王 瑞 ，陳永忠 ，陳隆升，彭邵鋒 ，王湘南 ，楊小胡，馬 力

（1.湖南省林業(yè)科學(xué)院，湖南 長沙 410004；2國家林業(yè)局 油茶研究開發(fā)中心，湖南 長沙 410004）

油茶葉片SPAD值與葉綠素含量的相關(guān)分析

王 瑞1,2，陳永忠1,2，陳隆升1,2，彭邵鋒1,2，王湘南1,2，楊小胡1,2，馬 力1,2

（1.湖南省林業(yè)科學(xué)院，湖南 長沙 410004；2國家林業(yè)局 油茶研究開發(fā)中心，湖南 長沙 410004）

為了探究油茶葉片SPAD值與葉綠素含量的相關(guān)性，采用SPAD-502葉綠素儀與分光光度法分別測定了油茶葉片的SPAD值與葉綠素含量。研究結(jié)果表明，油茶葉片SPAD值與葉綠素a 、葉綠素b以及總?cè)~綠素含量間均存在極顯著正相關(guān)關(guān)系. 通過線性回歸得出了SPAD值與葉綠素a 、葉綠素b以及總?cè)~綠素含量間的回歸方程。通過15個不同品種葉片SPAD值與葉綠素含量實測值與預(yù)測值的統(tǒng)計檢驗，葉綠素a與總?cè)~綠素含量的實測值與預(yù)測值間不存在顯著差異，可以通過回歸方程利用SPAD值來預(yù)測油茶葉片葉綠素的絕對含量。

油茶；SPAD值；葉綠素含量；相關(guān)分析

葉綠素是綠色植物進(jìn)行光合作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，是葉片的主要光合色素，葉綠素含量的高低是反應(yīng)植物葉片光合能力及植株健康狀態(tài)的主要指標(biāo)[1]。目前葉綠素含量的測定方法主要有2種，一種是傳統(tǒng)的分光光度法，另一種是SPAD葉綠素儀法。SPAD-502葉綠素儀可在田間無損狀況下快速測量植物葉片單位面積葉片當(dāng)前葉綠素的相對含量[2]，即SPAD值。目前，葉綠素儀已在園林樹木[3]、果樹[4]、玉米[5]、水稻[6-8]、小麥[9]、烤煙[10]等農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上得到了廣泛的應(yīng)用[11]。SPAD葉綠素儀在油茶上的應(yīng)用不多，張日清等利用SPAD-502葉綠素儀研究了不同物種（無性系）間油茶葉片SPAD值的差異，結(jié)果表明不同油茶物種（無性系）間葉綠素含量差異顯著，同物種(無性系) 內(nèi)不同葉位SPAD值大小均表現(xiàn)為葉基＞葉中部＞葉尖，但葉位間的SPAD值均無顯著差異[12]。胡玉玲等研究了施肥對贛無系列油茶葉片SPAD值及養(yǎng)分的影響，研究結(jié)果表明氮對油茶春季葉片SPAD值貢獻(xiàn)率最高，施油茶專用肥葉片SPAD值含量最高[13]。筆者以“湘林”系列油茶優(yōu)良品種為材料，研究了葉片SPAD值與葉綠素含量間的相關(guān)性，通過擬合回歸方程可以快速預(yù)測葉綠素的絕對含量，為葉綠素的測定提供了便利，為生產(chǎn)實踐提供了指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試驗地自然狀況

試驗地位于湖南瀏陽市沙市鎮(zhèn)中山村，東經(jīng)111°53′～ 114°15′，北緯 27°51′～ 28°41′，為亞熱帶季風(fēng)濕潤氣候，年平均溫度16～18℃，年日照時數(shù)1 300～1 800 h，雨熱同期，年平均降水量1 200～1 700 mm，立地條件好，適合油茶生長。

1.2 試驗材料

供試材料為湖南省林科院油茶豐產(chǎn)示范林基地的10年生油茶測定林，包括XL2、XL4、XL19、XL26、XL35、XL40、XL47、XL51、XL56、XL67、XL78、XL81、XL89、XL92、XL97等15個“湘林”系列油茶無性系，由湖南省林業(yè)科學(xué)院選育，適生于湖南、江西、廣西等油茶主產(chǎn)區(qū)。

1.3 研究方法

試驗于2009年6月進(jìn)行，每個無性系選擇3株有代表性植株，每株樹選擇3片葉片。另外，XL78號選定1株樹選擇15片葉片進(jìn)行測定。

1.3.1 SPAD值的測定

使用日本生產(chǎn)的SPAD-502 型葉綠素計進(jìn)行測定，選擇向陽的健康成熟當(dāng)年生新梢第3、4葉位，分別在葉基、葉中、葉尖處測得SPAD值，求出每片葉的平均值，進(jìn)行3 個重復(fù)。同時，在相應(yīng)部位上用自制打孔器取材，將打孔圓片冷藏帶回實驗室進(jìn)行葉綠素含量測定。

1.3.2 葉綠素含量的測定

葉綠素含量的測定采用丙酮法[14]。把葉磨碎，用80%的丙酮溶液提取，過濾后定容，用日本島津公司生產(chǎn)的UV-2550紫外可見分光光度計測定。

按下式計算葉綠素的含量:

式中：Ca為葉綠素a的含量(mg/g)；Cb為葉綠素b的含量(mg/g)；Ct為葉綠素的總量（鮮重） (mg/g)；D645，D663表示在663 nm和645 nm波長下的光密度，V為定容體積(mL)，W為稱樣量(g)。

1.4 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用Excel 2003、DPS7.05軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理與統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 同一植株不同葉片間SPAD值與葉綠素含量的相關(guān)性分析

試驗采用SPAD葉綠素儀與分光光度法同時測定了油茶“XL78”同一植株15片葉片的SPAD值與葉綠素a、葉綠素b以及總?cè)~綠素的含量，并對其SPAD值與葉綠素含量進(jìn)行了相關(guān)分析，由表1可以看出，同一植株不同葉片間SPAD值與葉綠素a、葉綠素b以及總?cè)~綠素含量間均存在極顯著相關(guān)關(guān)系，說明SPAD值作為間接指標(biāo)可以很好的反應(yīng)油茶葉片葉綠素含量的情況。

表1 同一植株不同葉片間SPAD值與葉綠素含量的相關(guān)性分析?Table 1 Correlation analysis on SPAD value and chlorophyllcontent between leaves in the same tree

將15片葉片的SPAD值分別與相應(yīng)的葉綠素a、葉綠素b以及總?cè)~綠素含量進(jìn)行了線性回歸分析，由表2可知，油茶葉片葉綠素a、葉綠素b 和總?cè)~綠素含量與SPAD值間呈線性函數(shù)y=a+bx規(guī)律變化，并且均達(dá)到極顯著水平，葉綠素含量隨SPAD值的增加而增加。方程中的b為SPAD值隨葉綠素含量變化的速率，說明總?cè)~綠素含量隨SPAD值的變化速率最大，其次為葉綠素a，葉綠素b的變化速率最小。

表2 油茶同一植株不同葉片間SPAD值與葉綠素含量的回歸方程?Table 2 Regression equations between SPAD value and chlorophyll in various leaves of same tree

2.2 油茶不同品種間葉片葉綠素含量實測值與回歸方程預(yù)測值統(tǒng)計檢驗

由表3可知，油茶不同品種葉片的葉綠素含量與SPAD值在一定范圍內(nèi)波動，SPAD值為57.58～76.76，葉綠素a含量為0.491～0.974 mg/g，葉綠素b含量為0.192～0.358 mg/g，總?cè)~綠素含量為0.703～1.331 mg/g。XL40的SPAD值最高，為76.76；XL517的總?cè)~綠素含量最高，為1.331 mg/g。

表3 不同品種葉片SPAD值與葉綠素含量的實測值與預(yù)測值Table 3 Measured values and predictive values of SPAD value and chlorophyll in different leaves of same species tree

將測得的“湘林”系列油茶15個不同品種的SPAD值代入表2回歸方程，計算出葉綠素a 、葉綠素b以及總?cè)~綠素含量的預(yù)測值（見表3），將采用分光光度法測得的實測值與預(yù)測值一起進(jìn)行統(tǒng)計分析，統(tǒng)計結(jié)果見表4～6。

表4 不同品種葉綠素a含量實測值與預(yù)測值間方差分析Table 4 Variance analysis of measured values and predictive values of chlorophyll a in different species tree

表5 不同品種葉綠素b含量實測值與預(yù)測值間方差分析Table 5 Variance analysis of measured values and predictive values of chlorophyll b in different species tree

表6 不同品種總?cè)~綠素含量實測值與預(yù)測值間方差分析Table 6 Variance analysis of measured values and predictive values of total chlorophyll content in different species tree

由表4～6可知，油茶葉片葉綠素a含量與總?cè)~綠素含量的實測值與預(yù)測值的統(tǒng)計檢驗p值分別為0.145 3和0.070 4，均大于0.05，說明油茶不同品種葉片葉綠素a含量與總?cè)~綠素含量的實測值與預(yù)測值差異不顯著，可以通過回歸方程預(yù)測葉綠素a含量與總?cè)~綠素的絕對含量；葉綠素b實測值與預(yù)測值間差異極顯著，不能通過回歸方程直接預(yù)測葉綠素b的絕對含量。

3 結(jié)論與討論

3.1 結(jié) 論

（1）油茶葉片SPAD值與葉綠素a 、葉綠素b以及總?cè)~綠素含量間均存在極顯著正相關(guān)關(guān)系。

（2）VSPAD值與葉綠素a 、葉綠素b以及總?cè)~綠素含量間的回歸方程，分別為：y=0.017 7 VSPAD-0.450 5，y=0.005 0VSPAD-0.034 4，y=0.022 6 VSPAD-0.4849，且均為極顯著。

（3）通過15個不同品種葉片SPAD值與葉綠素含量實測值與預(yù)測值的統(tǒng)計檢驗，葉綠素a含量與總?cè)~綠素含量的實測值與預(yù)測值差異不顯著，即可以通過回歸方程利用SPAD值預(yù)測葉綠素a含量與總?cè)~綠素含量；葉綠素b實測值與預(yù)測值間差異極顯著。

3.2 討 論

采用SPAD葉綠素儀、分光光度法測定的葉片綠葉素值均可反映葉綠素含量的多少，但前者是相對含量值，而后者是絕對含量值[4]。采用SPAD葉綠素儀可以快速、無損的測定葉綠素的相對含量，而分光光度法則需損壞葉片，操作繁雜。本文通過分析所得的線性回歸方程，利用所測得的SPAD值得到了葉綠素含量的預(yù)測值，通過實測值與預(yù)測值的統(tǒng)計檢驗， SPAD值與葉綠素含量葉綠素a含量與總?cè)~綠素含量的實測值與預(yù)測值差異不顯著，即可以通過回歸方程利用SPAD值預(yù)測葉綠素a含量與總?cè)~綠素含量；葉綠素b實測值與預(yù)測值間差異極顯著，不能通過回歸方程直接預(yù)測葉綠素b的含量，但是可以通過公式“Cb=Ct-Ca”計算葉綠素b的含量，所以，通過回歸方程利用SPAD值來預(yù)測油茶葉片葉綠素的絕對含量是可行的，為葉綠素的快速測定提供了便利，為生產(chǎn)實踐提供了指導(dǎo)。

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Correlation analysis of SPAD value and chlorophyll content in leaves of Camellia oleifera

WANG Rui1,2, CHEN Yong-zhong1,2, CHEN Long-sheng1,2, PENG Shao-feng1,2, WANG Xiang-nan1,2, YANG Xiao-hu1,2, MA Li1,2
(1. Hunan Academy of Forestry, Changsha 410004, Hunan, China; 2. Oil-tea Camellia Research and Development Center of State Forestry Administration, Changsha 410004, Hunan, China)

In order to study the relationship between SPAD value and chlorophyll content in leaves of Camellia oleifera, the SPAD value and chlorophyll content in leaves of C. oleifera were measured by using chlorophyll meter SPAD-502 and spectrophotometry. The results show that the relationships between SPAD value and chlorophyll a, chlorophyll b and total chlorophyll content in leaves of C. oleifera were all very signif i cant. The three regression equations between SPAD value and chlorophyll a, chlorophyll b and total chlorophyll content were obtained. Through the statistic tests of the measured values and predictive values of 15 species leaves SPAD value, it was found that there were no signif i cant differences between measured values and predictive values, so the regression equations could be used to forecast chlorophyll content of C. oleifera by SPAD value.

Camellia oleifera; SPAD value; chlorophyll content; correlation analysis

S718.43；S794.4

A

1673-923X(2013)02-0077-04

2012-06-13

中央財政林業(yè)科技推廣示范跨區(qū)域重點推廣示范項目“油茶高產(chǎn)新品種區(qū)試示范及豐產(chǎn)栽培技術(shù)推廣”（［2009］TK019號），“油茶雜交新品種及豐產(chǎn)栽培技術(shù)集成示范“（［2011］TK074號）

王 瑞（1983-），女，山東東營人，助理研究員，博士研究生，主要從事經(jīng)濟(jì)林育種與栽培研究；

E-mail：wangrui102@163.com

[本文編校：羅 列]