摘要：分別建立了測(cè)定“柴芩”注射液中柴胡皂苷A和黃芩苷含量的高效液相色譜方法。

關(guān)鍵詞：“柴芩”注射液；柴胡皂苷A；黃芩苷；HPLC

中圖分類號(hào)：R284.1；O657.7+2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2013）19-4776-03

“柴芩”注射液是四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院自主研制的純中藥注射劑，由小柴胡湯中的核心藥對(duì)柴胡和黃芩兩味中藥配伍而成。本制劑能“清透半表之邪和清瀉半里之熱”，具有和解表里、疏肝解郁、扶正祛邪之功效，臨床可用于急性熱性病的進(jìn)行期，以及伴有發(fā)熱病的一般性胃病、胃腸障礙等癥[1-3]。為了建立該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，有效地評(píng)價(jià)其內(nèi)在質(zhì)量，本試驗(yàn)根據(jù)“柴芩”注射液的提取工藝、臨床功效和有效成分[4，5]，采用高效液相色譜（HPLC）法定量檢測(cè)了柴胡皂苷A和黃芩苷的含量，為有效控制其質(zhì)量提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器

黃芩苷對(duì)照品（中國(guó)生物制品檢定所，批號(hào)：110715-20815）；柴胡皂苷A對(duì)照品（中國(guó)生物制品檢定所，批號(hào)：110777-200406）；甲醇、磷酸（色譜純）均購(gòu)于科密歐化學(xué)試劑廠；“柴芩”注射液（20091228-20091230）由四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院藥學(xué)實(shí)驗(yàn)室制備。

1.3 對(duì)照品溶液的配制

1.4 液相色譜條件

1.5 樣品處理

1.5.1 柴胡皂苷A供試品的制備 分別量取3批“柴芩”注射液（091228-091230）以0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，即得柴胡皂苷A供試品；并按處方制備不含柴胡的陰性對(duì)照品，按照柴胡皂苷A供試品溶液的制備方法制成不含柴胡皂苷A的陰性樣品。

1.5.2 黃芩苷供試品的制備 分別量取3批“柴芩”注射液（091228-091230）各1 mL于5個(gè)100 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，混合均勻，0.45 μm濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液作為黃芩苷供試品溶液；并按處方制備不含黃芩的陰性對(duì)照品，按照黃芩苷供試品溶液的制備方法制成不含黃芩苷的陰性樣品。

1.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

1.6.1 柴胡皂苷A標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別吸取柴胡皂苷A對(duì)照品溶液2、4、6、8、10、12 μL進(jìn)樣，HPLC檢測(cè)。每個(gè)濃度設(shè)3次重復(fù)，以柴胡皂苷A對(duì)照品含量（x）為橫坐標(biāo)，以峰面積（y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.6.2 黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別取吸取黃芩苷對(duì)照品溶液1、2、4、6、8、10 μL進(jìn)樣，HPLC檢測(cè)。每個(gè)濃度設(shè)3次重復(fù)，以黃芩苷對(duì)照品含量（x）為橫坐標(biāo)，峰面積（y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法的選擇性

分別吸取柴胡皂苷A對(duì)照品、“柴芩”注射液和不含柴胡皂苷A陰性樣品溶液各10 μL進(jìn)行分析。在柴胡皂苷A檢測(cè)色譜條件下，柴胡皂苷A的保留時(shí)間為8.342 min，供試品保留時(shí)間與對(duì)照品保留時(shí)間一致，陰性樣品中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)干擾測(cè)定“柴芩”注射液中柴胡皂苷A的成分，結(jié)果見圖1、圖2和圖3。再分別吸取黃芩苷對(duì)照品溶液、“柴芩”注射液和不含黃芩苷陰性樣品溶液各10 μL進(jìn)行測(cè)定，在黃芩苷檢測(cè)色譜條件下，黃芩苷的保留時(shí)間為9.725 min，供試品保留時(shí)間與對(duì)照品保留時(shí)間一致，陰性樣品在對(duì)照品色譜峰相應(yīng)位置上無(wú)吸收峰，表明對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，結(jié)果見圖4、圖5和圖6。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3 精密度試驗(yàn)

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

吸取柴胡皂苷A和黃芩苷供試品溶液各10 μL，分別在0、2、4、6、8 h進(jìn)樣，測(cè)得柴胡皂苷A峰面積RSD為1.81%、黃芩苷峰面積RSD為1.82%。結(jié)果表明供試樣品在制備后8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

2.6 加樣回收率試驗(yàn)

2.6.1 柴胡皂苷A的加樣回收率 吸取1 mL柴胡皂苷A對(duì)照品溶液（0.48 mg/mL），60℃下烘干，殘?jiān)謩e加入10 mL已知含量的樣品溶液（091228）中，0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾后進(jìn)樣10 μL。HPLC檢測(cè)，連續(xù)6次，測(cè)定柴胡皂苷A的峰面積。結(jié)果顯示柴胡皂苷A的平均回收率為102.60%，RSD為0.95%。

2.6.2 黃芩苷的加樣回收率 吸取2.5 mL黃芩苷對(duì)照品溶液（0.46 mg/mL），60 ℃烘干，殘?jiān)謩e加入5 mL已知含量樣品溶液（091228）中，超聲溶解后再吸取1 mL加入100 mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾后進(jìn)樣10 μL。HPLC檢測(cè)，連續(xù)6次，測(cè)定黃芩苷的峰面積。結(jié)果顯示黃芩苷平均回收率為100.55%，RSD為1.69%。

2.7 樣品含量測(cè)定

取3批注射液（091228-091230）按“1.5”項(xiàng)下方法制備供試品，每批平行制備3次。吸取對(duì)照品和供試品溶液各10 μL，按上述兩個(gè)色譜條件分別進(jìn)行測(cè)定，并計(jì)算各樣品中的柴胡皂苷A、黃芩苷的含量。結(jié)果見表1。

3 小結(jié)與討論

中藥注射劑是在中藥制劑的基礎(chǔ)上結(jié)合現(xiàn)代制劑技術(shù)發(fā)展起來(lái)的新制劑，在醫(yī)療實(shí)踐中發(fā)揮著重要的作用，被認(rèn)為是中國(guó)未來(lái)開拓國(guó)際醫(yī)藥市場(chǎng)的優(yōu)勢(shì)項(xiàng)目[8]。由于中藥注射液成分的復(fù)雜性，使得對(duì)其質(zhì)量控制難度較大。為了保證臨床用藥的安全性和有效性，中藥注射劑在確定成分含量的藥味時(shí)，要以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，根據(jù)藥方功能，選擇多指標(biāo)、多成分制定測(cè)定項(xiàng)目，采用科學(xué)的方法建立有效成分的含量測(cè)定方法，并制定出合理的限度指標(biāo)[9]。但就《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑中收載的注射液含量測(cè)定方法存在不完善、可控指標(biāo)少甚至根本沒(méi)有含量的測(cè)定的問(wèn)題[10]。

高效液相色譜法已廣泛地應(yīng)用于中藥注射劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)當(dāng)中，通過(guò)指紋圖譜的含量或比例，能有效控制樣品的質(zhì)量，確保中藥注射劑工藝的科學(xué)性和質(zhì)量相對(duì)穩(wěn)定[11]?！安褴恕弊⑸鋭┯刹窈忘S芩兩味中藥組成，因此選擇其藥效成分柴胡皂苷A和黃芩苷共同作為其質(zhì)量控制指標(biāo)，進(jìn)行HPLC定量檢測(cè)。由于兩種成分吸收波長(zhǎng)不同，且在注射劑中含量差異大，柴胡皂苷A則直接以原液進(jìn)樣，而黃芩苷需在稀釋100倍后進(jìn)樣，故將二者分別檢測(cè)。本試驗(yàn)結(jié)果表明采用HPLC法測(cè)定“柴芩”注射液中柴胡皂苷A和黃芩苷的含量，方法可行、靈敏度高、重現(xiàn)性好、結(jié)果可靠，可有效用于該制劑的質(zhì)量控制。

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