黎先偉 編譯

一、豬肺炎支原體在養(yǎng)豬業(yè)中的現(xiàn)狀

呼吸系統(tǒng)疾病是影響豬只健康的最重要的問題之一。豬地方性肺炎的主要病原是豬肺炎支原體，屬于一種慢性呼吸系統(tǒng)疾病。豬肺炎支原體在全球養(yǎng)豬業(yè)的感染情況非常普遍，大約38%～100%不等，而且會造成重大的經濟損失(Thacker and Minion, 2010）。

豬肺炎支原體主要寄生于呼吸道的纖毛上皮細胞，破壞細胞，并誘發(fā)感染動物出現(xiàn)繼發(fā)感染(Thacker and Minion, 2010）。 支 原體代謝的毒性產物，如過氧化氫和超氧自由基等也可造成上皮細胞的損傷（Razin et al.,1998）。雖然不同日齡的動物對該病原體均易感，但是生長育肥階段的動物受影響的程度最高。不過，對于無抵抗力的畜群，本病可影響所有生長階段的豬群，包括乳豬和繁育豬群(Sibila et al.,2007）。

豬肺炎支原體引起的感染可用多種不同的措施來進行診斷。特征性的臨床癥狀和病理變化可作為豬肺炎支原體的初步診斷，但確診需要進一步的實驗室檢測。雖然人們通常認為豬肺炎支原體的培養(yǎng)是診斷本病的黃金標準，但這種方法并不經常使用(Sibila et al.,2009）。這主要是因為在Friis培養(yǎng)液中分離病原菌非常困難(Friis, 1975）。此外，其他不同支原體的存在可能會抑制豬肺炎支原體的生長，這將使得它們的分離變得更加困難。因此，從一些疑似感染動物中未能培養(yǎng)出病原菌并不能排除這些動物未受病原菌的感染(Thacker, 2004）。另外，人們也會經常進行免疫熒光（IF）的檢測，而血清學方法常用于監(jiān)測畜群的健康狀況，但這并不適合于個體動物的診斷(Sorensen et al.,1997）。PCR 檢 測是目前診斷豬肺炎支原體感染最靈敏的方法(Calsamiglia et al.,1999）。

豬肺炎支原體的防控應著重于管理措施和欄舍條件的優(yōu)化(Maes et al.,2008），抗菌藥物的使用(Vicca et al.,2004）以及合適的疫苗接種。一些商用疫苗，包括豬肺炎支原體全細胞滅活佐劑苗等均可在全球范圍內使用。這些疫苗已被證實可有效降低感染的臨床癥狀，但僅有少數(shù)可防止已有病變的發(fā)展(Haesebrouck et al.,2004）。

以下將講述豬肺炎支原體的病因，發(fā)病機理以及防控措施，而且特別將重點放在目前已提出的后基因組時代的疫苗接種策略。

二、病原學

支原體屬于柔膜細菌類，體積微小，無細胞壁，因此從表型上來看與其他細菌有差異。雖然支原體和其他細菌之間存在著根本的區(qū)別，但是支原體在分子生物學方面與革蘭氏陽性菌有著許多相似之處(Thacker and Minion, 2010）。支原體是最小的非寄生的自我復制的微生物。它們也有著最小的基因組（580～1 350 kb）和較高的A+T含量（約70%）。豬肺炎支原體屬于最有序的豬支原體( Liu et al.,2011, M inion et al.,2004 and Vasconcelos et al.,2005）。

由于其基因組較小，支原體只進行有限的代謝活動和生物合成 (Razin et al.,1998）。 而 生 物 合 成途徑的缺乏意味著它們需要從外界生長環(huán)境中獲取氨基酸、嘌呤和嘧啶，以及合成細胞膜的成分(Thacker and Minion, 2010）。 此 外， 支原體在體外培養(yǎng)的要求甚高，而且大多種類的支原體都從未進行過培養(yǎng)(Razin et al.,1998）。豬肺炎支原體可在體外進行培養(yǎng)，但需要在介質中補充血清和在Friis培養(yǎng)液中生長(Friis, 1975）。豬肺炎支原體的培養(yǎng)和分離相當?shù)馁M力、費時，而且經常會失敗，因此分離病原菌一般不用于常規(guī)的診斷。此外，這也經常容易受到其他支原體的污染，如豬鼻支原體（常存在于豬的呼吸道）和豬絮狀支原體（一種非致病性的支原體，其形態(tài)、生長和抗原性與豬肺炎支原體有相似之處）(Thacker and Minion, 2010）。

支原體的這種苛求的特性和蛋白質的結構和功能的遺傳系統(tǒng)尚未闡明，在很大程度上阻礙了我們了解其生物學特性。支原體物種已發(fā)生了變化，可通過改變其表面特性，以避免被宿主的免疫反應所識別和清除 (Browning et al.,2011）。 以 往 的研究已表明，豬肺炎支原體的基因組具有一個復雜的轉錄組織，并暗示著可能存在一種未知的轉錄調控機制(Siqueira et al.,2011）。豬肺炎支原體可產生粘附素、調控素、攻擊素和阻抗素，這可對宿主的免疫系統(tǒng)進行粘附和調控(Muneta et al.,2008）。除此之外，研究發(fā)現(xiàn)，豬肺炎支原體的表面抗原能被蛋白水解處理后易位穿過細胞膜( Bogema et al.,2011 an d Wilton et al.,2009）。豬肺炎支原體選擇性切割其分泌蛋白的能力，使得這種病原菌具有一種非凡的性能，即可改變其表面結構。

分子生物學技術表明，豬肺炎支原體在基因組(Strait et al.,2008）和蛋白質組水平(Calus et al.,2007）上具有一個很大的多樣性。Vicca et al.(2003）的研究結果顯示，豬肺炎支原體在致病性方面也存在差異。這些作者根據(jù)實驗室攻毒試驗獲得的結果，將分離株歸為低毒力株、中等毒力株和強毒力株。Villarreal et al.(2011）的結果表明，低毒力豬肺炎支原體的感染并沒有對后續(xù)強毒株的感染和發(fā)病起到預防作用。然而，這有必要進一步調查研究不同毒株之間差異的臨床重要性。

三、發(fā)病機理

豬肺炎支原體是豬的特定病原體，只感染豬。它的發(fā)病機理，尤其是有可能的致病因素目前尚未完全清楚。豬肺炎支原體可通過水平傳播（如飛沫）經呼吸道黏膜感染健康的動 物 (Thacker and Minion, 2010）。一旦吸入機體，豬肺炎支原體必須克服黏膜纖毛的活動梯和大量糖基化粘蛋白的橫向層。在定植期間，支原體利用表面的糖復合物和細胞外基質成分為細菌粘附素合成誘餌。豬肺炎支原體粘附于呼吸道上皮細胞纖毛上，最初可能會引起纖毛停滯、纖毛受損，甚至有可能造成上皮細胞死亡 (Debey and Ross, 1994）。

在這種病原微生物的定植和感染中，粘附于呼吸道上皮細胞的病原體，長期的炎癥反應刺激，以及先天和適應性免疫反應的抑制和調制被認為是非常重要的步驟。結果導致，受感染的動物更容易受到其他呼吸道病原體的感染。

病原體粘附于纖毛的確切方式尚未完全闡明。不過相關研究已明確了一些參與粘附過程的蛋白。豬肺炎支原體多動能的粘附素屬于P97/P102家族，其中包括 Mhp182 (P102）、Mhp183 (P97）、Mhp 493 (P159）、Mhp 494 (P216）、Mhp 683 (P135）、Mhp 271、Mhp 107 和Mhp 108 (P116）。這些粘附素是在肉湯培養(yǎng)期間( Pinto et al.,2007a, Wilton et a l.,2009 and Zhang et al.,1995）和體內感染豬試驗 (Adams et al.,2005）中所表達的。研究已證實，P97 (Zhang et al.,1995）、P216 (Wilton et al.,2009）、P102 (Seymour et al.,2012）、Mhp271 (Deutscher et al.,2012）、Mhp107 (Seymour et al.,2011） 和Mhp683 (Bogema et al.,2011）的片段結合于豬的纖毛上。

P97蛋白是豬肺炎支原體中被首個發(fā)現(xiàn)的粘附素。它可識別存在于呼吸道上皮細胞纖毛上的受體，常被認為是一種致病因子(Zhang et al.,1995）。P97蛋白的C末端部分，命名為R1，主要負責纖毛的粘合，而這需要8個R1重復單元。由于重復的氨基酸加或減的變化有可能會導致蛋白質的改變，從而干擾免疫系統(tǒng)的識別(Minion et al.,2000）。不過，其他因素或額外的蛋白質也可能需要堅持。

P102蛋白與P97蛋白的部分操縱子相同，而且雖然它的表達可能與病原體結合于纖毛有關，但有研究表明其與毒力有關，因為在感染過程中，它會在體內表達(Adams et al.,2005）。除了這些發(fā)現(xiàn)以外，P102及其旁系同源基因的作用尚未清楚闡明。Seymour et al.(2010）研究了豬肺炎支原體232株P102的旁系同源基因P116（一種廣泛的加工蛋白）的表面表達和酶加工現(xiàn)象。結果顯示，這種蛋白是一種多功能的毒力因素，涉及豬肺炎支原體疾病的過程。該作者還指出，P102是一種具有多功能結合能力的蛋白，能夠補充豬肺炎支原體表面的血纖維蛋白溶酶原和纖連蛋白，這意味著P102蛋白在毒力中發(fā)揮著重要的作用。

事實上，P102和P97均是具有多功能結合能力的蛋白，能夠補充豬肺炎支原體表面的血纖維蛋白溶酶原和纖連蛋白，表明這兩種蛋白在毒力中發(fā)揮著重要的作用。血纖維蛋白溶酶原和纖連蛋白結合于豬肺炎支原體的表面具有劑量依賴性和可飽和性(Deutscher et al.,2012, Seymour et al.,2011 and Seymour et al.,2012）， 而且這兩種蛋白，P102和P97也是病原體感染過程中重要的目標。血纖維蛋白溶酶原在豬肺部的支氣管肺泡液中是可隨時獲得的，而豬肺炎支原體的表面受體，在哺乳動物血纖維溶酶原催化劑促進血纖維蛋白溶酶轉化的過程中，與血纖維蛋白溶酶原相結合(Seymour et al.,2012）。結果，豬肺炎支原體定植于纖毛上皮細胞，可能隔離器細胞表面上的血纖維蛋白溶酶原，并促進其轉化為血纖維蛋白溶酶。這個過程可能會造成組織侵潤和全身性感染(Bogema et al.,2012）。

雖然豬肺炎支原體主要是呼吸道的病原體，但研究發(fā)現(xiàn)其可從內臟器官中分離到，這意味著病原體或許可通過淋巴或血液循環(huán)在體內進 行 傳 播 (Marois et al.,2007）。 人工感染和接觸的豬群可從肝臟、脾臟和腎臟組織中重新分離到病原(Marois et al.,2007），而且在這些相同組織中也能檢測到豬肺炎支原體的DNA (Woolley et al.,2012）。 然 而，這種病原在體內的蔓延似乎是短暫的過程，可能不會涉及疾病的發(fā)展過程( Marois et al.,2007 and Woolley et al.,2012）。

相關研究已證實，豬肺炎支原體對免疫系統(tǒng)具有調節(jié)作用，但這種調節(jié)的本質尚未充分認識。豬肺炎支原體刺激形成肺泡巨噬細胞和淋巴細胞，產生促炎性細胞因子，這與肺部病變和淋巴組織增生有關(Rodriguez et al.,2004），意味著在病變的發(fā)展過程中有免疫反應的參與。在一般情況下，支原體能夠逃避宿主的天然防御能力。眾所周知，一些病原菌能夠利用它們的遺傳機制來改變其表面抗原，從而避開宿主的免疫應答，形成慢性感染(Razin et al.,1998）。

3株豬肺炎支原體的測序與比較分析的數(shù)據(jù)，可對與致病性有關的菌株的特異性區(qū)域進行鑒定(Minion e t al.,2004 and Vasconcelos et al.,200 5）。結果發(fā)現(xiàn)2株致病性的菌株均存在一個綜合接合因子（ICE）。這意味著，ICE是一個可移動的DNA成分，可能與基因重組和致病性有關(Pinto et al.,2007b）。此外，一些研究已發(fā)現(xiàn)了豬肺炎支原體在感染過程中被免疫系統(tǒng)識別的蛋白質(Chen e t al.,2008, Chen et al.,2003, Marchi oro et al.,2012 and Simionatto et al.,2012），這些蛋白可能具有重要的生理功能，和/或與發(fā)病機理有關。不過，這仍需要進一步的研究來闡明這些抗原在感染過程中的作用，以及涉及這種病原發(fā)病的作用機制。

四、控制措施

豬肺炎支原體引起的感染可通過多種因素的相互結合來進行綜合防控，如管理措施、生物安全措施和欄舍條件的優(yōu)化，以及抗生素和疫苗的使用。管理措施的改善是控制這種疾病的關鍵，而且這是檢測到豬肺炎支原體后首要采取的措施(Maes et al.,2008）。

抗生素（如四環(huán)素類和大環(huán)內酯類）常用于治療呼吸系統(tǒng)疾?。ㄈ缲i地方性肺炎〈Vicca et al.,2004〉）。由于病原菌是在呼吸道的表面上定植，因此唯有抗生素能夠在呼吸道的粘液和液體內達到較高的濃度才能夠在體內達到預期的效果。經有效的抗生素處理過的豬群，其臨床癥狀和肺部病變較少，而且繼發(fā)感染的現(xiàn)象 也 會 降 低 (Ciprian et al.,2012）。盡管在控制豬肺炎支原體感染方面藥物治療方案是成功的，但往往只能實現(xiàn)局部性的保護。這種效果可能是不能持續(xù)的，因為當停止治療措施后，疾病又有可能會復發(fā)(Thacker and Minion, 2010）。此外，抗生素的預防或用藥措施應盡可能最小程度地采用，以避免抗生素耐藥性的進一步發(fā)展。

接種滅活的、添加佐劑的全細胞菌苗（單獨或與抗生素聯(lián)合使用）是目前全球范圍內最常使用的，用于控制豬肺炎支原體感染的措 施 (Haesebrouck et al.,2004）。美國有超過85%的豬群接種了預防豬肺炎支原體的疫苗(Thacker and Minion, 2010）。 許多不同的研究報告已證實了疫苗接種的有效性。雖然接種疫苗對受感染的豬群具有積極的效果，但是這種效果在不同的畜群之間存在差異性。這種差異性可能是由于不同的因素，如感染水平、受感染動物的日齡、復雜的因素以及不同豬肺炎支原體分離株之間的變異性所造成的( Calus et al.,2007 and Villarreal et al.,2011）。不過，接種疫苗仍舊被認為是控制該病感染中最有效的措施(Mateusen et al.,2002）。 豬 肺 炎 支原體疫苗的主要優(yōu)勢包括改善日增重（2%～8%）和飼料轉化率（2%～5%）、縮短豬群達到屠宰體重的時間、減少臨床癥狀和肺部病變，以及降低治療成本 (Maes et al.,1999）。

商用疫苗一直是全球范圍內控制豬肺炎支原體感染的一個非常重要的手段。雖然這些疫苗確實具有一定的效果，但是它們只能提供部分保護，并不會阻止豬肺炎支原體定植于上皮細 胞 上 (Thacker et al.,2000）。 一 些研究表明，目前有效的商用疫苗可減少呼吸道中的病原菌數(shù)量( Meyns et a l.,2006 and Villarreal et al.,2011）， 因而降低動物的感染水平，以及畜群中病原菌的擴散 (Sibila et al.,2007）。雖然疫苗接種可顯著地降低疾病的臨床癥狀和肺部病變，但在豬肺炎支原體的傳播過程中僅表現(xiàn)出有限的限 制(Meyns et al.,2006 and Villarr eal et al.,2011）。這些研究結果強調了，僅僅疫苗接種不足以清除感染豬群中的豬肺炎支原體，并達到預期的效果。因此，疫苗接種應與其他管理因素相結合，以達到最佳的效果 (Haesebrouck et al.,2004）。

根據(jù)特別的畜群和變量的需求，如生產系統(tǒng)、畜群的類型、感染情況和養(yǎng)豬生產者的選擇，人們已采用不同的疫苗接種策略（包括單劑量和雙劑量疫苗接種方案）。疫苗接種的決定或不依賴于養(yǎng)殖場的經濟可行性，以及接種疫苗將帶來的與疾病所造成的經濟損失有關的利潤(Maes et al.,2008）。

盡管疫苗接種已廣泛應用于對抗豬肺炎支原體，但是其對病原體的傳播、不同的菌株以及免疫反應等多方面的影響尚不清楚，這有待進一步的研究。然而，有研究表明，黏膜抗體和全身性免疫反應對于本病的控制非常重要(Thacker et al.,2000）。商用疫苗可誘導血清中特異性抗體的產生，盡管疫苗之間的抗體反應可能 有 所 不 同 (Thacker et al.,1998），而且動物之間血清轉化率的變化范圍可從30%～100%不等(Sibila et al.,2004）。 特 異 性 抗 體的誘導和對抗肺炎之間的相互關系還不清楚。豬群人工攻毒試驗的結果表明，血清中的抗體濃度與防護豬肺炎支原體之間是不相關的(Thacker et al.,1998）。因此，血清中含有抗體及其濃度水平，似乎并不是評價保護性免疫的最佳方式。

所有有效的商用疫苗都是由滅活的支原體培養(yǎng)物而制成的，而且其中含有不同的佐劑。雖然佐劑具有不同的性質，但是一般來說，它們會刺激和激活機體的免疫防御系統(tǒng)對抗外源物質（抗原）。一些佐劑被認為是相對溫和的，如鋁鹽等，而油性佐劑，通常以油劑的形式（油和水的混合），往往具有更強的活性，并可能需要更長的時間來被吸收，因此佐劑釋放和刺激的時間將會更長(Yuki and Kiyono, 2003）。 在 商 用疫苗中佐劑成分的差異可能也會影響誘導疫苗反應的種類和保護的水平。

除此之外，目前用于控制豬地方性肺炎的商用疫苗大多數(shù)是以J株為基礎，這種菌株最初是從英國的一頭豬上分離到。因此，人們會質疑這種菌株是否與世界各地流行的豬肺炎支原體具有相似的特點(Stakenborg et al.,2005 and Vranckx et al.,2011）。在臨床條件下觀察到的疫苗效果的差異性可能是由于，除其他因素外，豬群中流行的菌株與疫苗菌株之間存在抗原的差異。

除了疫苗接種的效果，在新生仔豬的保護中，母源細胞免疫和抗體介導的免疫反應的作用尚不完全清楚，而主動免疫的潛在干擾則需要更進一步的了解。不管母源抗體是否對疫苗接種的效果存在差異，單有研究報告指出，單劑量的豬肺支原體疫苗可對1周齡左右的仔豬誘導產生長期的保護性免疫，而且人工感染強毒后肺部的病變程度有所減緩(Reynolds et al.,2009）。當來自不同窩的豬群混養(yǎng)在一起時一種早期的疫苗接種方案是應在斷奶的時候給予血清轉化。這時候很有可能是它們要面臨第一個傳染病的挑戰(zhàn)，而當有發(fā)展多因素的風險時，重癥肺炎則可能會加劇。Meyns et al.(2004）估計，在為期6周的保育期間，一頭受感染動物將平均感染同欄的一頭易感動物。因此，這些結果強調了，從幼年動物開始實施防控策略的重要性。

五、新的試驗性疫苗

盡管目前使用的疫苗都是以菌苗為基礎，但是關于其有效性的問題依然存在。而且這些疫苗的生產成本也較高，這主要是因為豬肺炎支原體在體外難以培養(yǎng)(Kobisch and Friis, 1996）。因此，這有必要研發(fā)更有效且成本更低的豬肺炎支原體疫苗。重組DNA技術可用來克服常規(guī)疫苗所遇到的一些問題。雖然4株豬肺炎支原體的基因組已被成功測出( Liu et al.,2011, Minion e t al.,2004 and Vasconcelos et al.,2005），但是幾乎沒有找到可以作為候選疫苗的重組抗原( Chen et al.,2008, C hen et al.,2003, Fagan et al.,2001 an d King et al.,1997）。這種病原菌的基因組很小，分泌蛋白或表面蛋白的數(shù)量有限，這有利于反向疫苗學技術的使用(Rappuoli, 2001）。不過，支原體屬使用一個不尋常的遺傳密碼。在大多數(shù)支原體中，色氨酸的編碼子不是TGG，而是TGA，這是一個終止密碼子(Razin et al.,1998）。這種差異阻礙了豬肺炎支原體含有TGA密碼子的基因在大腸桿菌中表達，以及最為可行的系統(tǒng)用于重組蛋白的生產(Nuc and Nuc, 2006）。不過，點突變技術已可把TGA替換成TGG，從而解決了這個問題。Simionatto et al.（2009）闡述了從豬肺炎支原體的14個基因中定點突變TGA密碼子的PCR程序的優(yōu)化，是這些基因可在大腸桿菌中克隆和表達。

目前，科研人員正不斷努力研發(fā)新的疫苗，為預防豬肺炎支原體的感染提供更好的保護。一些研究已通過不同形式的用法和劑型，評估了豬肺炎支原體的重組蛋白，試圖研發(fā)更有效的疫苗。其中，某些重組蛋白進行了單獨的評估(Galli et al.,201 2 and Simionatto et al.,2012）， 而 其他則與減毒細菌或病毒載體相關聯(lián)(Chen et al.,2006a, Chen et al.,200 6b, Chen et al.,2001, Fagan et al.,2001, Okamba et al.,2010, Okamba et al.,2007, Shimoji et al.,2003 and Zou et al.,2011），或與黏膜佐劑 相 融 合 (Conceicao et al.,2006），又或作為一種抗原的混合物(Chen et al.,2008）。只有少數(shù)一些重組蛋白進行了豬的攻毒試驗，而大多數(shù)僅在小鼠上進行了評價。研究結果發(fā)現(xiàn)了這些抗體誘導的免疫存在一定的差異，這可能受到疫苗設計、免疫途徑、以及有利于抗原刺激產生抗體的正確折疊和/或其他翻譯后修飾能力的影響(Pinto et al.,2007a）。然而，這些評估結果表明，這些新的疫苗可能代表著有前景的新措施，并在控制豬肺炎支原體上可能是經濟可行的。表1總結了迄今為止用于試驗性豬肺炎支原體疫苗的抗原、佐劑、載體和免疫途徑。

粘附素P97蛋白，豬肺炎支原體中一種重要的粘附素，已被廣泛的研究且認定為應對豬肺炎支原體最具潛力的保護性抗原。在一些研究中已采用不同的疫苗制劑對其進行了評估。King et al.(1997）報道稱，基于重組粘附素P97蛋白的亞單位疫苗，在豬的攻毒試驗中并沒有產生顯著的保護效果。不過，當P97蛋白的C末端區(qū)域（R1）與假單胞菌毒素相融合以后，免疫的小鼠和豬均對R1能產生特異性的免疫應答(Chen et al.,2001）?？诜庖咧亟M紅斑丹毒絲菌表達的P71蛋白，可降低由豬肺炎支原體感染引起的肺部病變的嚴重程度，這表明，紅斑丹毒絲菌可能是一個有前景的疫苗載體，可搭載外來抗原至豬的免疫系統(tǒng)(Ogawa et al.,2009）。

除了疫苗中的抗原以外，佐劑和免疫途徑在免疫保護中也發(fā)揮著重要的作用。黏膜佐劑和滴鼻免疫接種作為替代傳統(tǒng)免疫的方式尤為受到人們關注，這可能會提高黏膜免疫力。Conceicao et al.(2006）的報道稱，一種將具有黏膜免疫佐劑作用的不耐熱腸毒素B亞單位與P97蛋白的R1亞單位相融合的重組亞單位疫苗，在小鼠中對R1可產生全身性和黏膜性抗體。而Shimoji et al.(2003）的報道稱，當給豬群進行人工感染時，紅斑丹毒絲菌表達的P97蛋白的R1區(qū)域可將降低鼻內免疫豬群的肺部病變的嚴重程度。然而，這沒有產生體液或細胞介導的免疫反應。此外，Okamba et al.(2007）的研究結果表明，小鼠鼻內免疫缺陷型腺病毒表達的P97蛋白的C末端區(qū)域(rAdP97c），可誘導產生系統(tǒng)性Th1/Th2免疫反應和局部免疫。與此相同的方法在豬上也進行了評估，并與一些商用疫苗作了比較。結果顯示，rAdP97c可顯著降低炎癥反應的嚴重程度，以及呼吸道中豬肺炎支原體的數(shù)量。而且平均日增重也略有改善。不過，商用疫苗可更有效第誘導保護性免疫(Okamba et al.,2010）。這些結果表明，這種抗原誘導的免疫可能受到疫苗設計、免疫途徑，以及所使用的佐劑或載體的影響。

研究顯示，給小鼠口服免疫含有P97蛋白R1區(qū)域的鼠傷寒沙門氏菌aroA CS332和豬肺炎支原體的核苷酸還原酶（NrdF）R2亞單位的疫苗，可產生Th1細胞為基礎的免疫反應，但不會產生體液或黏膜免疫反應。然而，在鼠傷寒沙門氏菌aroA SL3261中表達NrdF的R2亞單位，可在免疫小鼠中發(fā)現(xiàn)黏膜免疫反應(Fagan et al.,1997）。而當用于免疫豬群時，這種抗原能夠降低豬肺炎支原體攻毒感染所引起的肺部病變(Fagan et al.,2001）。

表1 試驗性豬肺炎支原體疫苗的信息表

除了重組亞單位疫苗以外，相關研究也對DNA疫苗在小鼠體內的免疫反應進行了研究。結果發(fā)現(xiàn)，基于熱休克蛋白P42的DNA疫苗對小鼠可產生顯著的免疫反應。小鼠的DNA免疫可誘導產生Th1細胞和Th2細胞的免疫反應。此外，研究還發(fā)現(xiàn)，受免疫動物的血清可抑制豬肺炎支原體的生長(Chen et al.,2003）。一些研究觀察到，含有P46抗原的DNA疫苗也具有相類似的功效。不僅可在免疫小鼠中產生Th1和Th2免疫反應，而且還可增加干擾素-γ的 水 平 (Galli et al.,2012）。DNA 疫苗可能具有一定的應用前景，以制定更有效的豬肺炎支原體疫苗。

盡管這些抗原具有免疫特性以及肺部病變的嚴重程度有所下降，但目前它們其中沒有一個能夠像商用疫苗一樣，可提供全面的保護或類似的保護效果。多價疫苗也是預防豬肺炎支原體的另一個很好的選擇(Chen et al.,2008）。相關研究評價了豬肺炎支原體的5個重組抗原(P97、P97R1、NRDF、P36和 P46）作為DNA和蛋白質疫苗的效果。小鼠免疫抗原混合物（DNA疫苗）的分析結果顯示，只有P97和P36蛋白可誘導血清IgG抗體的產生。肌注免疫抗原混合物（DNA疫苗）則可誘導Th1細胞免疫反應，而這抗體反應似乎是抗原依賴的。皮下免疫相同的抗原混合物（重組亞單位疫苗）可誘導體液免疫和Th1細胞免疫的產生。當DNA疫苗和亞單位疫苗聯(lián)合使用時，機體可同時產生體液免疫和Th1細胞免疫。此外，商用疫苗免疫產生的血清抗體不能識別P97蛋白，這可能意味著在滅活全細胞菌苗中缺乏這種抗原的表達(Chen et al.,2008）。

免疫原性豬肺炎支原體蛋白的鑒定和特定性描述對疫苗的改良來說是非常重要的一步。雖然支原體中不尋常的密碼子可能會導致這個過程非常困難(Razin et al.,1998），但是S imionatto et al.,2009 and Simiona tto et al.,2010和Marchioro et al.(2012）曾報道豬肺炎支原體的基因可在大腸桿菌中成功地克隆和表達。根據(jù)重組蛋白34的抗原性和免疫原性，預測其是表面暴露的，或分泌豬肺炎支原體介導宿主細胞相互作用的重組蛋白，而且經檢測這是宿主免疫反應的主要目標。這些抗原在小鼠中的評價結果表明，它們具有作為預防豬肺炎支原體感染的候選疫苗的潛能(Simionatto et al.,2012）。 雖 然 小 鼠的免疫反應不能外推到其他物種，但這些結果對進一步的臨床研究提供了數(shù)據(jù)參考。

六、結論與展望

雖然采用藥物措施和/或預防免疫接種，結合管理措施和欄舍條件的優(yōu)化已給豬群的健康帶來很大的改善，但是這些措施并不能完全保證沒有豬肺炎支原體的感染。目前的措施不能對本病提供可持續(xù)的控制策略，不過從經濟利益來說這些措施還是有作用的。

商用疫苗可用來限制豬肺炎支原體的感染，不過確切的保護作用機制尚不清楚。科研人員已努力研發(fā)一種更有效的豬肺炎支原體疫苗，而一些研究結果表明，重組DNA疫苗似乎是一種可行的替代方案。此外，無論是保護還是損傷的誘導，研究宿主的免疫應答，以了解其發(fā)揮的作用顯然是非常重要的。未來的研究將在家豬中確定新的候選疫苗的效果，并且更好地了解它們的作用模式。