中國西藏北部、甘肅、寧夏南部六盤山區(qū)等地?，F(xiàn)代藥理研究表明，伏毛鐵棒錘可作為一類重要的植物源殺蟲劑，其主要活性成分為烏頭堿、3-乙酰烏頭堿、去氧烏頭堿等生物堿類[3]，防治害蟲效果好[4]，作為新型植物源農(nóng)藥的開發(fā)利用前景廣闊。

伏毛鐵棒錘一直以野生品入藥，隨著采挖量增加，資源日趨枯竭，產(chǎn)地生態(tài)環(huán)境也受到極大破壞。為了解野生與種植伏毛鐵棒錘的殺蟲效果差異，保護野生資源和生態(tài)環(huán)境，本試驗研究了野生與種植的伏毛鐵棒錘乙醇提取物及生物堿對小菜蛾的殺蟲活性，對比其作為殺蟲劑的殺蟲效果差異，為開展人工規(guī)范化種植和合理開發(fā)利用伏毛鐵棒錘提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試昆蟲 小菜蛾（Plutella xylostella）采用油菜苗室內(nèi)飼養(yǎng)，由寧夏大學(xué)能源化工重點實驗室飼養(yǎng)繼代（飼養(yǎng)環(huán)境溫度20～28 ℃，相對濕度65%～75%，光照12 h/d），挑選生長發(fā)育狀態(tài)一致的健康3齡幼蟲供試。

1.1.2 供試植物 野生伏毛鐵棒錘采自甘肅省境內(nèi)，采集時間為10月；種植伏毛鐵棒錘采自寧夏回族自治區(qū)固原市隆德縣。室內(nèi)陰干，粉碎，過40目篩，粉末裝入塑料薄膜袋中密封并置于陰暗處保存。

1.2 方法

1.2.1 伏毛鐵棒錘乙醇提取物的制備 采用乙醇浸漬超聲波輔助法浸提。分別稱取100 g野生與種植的伏毛鐵棒錘粉末，加1 L 95%乙醇，室溫浸泡24 h后超聲波提取30 min，過濾，濾渣再加溶劑浸提，重復(fù)提取3次，合并3次濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮，蒸干溶劑，得乙醇提取物浸膏。分別稱取野生與種植的伏毛鐵棒錘乙醇提取物，以50%丙酮為溶劑，分別配制成終濃度為30.0、25.0、20.0、15.0、10.0、5.0 mg/mL的供試藥液，置于4 ℃冰箱保存。

1.2.2 伏毛鐵棒錘的生物堿的制備 伏毛鐵棒錘乙醇提取物加50%丙酮溶解后用2%鹽酸調(diào)至弱酸性，用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯層，合并萃取液，減壓濃縮得乙酸乙酯萃取物。收集其余部分用濃氨水調(diào)節(jié)pH至9～10，用氯仿進行萃取直至用碘化鉍鉀檢驗無生物堿為止，合并萃取液，減壓濃縮得生物堿浸膏。分別稱取野生與種植伏毛鐵棒錘生物堿浸膏，以50%丙酮為溶劑，分別配制成終濃度為20.0、15.0、10.0、5.0、2.5 mg/mL的供試藥液，置于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 觸殺活性測試 小菜蛾觸殺活性采用浸漬法[5]。挑選健康、蟲體大小一致的小菜蛾3齡幼蟲，在供試液中浸10 s，迅速取出，并用干凈的吸水紙吸去多余藥液，然后將浸藥試蟲轉(zhuǎn)入墊有保濕脫脂棉的培養(yǎng)皿中，放入用紗網(wǎng)制成的圓柱形容器，飼喂新鮮甘藍葉片。于處理后24、48、72 h分別記錄死蟲數(shù)、活蟲數(shù)。蟲體腐爛或變軟、用毛筆輕觸無反應(yīng)則認為其已死亡。觀察幼蟲的死亡情況。對照（CK）用50%丙酮溶液處理。每處理10頭，3個重復(fù)，計算死亡率、校正死亡率。以x為處理液濃度值的對數(shù)值，y為校正死亡率的幾率值，建立回歸方程，計算LC50。

1.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 用DPS 7.05統(tǒng)計軟件和Excel 2007軟件對試驗數(shù)據(jù)進行分析，差異性用Duncan's新復(fù)極差法分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 野生與種植伏毛鐵棒錘的乙醇提取物對小菜蛾觸殺活性比較

野生與種植伏毛鐵棒錘乙醇提取物對小菜蛾3齡幼蟲生物活性測定結(jié)果見表1、表2。由表1、表2可見，野生與種植伏毛鐵棒錘乙醇提取物對小菜蛾3齡幼蟲均具有一定的觸殺活性，校正死亡率隨著藥液濃度的增大以及時間的延長而增大。72 h校正死亡率總體上為種植的大于野生的，由毒力回歸方程求得LC50值，野生的稍高于種植的。

2.2 野生與種植伏毛鐵棒錘生物堿對小菜蛾觸殺活性比較

野生與種植伏毛鐵棒錘的生物堿對小菜蛾3齡幼蟲生物活性測定結(jié)果見表3、表4。由表3、表4可見，野生與種植伏毛鐵棒錘生物堿對小菜蛾的觸殺活性相差不大，20.0 mg/mL濃度時72 h的校正死亡率均為90.00%，由毒力回歸方程求得LC50，種植的稍高于野生的。

2.3 試蟲死亡情況

試蟲接觸藥劑后，蟲體迅速擺動，部分蟲體麻痹、癱瘓不能恢復(fù)，隨著時間的延長，蟲體腐爛，發(fā)黑，干枯。表明野生與種植的伏毛鐵棒錘生物堿和乙醇提取物對小菜蛾都具有較好的觸殺活性。

2.4 伏毛鐵棒錘乙醇提取物與生物堿對小菜蛾的觸殺活性比較

野生與種植的伏毛鐵棒錘20.0 mg/L乙醇提取物及生物堿對小菜蛾的觸殺活性比較見表5。其他濃度水平上也表現(xiàn)出相同規(guī)律，即小菜蛾校正死亡率野生與種植的伏毛鐵棒錘生物堿處理均高于乙醇提取物處理，進一步說明生物堿是伏毛鐵棒錘的主要殺蟲活性成分。

3 小結(jié)與討論

1）已有研究表明伏毛鐵棒錘乙醇提取物對小菜蛾、蚜蟲具有觸殺作用，比較野生與種植的伏毛鐵棒錘乙醇提取物對小菜蛾的殺蟲活性，發(fā)現(xiàn)野生與種植的伏毛鐵棒錘的乙醇提取物對小菜蛾觸殺活性相差不大。

2）野生與種植伏毛鐵棒錘的生物堿對小菜蛾均有較好觸殺活性，20.0 mg/L 72 h校正死亡率均達到90.00%，表明伏毛鐵棒錘主要殺蟲活性成分沒有因人工栽培而產(chǎn)生較大變化，因此，采用人工栽培是防止伏毛鐵棒錘野生植物資源瀕危的有效措施。

3）野生與種植伏毛鐵棒錘的乙醇提取物、生物堿均對小菜蛾有不同程度的觸殺活性，并且生物堿的LC50低于乙醇提取物的LC50，野生和種植的伏毛鐵棒錘乙醇提取物和生物堿對小菜蛾的LC50相差很小。由此推斷伏毛鐵棒錘對小菜蛾的活性成分主要為生物堿，而且野生與種植的伏毛鐵棒錘生物堿含量相差不大，可以采用種植的伏毛鐵棒錘代替野生的入藥。

4）本研究對野生與種植伏毛鐵棒錘的乙醇提取物及生物堿對小菜蛾的殺蟲活性進行比較，發(fā)現(xiàn)野生與種植的伏毛鐵棒錘提取物處理后小菜蛾表現(xiàn)出相似的中毒癥狀。試蟲接觸藥劑后，蟲體劇烈擺動，部分蟲體麻痹、蜷縮、癱瘓甚至馬上死亡。已有研究[6]表明生物堿通過影響昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)而起到毒殺作用，植食性昆蟲對植物體內(nèi)的次生代謝化學(xué)產(chǎn)物的防御機制往往是通過自身體內(nèi)的生理生化及行為調(diào)節(jié)的，其中體內(nèi)解毒酶系起著很重要的作用[7]。伏毛鐵棒錘生物堿中的某些成分可能對小菜蛾幼蟲具有神經(jīng)麻痹、毒殺作用，并影響了小菜蛾體內(nèi)的解毒酶系活性。

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（責(zé)任編輯 陳 焰）