趙蕓慧，王曉龍，田阿勇，馬 虹，王俊科

(中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院麻醉科，遼寧沈陽 110001)

氯胺酮是臨床常用靜脈麻醉藥，特別是廣泛用于小兒短小手術(shù)的麻醉和術(shù)前基礎(chǔ)麻醉。已知氯胺酮進入體內(nèi)之后，大部分經(jīng)肝臟細胞色素P450代謝，形成去甲氯胺酮。有必要進一步研究氯胺酮的代謝機制和影響其代謝的遺傳機制。

1 材料與方法

1.1 一般資料 本研究進行人體組織實驗已獲得中國醫(yī)科大學倫理委員會的批準。20例人體肝臟組織來自中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院普外科肝血管瘤或者肝癌行肝臟部分切除手術(shù)，患者(8男，12女)的平均年齡為(49±12)歲，并已排除急慢性肝炎、肝硬化和長期吸煙酗酒史病例。取直徑為1～2 cm的正常肝臟組織(經(jīng)病理形態(tài)學證實)，10 min內(nèi)液氮冰凍，－70℃冰箱保存?zhèn)溆?。肝臟微粒體通過差速離心法制備，所有試劑及器械均需冰盒內(nèi)預冷。

1.2 孵育條件 同參考文獻［1］。

1.3 樣品處理 加入10 μl內(nèi)標布比卡因混勻，加入750 μl乙腈沉淀蛋白，振蕩混勻，10 800×g離心10 min，取上清50 μl進樣。采用高效液相色譜法(HPLC)測定各時點氯胺酮的濃度。與CYP2B6的特異底物丁氨苯丙酮和抑制劑奧芬那君作相關(guān)分析。熒光檢測波長為211 nm，流速1 ml·min－1，流動相:乙腈 ∶0.025 mol·L－1KH2PO4∶三乙胺(40 ∶60 ∶0.02)。

1.5 抑制性研究 應用CYP2B6特異性抑制劑奧芬那君對微粒體中氯胺酮的代謝進行抑制性研究。這些抑制劑溶解在甲醇溶液當中，在孵育反應開始前，10 μmol·L－1奧芬那君 20 μl分別與400 mg·L－1肝微粒體和 0.05 mmol·L－1氯胺酮在磷酸緩沖液當中預孵育3 min，反應從加入NADPH(1 mmol·L－1)工作液開始持續(xù)60 min，其余步驟同前述。

2 結(jié)果

20例人肝臟微粒體中氯胺酮的代謝速率相差最大約1倍，平均為(9.7 ±2.4)μmol·min－1·g－1protein。該速率與CYP2B6活性探針丁氨苯丙酮代謝速率呈正相關(guān)(r=0.897，P＜0.01)。加入特異性抑制劑組，氯胺酮的平均代謝速率都明顯低于正常孵育對照組(P＜0.01)，為(5.1±1.3)μmol·min－1·g－1protein，抑制率為 47.5%。

3 討論

實驗結(jié)果表明氯胺酮在微粒體孵育液的代謝速率和CYP2B6的活性探針丁氨苯丙酮的代謝速率呈相關(guān)性;CYP2B6酶活性特異性抑制劑奧芬那君對氯胺酮在微粒體孵育液的代謝速率有明顯的抑制作用;CYP2B6對氯胺酮的代謝具有催化作用;適用于藥物體外代謝速率的研究。

在人類P450家庭中，主要有3族(CYP1、CYP2、CPY3)19種同工酶參與外來化學物的代謝［2］。CYP1，2，3家族約占肝P450總含量的70%，并負責大多數(shù)藥物的代謝。已知CYP3A4、CYP2B6、CYP2C9三種酶在肝微粒體中均具有較高活性［3－4］，并且可能都參與了氯胺酮的體內(nèi)代謝［1，5－7］。遺傳多態(tài)性、酶抑制、酶誘導及生理因素均可引起細胞色素P450活性的改變，這有一定的臨床意義。因為這會引起藥物藥代動力學的改變，導致藥物效能改變，因代謝減少或毒性代謝物生成增多而增加藥物毒性，以及導致藥物的相互作用。究竟有幾種P450酶參與氯胺酮的代謝和哪一種酶起到?jīng)Q定性作用目前還沒有定論，本文可能為主要由CYP2B6催化的異質(zhì)化合物的代謝提供重要依據(jù)，還有待廣大學者作進一步深入的研究。

［1］ 趙蕓慧，田阿勇，馬 虹，等.人肝微粒體中CYP3A4對氯胺酮代謝的催化作用［J］.中國藥理學通報，2012，28(7):986 －7.

［1］ Zhao Y H，Tian A Y，Ma H，et al.Contribution of CYP3A4 to catalysis of ketamine in human hepatic microsome［J］.Chin Pharmacol Bull，2012，28(7):986 － 7.

［2］ 賀全仁.人類細胞色素P450同工酶與藥物代謝［J］.中國臨床藥理學與治療學雜志，1997，2(4):307－10.

［2］ He Q R.Human cytochromes P450 isozyme and drug metabolism［J］.Chin J Clin Pharmacol Ther，1997，2(4):307 －10.

［3］ Ekins S，Wrighton S A.The role of CYP2B6 in human xenobiotic metabolism［J］.Drug Metab Rev，1999，31:719 －54.

［4］ 周宏灝.遺傳藥理學［M］.北京:科學出版社，2001:87.

［4］ Zhou H H.Pharmacogenetics［M］.Beijing:Science Press，2001:87.

［5］ Yanagihara Y，Kariya S， Ohtani M， et al. Involvement of CYP2B6 in N-demethylation of ketamine in human liver microsomes［J］.Drug Metab Dispos，2001，29:887 －90.

［6］ Hijazi Y，Boulieu R.Contribution of CYP3A4，CYP2C9，and CYP2C9 isoforms to N-demethylation of ketamine in human liver microsomes［J］.Drug Metab Dispos，2002;30:853 －8.

［7］ M?ssner L D，Schmitz A，Theurillat R，et al.Inhibition of cytochrome P450 enzymes involved in ketamine metabolism by use of liver microsomes and specific cytochrome P450 enzymes from horses，dogs，and humans［J］.Am J Vet Res，2011，72(11):1505 －13.