謝玉策，柯樂芹，張松成

(1.麗水學(xué)院，浙江麗水 323000;2.麗水出入境檢驗(yàn)檢疫局，浙江麗水 323000)

香菇多糖系從人工培養(yǎng)的傘菌科真菌香菇子實(shí)體中提取分離純化獲得的均一組分的多糖?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，香菇多糖是一種宿主防衛(wèi)增強(qiáng)劑(HDP)，能使機(jī)體的淋巴細(xì)胞大量增加［1］;對(duì)同種異基因、同種同基因和原發(fā)腫瘤具有顯著的抑制作用［2］;可防止化學(xué)因素或病毒引起的致癌作用［3］，抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移，同時(shí)也能增強(qiáng)宿主對(duì)不同細(xì)菌、寄生蟲疾病和病毒包括艾滋病毒的抵抗力［4］，并能減輕放療和化療的毒性反應(yīng)［5］。

香菇多糖1969年在日本首先發(fā)現(xiàn)，1986年日本厚生省批準(zhǔn)生產(chǎn)并外銷。香菇多糖具療效高、劑量低、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)，但價(jià)格高昂，普通腫瘤患者難以承受［6］。各國學(xué)者就香菇多糖的提取、分離純化、理化性質(zhì)、化學(xué)結(jié)構(gòu)、生理活性和作用機(jī)制，以及臨床功效等方面展開了深入的研究，并取得一定的成果，但對(duì)香菇采收前影響多糖含量變化的因素研究涉及較少。本研究擬對(duì)不同品種、不同成熟度、不同鋅濃度處理香菇的多糖含量進(jìn)行檢測，試圖從中發(fā)現(xiàn)多糖含量較高的品種、適宜的采收成熟度和栽培方法等，為今后更好地開發(fā)香菇多糖提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 香菇培養(yǎng)料配方

雜木屑78%，麩皮20%，白糖1%，石膏1%，料水比1∶1.1，pH值為6。每支菌棒合濕料重2 kg。常壓滅菌，菌絲發(fā)滿菌棒進(jìn)行塑料大棚栽培，按常規(guī)出菇管理模式管理。

1.1.2 香菇菌種

供試香菇有868，9015，808、中1、中2、中6、中7、中8、中9等9個(gè)品種，其中中1、中2、中6、中7、中8、中9等6個(gè)品種是以808為母本選育的中試品種。

1.1.3 主要試劑

80%苯酚溶液 (稱取80 g苯酚于100 mL燒杯中，加水溶解，定容至100 mL后轉(zhuǎn)至棕色瓶中，置于4℃冰箱中避光儲(chǔ)存);葡萄糖 (使用前于105℃恒溫烘干至恒重);5%苯酚 (吸取5 mL苯酚溶液，于75 mL水中混勻，臨用現(xiàn)配);100 mg·L-1標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液 (稱取0.100 0 g葡萄糖于100 mL燒杯中，加水溶解，定容至100 mL，置于4℃冰箱里儲(chǔ)存);鹽酸 (量取10 mL鹽酸加到適量水中，再稀釋至120 mL);鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液 (國家鋼鐵材料測試中心鋼鐵研究總院);其他試劑均為分析純產(chǎn)品。

1.2 儀器與設(shè)備

B-220型恒溫水浴鍋 (上海亞榮生化儀器廠);UV-1601PC紫外分光光度計(jì) (日本島津制作所);超聲波提取器KQ-100E(昆山市超聲儀器有限公司);XB124型普利賽斯電子分析天平 (感量0.0001 g);TDZ5-WS型離心機(jī) (湖南湘儀);全譜直讀等離子體原子發(fā)射光譜儀iCAP6300(美國Thermo Fisher Scientific);高通量密閉微波消解系統(tǒng)MARS(美國CEM)。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣品制備

香菇采摘后運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室即放入烘箱于70℃烘至恒重，然后磨成粉備用。

1.3.2 多糖和鋅含量的測定方法

多糖測定方法參照NY/T 1676—2008食用菌中粗多糖含量的測定，其中葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液質(zhì)量 (mg)為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)繪制，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為 y=7.573 6 x+0.05，R2=0.999 1。

鋅含量的測定方法參照DB53/T 288—2009食品中鉛、砷、鐵、鈣、鋅等含量的測定方法中的電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜 (ICP-AES)法，其中鋅標(biāo)準(zhǔn)曲線以鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量 (μg)為橫坐標(biāo)、發(fā)射強(qiáng)度為縱坐標(biāo)繪制，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:y=46 229 x，R2=0.999 7。

1.3.3 不同香菇品種的多糖含量測定

選取香菇868，9015，808，中1，中2，中6，中7，中8，中9等9個(gè)品種子實(shí)體，分別測定其多糖含量。

1.3.4 不同成熟度采收的香菇品種的多糖含量測定

選取香菇品種868，9015，808的正常采收成熟度和完全開傘的子實(shí)體測定其多糖含量。

1.3.5 不同濃度鋅處理香菇的多糖和鋅含量測定

在香菇培養(yǎng)基配料中添加ZnSO4·7H2O，使培養(yǎng)料Zn2+濃度達(dá)50，100，200，400 mg·kg-1，選取868，9015，808等3個(gè)品種的4種鋅濃度處理的香菇子實(shí)體測定其多糖含量和鋅含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同香菇品種的多糖含量

圖1顯示，不同香菇品種的多糖含量 (干基)76.43～130.47 g·kg-1，其中中7品種的多糖含量最高，為130.47 g·kg-1，其次是868品種，為114.17 g·kg-1，808品種的多糖含量最低，僅76.43 g·kg-1。

2.2 采收成熟度對(duì)香菇多糖含量的影響

圖2顯示，868，9015，808品種正常采收和完全開傘子實(shí)體的多糖含量基本一致，變化不明顯。

圖1 不同香菇品種的多糖含量變化

圖2 不同成熟度的香菇多糖含量的變化

2.3 不同鋅濃度處理的香菇多糖和鋅含量測定

圖3 顯示，868，9015，808香菇品種鋅處理后多糖含量均明顯增加，且3個(gè)品種都以鋅濃度50 mg·kg-1時(shí)多糖含量為最高，之后隨著鋅濃度的增加多糖含量反而下降，但均比對(duì)照組要高。

圖3 不同鋅濃度處理的香菇多糖含量變化

由表1可以看出，隨著鋅處理濃度的增加，香菇中鋅含量也隨之提高，但當(dāng)濃度大于200 mg·kg-1時(shí)，鋅含量增加量逐漸變小或不再增加。根據(jù)GB 2762—2005食品污染物限量的規(guī)定認(rèn)為，香菇中鋅含量均小于100 mg·kg-1，屬安全范圍。

表1 不同濃度鋅處理的香菇子實(shí)體鋅含量變化

3 小結(jié)與討論

通過對(duì)香菇品種、采收成熟度和鋅濃度的不同處理下多糖含量的變化研究表明，9個(gè)試驗(yàn)品種中，中7的多糖含量最高，其次是868品種，808品種的多糖含量最低。不同香菇品種的多糖含量差異較明顯。

868，9015，808正常采收和完全開傘子實(shí)體的多糖含量基本一致，變化不明顯。但僅1朵香菇而言，完全開傘比正常采收的產(chǎn)量可提高50%～100%，因此完全開傘可大幅提高香菇產(chǎn)量及其多糖收獲量。

868，9015，808通過鋅處理后的多糖含量均有明顯增加，并都以鋅處理濃度為50 mg·kg-1時(shí)多糖含量為最高，而此時(shí)子實(shí)體中的鋅含量增加不明顯，機(jī)理還需進(jìn)一步探討。

綜上認(rèn)為，針對(duì)香菇多糖的生產(chǎn)，通過提取工藝的優(yōu)化，固然可使多糖得率提高，如果結(jié)合高多糖含量的原料，則可起到事半功倍的效果。建議香菇多糖生產(chǎn)企業(yè)建立原料來源基地。

采取以下幾個(gè)措施提高香菇原料的多糖含量或產(chǎn)量。一是選擇多糖含量高的品種用于栽培;二是待香菇充分成熟即完全開傘后再進(jìn)行采收，以提高香菇產(chǎn)量;三是對(duì)香菇栽培料進(jìn)行適當(dāng)?shù)膬?yōu)化，例如添加適當(dāng)濃度的鋅元素可使多糖含量明顯增加。此外，香菇的育種，也可改變育種思路，除了所選育的品種能有較高的產(chǎn)量和品質(zhì)外，還應(yīng)根據(jù)不同客戶對(duì)品種的要求，采取定向育種滿足市場需求，如此既有助于增加香菇生產(chǎn)、加工的收益，又能幫助產(chǎn)區(qū)農(nóng)民增收。

［1］ Urushiya K I.Host Defense Mechanisms Against Cancer［M］.Amsterdan:Excerta Medica，1986:167.

［2］ Zakany J，Chihara G，F(xiàn)achet J. Effect of lentinan on tumorgrowth in murine allogeneic and syngeneic hosts ［J］.Int J Cancer，1980，25:371.

［3］ Suga T，Shiio T，Maeda Y Y.Antitumor actitivity of lentinan in murine syngeneic and antochthonous hosts and its suppressive effect on 3-methy-l chlolanthrene-induced carcinogeneisis ［J］.Cancer Res，1984，44:5132.

［4］ Lapis K，Papay J，Paku S，et al.The effect of lentinan on the metastais of Lew is lung carcinoma ［J］.Int J Immunotherapy，1989，11(5):195.

［5］ 王健，龔興國.多糖的抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)研究進(jìn)展 ［J］.中國生化藥物雜志，2001，22(1):52-54.

［6］ 方積年，王順春.香菇多糖的研究進(jìn)展 ［J］.中國藥學(xué)雜志，1997，32(6):332-334.