王文禮，楊 利，賈元超，龍 杰，黃 麗，何永鋼

（四川省梓潼縣畜牧獸醫(yī)局，四川 梓潼 622150）

1 試驗(yàn)用疫苗和器材

1.1 豬瘟活疫苗（脾淋源）云南生物制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為20120710。

1.2 豬口蹄疫O型合成肽疫苗 （多肽2570+7309）上海申聯(lián)生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為20120604。

1.3 高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（JXA1-R株）齊魯動(dòng)物保健品有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為1206010-2。

1.4 試驗(yàn)用器材 免疫接種用器具，318mc型酶標(biāo)儀，移液器、TL-2000MM-1微振器，TDL80-2B離心機(jī)，Z-93自動(dòng)雙重純水蒸餾器，SKP-電熱恒溫培養(yǎng)箱。

2 試驗(yàn)用抗體檢測(cè)試劑

2.1 豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒 武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)為121213。

2.2 豬O型口蹄疫（FMD）病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)為121208。

2.3 豬瘟（CSF）病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒 武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)為121216。

3 試驗(yàn)仔豬分組和檢測(cè)方法

3.1 試豬選擇 在四川梓潼縣某養(yǎng)殖場(chǎng)隨機(jī)選擇已斷奶的30日齡未免疫過任何疫苗的DLY仔豬30頭，由專人飼養(yǎng)和管理，飼喂相同品牌全價(jià)飼料，自由飲水。試驗(yàn)前對(duì)所選中的豬進(jìn)行全面健康檢查：體重在10～12 kg/頭，呼吸為 15～18 次/min，脈搏為 65～78 次/min，體溫在38.8～39.3℃，食欲正常，精神狀態(tài)良好；經(jīng)耳靜脈采血檢測(cè)，CSF、FMD、PRRS病毒抗體均呈陰性。

3.2 試豬分組 將這30頭豬隨機(jī)分成3個(gè)試驗(yàn)組：對(duì)照組10頭，在豬去勢(shì)的同時(shí)在其左右側(cè)頸部和臀部分別肌注生理鹽水2mL；第1組10頭，在豬去勢(shì)的同時(shí)于其左右側(cè)頸部分別肌注CSF活疫苗2mL和O型FMD合成肽疫苗2mL；第2組10頭，在豬去勢(shì)的同時(shí)于其左右側(cè)頸部和臀部分別肌注CSF活疫苗2mL、O型FMD合成肽疫苗2mL、PRRS活疫苗1頭份。

3.3 方法 分別在免疫后30、60、90、120d采集每頭豬的耳靜脈血5.0 mL，用ELISA抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行CSF、FMD、PRRS抗體測(cè)定，具體操作方法依照試劑盒說明書進(jìn)行。

4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

使用酶標(biāo)儀（630nm波長處）測(cè)定各樣品反應(yīng)孔中的OD630值，觀察各組免疫抗體的動(dòng)態(tài)變化，所得OD630值數(shù)據(jù)用SPSS10.0軟件的One-Way ANVOA方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

5 試驗(yàn)結(jié)果

5.1 臨床免疫副反應(yīng) 接種疫苗后4 h內(nèi)觀察臨床反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)第2組有1頭豬出現(xiàn)嘔吐、輕微肌肉震顫、呼吸急促的現(xiàn)象。嘔吐物約50g，把這頭有輕微反應(yīng)的仔豬放進(jìn)保溫箱中（試驗(yàn)當(dāng)時(shí)是凍雨雪天），約1h后副反應(yīng)癥狀消失。其他豬無可見的副反應(yīng)癥狀。

5.2 第2組和對(duì)照組血清PRRS病毒抗體的動(dòng)態(tài)變化根據(jù)豬PRRS抗體檢測(cè)試劑盒說明書提供的判定標(biāo)準(zhǔn)，在酶標(biāo)儀上讀各孔OD630值，試驗(yàn)成立的條件是：陽性對(duì)照孔OD630值均應(yīng)≥0.7，陰性對(duì)照孔OD630值均應(yīng)＜0.3。計(jì)算陽性對(duì)照孔的平均值和樣品KQ值，公式為KQ=100×樣品OD630值/陽性對(duì)照孔OD630平均值。若KQ值≥20，判為PRRS病毒抗體陽性；若KQ＜20，則判為抗體陰性。本試驗(yàn)陽性對(duì)照孔的OD630平均值為1.895，陰性對(duì)照孔的OD630平均值為0.061，證明本次抗體檢測(cè)試驗(yàn)成立。據(jù)此計(jì)算出本試驗(yàn)PRRS樣品的OD630值≥0.379，判為PRRS抗體陽性。詳細(xì)數(shù)據(jù)見表 1。

表1 免疫血清PRRS抗體ELISA檢測(cè)OD630均值（s）

表1 免疫血清PRRS抗體ELISA檢測(cè)OD630均值（s）

30 d 60 d 90 d 120 d 2 組 1.441±0.136 1.347±0.226 1.367±0.243 1.317±0.237對(duì)照組 0.147±0.024 0.185±0.043 0.135±0.037 0.165±0.025

5.3 1、2組和對(duì)照組FMD抗體的動(dòng)態(tài)變化 根據(jù)豬O型FMD抗體檢測(cè)試劑盒說明書提供的判定標(biāo)準(zhǔn)，在酶標(biāo)儀上讀各孔OD630值，試驗(yàn)成立的條件是：陽性對(duì)照孔OD630值均應(yīng)≥0.8，陰性對(duì)照孔 OD630值均應(yīng)＜0.3；樣品OD630值≥0.4時(shí)判為陽性，樣品OD630值＜0.4時(shí)判為陰性。本次抗體檢測(cè)試驗(yàn)陽性對(duì)照孔的平均OD630值為1.48，陰性對(duì)照孔的平均OD630值為0.084，因此，該抗體檢測(cè)試驗(yàn)成立。數(shù)據(jù)見表2。

表2 免疫血清FMD抗體ELISA檢測(cè)OD630均值（s）

表2 免疫血清FMD抗體ELISA檢測(cè)OD630均值（s）

30 d 60 d 90 d 120 d 2 組 1.187±0.036 1.360±0.042 1.397±0.047 1.415±0.035 1 組 0.888±0.041 1.269±0.039 1.438±0.033 1.456±0.043對(duì)照組 0.294±0.032 0.256±0.021 0.211±0.045 0.157±0.036

5.4 1組和2組血清豬瘟病毒抗體的動(dòng)態(tài)變化 根據(jù)豬CSF抗體檢測(cè)試劑盒說明書提供的判定標(biāo)準(zhǔn)，在酶標(biāo)儀上讀各孔OD630值，試驗(yàn)成立的條件是陽性對(duì)照孔OD630值均應(yīng)≥0.6，陰性對(duì)照孔 OD630值均應(yīng)＜0.3；樣品OD630值≥0.35時(shí)判為陽性，樣品OD630值＜0.35時(shí)判為陰性。本次檢測(cè)陽性對(duì)照孔的平均OD630值為1.649，陰性對(duì)照孔的平均OD630值為0.057，所以本次抗體檢測(cè)試驗(yàn)成立。詳細(xì)數(shù)據(jù)見表3。

表3 免疫血清CSF抗體ELISA檢測(cè)OD630均值（s）

表3 免疫血清CSF抗體ELISA檢測(cè)OD630均值（s）

30 d 60 d 90 d 120 d 2 組 0.403±0.051 0.372±0.042 0.263±0.028 0.157±0.027 1 組 0.397±0.043 0.369±0.034 0.258±0.023 0.154±0.028對(duì)照組 0.189±0.023 0.161±0.034 0.146±0.031 0.105±0.025

6 抗體陽性率變化情況

采用ELISA方法，按試劑盒說明書計(jì)算抗體陽性率。判定標(biāo)準(zhǔn)為：CSF樣品OD630值≥0.35，表示豬瘟抗體陽性；FMD樣品OD630值≥0.4，表示FMD抗體陽性；PRRS樣品OD630值≥0.38，表示PRRS抗體陽性。由此得出各期各組各種抗體的陽性率：在試驗(yàn)進(jìn)行到30 d時(shí)，2組的FMD抗體陽性率為90%，1組的FMD抗體陽性率為80%，直到120 d時(shí)，兩組FMD抗體陽性率都達(dá)到了100%；在試驗(yàn)的30～120 d階段，2組和1組的PRRS抗體陽性率都是100%；在試驗(yàn)30 d時(shí)，2組和1組的CSF抗體陽性率為70%，在60 d的陽性率為60%，在90～120 d，兩組的CSF抗體均顯陰性。

7 分析與結(jié)論

7.1 從表1、表2、表3可以看出，在整個(gè)試驗(yàn)期間（120 d），對(duì)照組（10頭豬）血清中的 CSF、FMD、PRRS抗體都呈陰性；1組和2組中FMD和PRRS的抗體OD630均值與對(duì)照組中相應(yīng)的抗體OD630均值比較，差異顯著（P＜0.05）；在 30～60 d期間，CSF 抗體 OD630均值與對(duì)照組中相應(yīng)的抗體OD630均值比較，差異顯著（P＜0.05）。說明本次試驗(yàn)期間，各試驗(yàn)組豬均不存在自然感染CSF、FMD、PRRS的情況，所測(cè)得的陽性抗體均源于疫苗免疫后產(chǎn)生。

7.2 從表1還可以看出，第2組3針同時(shí)免疫后的30d內(nèi)，一直都有較高滴度的PRRS陽性抗體（OD630值＞0.38），這種高滴度抗體至少可以維持到120d。證明同時(shí)肌注3針疫苗的免疫方法在整個(gè)育肥期間對(duì)PRRS都有較好的免疫保護(hù)作用。

7.3 從表2可以看出，第2組3針免疫后在第30d都有較高滴度的FMD抗體，血清樣品OD630值在0.842～1.553之間，其均值為1.187，并且還略高于同期試驗(yàn)組的FMD抗體OD630均值（0.888）。1、2兩組的FMD抗體OD630均值都在0.4以上，說明PRRS對(duì)FMD抗體的產(chǎn)生具有促進(jìn)作用，這與孟麗軍等的試驗(yàn)結(jié)果較一致。這種高滴度的抗體至少可以維持到120d，證明3針同時(shí)肌注的免疫方式在整個(gè)育肥期間對(duì)豬FMD也都有很好的免疫保護(hù)作用。

第1組在免疫后30d，只有2份血清樣品的FMD抗體OD630值為0.337、0.377，略低于0.4的陽性判定標(biāo)準(zhǔn)，可能是個(gè)體差異所致，其他8份血清樣品的OD630值在0.639～1.397之間，都在0.4以上，而該組樣品OD630的平均值為 0.888（＞0.4）；直到 60、90、120d，該組 10 份樣品的OD630值都大于0.4，說明同時(shí)接種CSF、FMD兩種疫苗的免疫方法對(duì)FMD還是有較好的免疫保護(hù)作用。

在試驗(yàn)30d時(shí)，第2組的FMD陽性抗體OD630均值為1.187，略高于第1組的FMD抗體OD630均值（0.888）（P＜0.05），差異顯著；到試驗(yàn)60d及以后，1、2組中的FMD陽性抗體滴度基本持平（P＞0.05），差異不顯著。說明豬PRRS活疫苗在免疫初期對(duì)豬FMD抗體的產(chǎn)生有促進(jìn)作用。

7.4 從表3可以看出，1、2組豬在免疫30～60d后，CSF抗體檢測(cè)呈陽性（OD630值都＞0.35），但抗體滴度都不太高，血清樣品OD630值在0.35～0.44之間，只略高于陽性抗體判定標(biāo)準(zhǔn)（0.35），與試劑盒提供的陽性抗體OD630均值 1.28比較，差異極大（P＜0.05）。

2組和1組的CSF抗體OD630均值差異不顯著（P＞0.05）；與對(duì)照組比較，在試驗(yàn)進(jìn)行到90 d時(shí)，兩免疫組血清中的CSF抗體均呈陰性，差異也不顯著（P＞0.05）。證明在仔豬去勢(shì)時(shí)無論是用CSF活疫苗、FMD合成肽疫苗、PRRS活疫苗三種疫苗同時(shí)免疫的方法，還是按一貫采用的CSF活疫苗、FMD合成肽苗兩種疫苗同時(shí)免疫的方法，都必須在初次免疫豬CSF疫苗60d后，再次加強(qiáng)免疫CSF活疫苗，這樣才能確保育肥后期對(duì)CSF的免疫保護(hù)作用。

7.5 從各組各抗體陽性合格率可以看出，試驗(yàn)2組和1組在免疫后30～120 d期間，F(xiàn)MD和PRRS抗體合格率都超過了國家規(guī)定的70%標(biāo)準(zhǔn)，但是CSF抗體合格率只在免疫后30d才達(dá)到國家規(guī)定的70%標(biāo)準(zhǔn)，到60d，CSF抗體合格率只有60%，到90～120d時(shí)，CSF抗體合格率就已為0了。

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