王 榮，石冬琴，，謝 華，李文斌，田 薇，賈正平

(1.蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院臨床藥理基地，甘肅蘭州 730050;2.浙江農(nóng)林大學(xué)林業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院，浙江 臨安 311300)

目前，肺癌依然是導(dǎo)致人類癌性死亡的首位疾病，全球每年因肺癌死亡的人數(shù)超過100萬，其中80% ～90%的患者為非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)［1］。近年來，雖然肺癌的檢測方法學(xué)及治療手段不斷改進(jìn)，但對大多數(shù)肺癌患者的預(yù)后并沒有明顯改善，經(jīng)統(tǒng)計5年生存率僅為10% ～15%［2］。于是，靶向治療走入人們的視線，通過服用靶向藥物來延長患者的生存期。目前，應(yīng)用EGFR-TKI進(jìn)行肺癌的靶向治療相關(guān)研究最為廣泛。有研究表明EGFR突變在女性、非吸煙者、腺癌這些患者群體中優(yōu)先出現(xiàn)，而這些特征被證實(shí)可以預(yù)測吉非替尼在肺癌試驗(yàn)中易瑞沙生存評價［3－4］。本文就EGFR突變及其與臨床病理特征、靶向藥物治療及臨床意義的相關(guān)性進(jìn)行綜述。

1 EGFR基因突變臨床意義

1.1 EGFR的生物學(xué)特征及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)是屬于酪氨酸激酶I型受體家族，其家族成員主要包括EGFR(HER1)、HER2、HER3、HER4四種同源受體?；蚨ㄎ挥谌说?號染色體的短臂，含有28個外顯子。EGFR研究發(fā)現(xiàn)廣泛分布于各種上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜上，分為胞外區(qū)、跨膜區(qū)、胞內(nèi)區(qū)三個部分。目前報道EGFR配體有:表皮生長因子 ( EGF)、轉(zhuǎn)化生長因子-(TGF-)、結(jié)合肝素的 E GF、雙調(diào)蛋白、B-cellulin 等［5］。EGFR主要信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑有:RAS-RAF-MEK-ERK-MAPK通路、PLC-γ 通路、PI3K-PDK 通路和 J AK-STAT 通路［6］。

1.2 EGFR在NSCLCL中的基因突變 EGFR的基因突變主要發(fā)生在胞內(nèi)TK區(qū)域前四個外顯子之上(18～21)，目前報道發(fā)現(xiàn)的TK區(qū)域突變有30多種［7］(Fig 1)。

主要的突變有［8］:在外顯子19處的缺失突變、在密碼子719處的點(diǎn)突變(GT19X)、在外顯子20處的插入突變、在外顯子221-aminosteroid。而在外顯子l9處的缺失突變包括從亮氨酸-747到谷氨酸-749，定位于酪氨酸激酶C螺旋區(qū)N端，該缺失約占44%。在外顯子20處出現(xiàn)的突變約占5%，G719X占4%。在外顯子21處的點(diǎn)突變是最常見的EGFRTK區(qū)點(diǎn)突變，約占41%。劉紅梅等［9］對收集到的31例晚期NSCLC患者的腫瘤組織標(biāo)本，檢測了EGFR酪氨酸激酶域基因突變，其結(jié)果表明共檢測出12例基因突變，4例為19號染色體缺失突變，其中3例病例為2 235～2 249核苷酸缺失造成E746～A750氨基酸改變，1例病例為2 240～2 257核苷酸缺失，而造成了L747～P753insS氨基酸改變。8例病例為2l號染色體錯義突變，均為L858R(T＞G)變異，但l8及20號染色體未見突變。Tokumo等［3］報道，在120例外科手術(shù)切除的NSCLC樣本的18～21外顯子檢測中發(fā)現(xiàn)大多數(shù)EGFR突變?yōu)?9外顯子缺失和21外顯子的點(diǎn)突變(L858R)，這些突變可引起EGFR酪氨酸激酶的活性增強(qiáng)，同時啟動不同的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。研究表明［10］EGFR在43%～89% 的非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)中表達(dá)為上調(diào)，其在腫瘤的形成及其介導(dǎo)瘤細(xì)胞的生物行為中發(fā)揮著重要的作用，是治療NSCLC的重要靶點(diǎn)之一，因此，研究 EGFR突變在NSCLC發(fā)病中的具體作用機(jī)制對EGFR-TKI的治療、預(yù)后及生存期有至關(guān)重要的意義。

Fig 1 EGFR mutations in non-small cell lung cancer

2 EGFR基因突變與臨床病理特征的關(guān)系

目前的研究發(fā)現(xiàn)表明［11］EGFR突變與性別、種族、吸煙、病理類型有關(guān)，在東方人群、女性、非吸煙、腺癌的患者中變異發(fā)生率較高。

Toyooka等［12］研究了311例 NSCLC切除樣本，檢查其EGFR19和21外顯子的突變情況。此外，還對431例NSCLC樣本進(jìn)行了EGFR突變和臨床因素(年齡、性別、吸煙狀態(tài)、組織學(xué)、病程和生存情況)的可能相關(guān)性進(jìn)行了研究。進(jìn)行單變量分析，發(fā)現(xiàn)EGFR突變在女性、非吸煙者和腺癌患者的組織中的檢出率否認(rèn)分別要比男性、吸煙者、非腺癌患者的組織中的檢出率高。進(jìn)行多變量分析，發(fā)現(xiàn)非吸煙、腺癌組織和EGFR突變存在有重要的聯(lián)系。這些發(fā)現(xiàn)和其他報道相一致，證實(shí)同類型人不存在選擇差異性。

張靜等［13］應(yīng)用顯微切割技術(shù)及蝎形探針擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)(scorpions amplification refractory mutation system，Scorpions ARMS)檢測170例NSCLC石蠟包埋腫瘤組織中EGFR基因第18、19、20和21外顯子突變。腺癌、鱗癌和大細(xì)胞癌EGFR基因突變的檢出率分別為:60.3%(82/136)、0(0/24)和20%(2/0)，結(jié)果顯示:腺癌患者中EGFR基因突變率明顯高于鱗癌及大細(xì)胞癌患者，腺癌與非腺癌EGFR基因突變比較其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001);136例腺癌中細(xì)支氣管肺泡癌(15/22)和其他類型腺癌(67/114)的EGFR基因突變率比較，其差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。通過比較EGFR基因突變與NSCLC各臨床病理特征的關(guān)系，表明EGFR基因突變常見于女性、不吸煙、腫瘤較小(≤3 cm)且分化程度較好者(P＜0.05)，但EGFR基因突變與患者的年齡、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移及疾病pTNM分期等則無相關(guān)性(P＞0.05)，見 Tab 1。

表1 非小細(xì)胞肺癌組織中EGFR基因與臨床病理特征的關(guān)系

綜上所述:EGFR基因突變與性別、種族、吸煙、腺癌、腫瘤大小、分化程度有一定的相關(guān)性。因此研究EGFR基因突變與臨床病理特征的關(guān)系有助于指導(dǎo)臨床用藥、個體化治療、手術(shù)預(yù)后以及延長肺癌患者的生存期。

3 EGFR基因突變與相關(guān)靶向藥物治療

基于EGFR在腫瘤細(xì)胞中的突變，針對EGFR的特異性分子治療NSCLC靶向藥物已被研究并廣泛應(yīng)用于臨床。主要靶向藥物有兩大類:一類是小分子酪氨酸激酶抑制劑(簡稱TKI)，其進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，并直接作用于EGFR的胞內(nèi)區(qū)，從而干擾三磷酸腺苷(ATP)結(jié)合，抑21 bp氨酸激酶磷酸化，代表性的藥物如吉非替尼(gefitinib，Iress)和厄洛替尼(erlotinib，Tarcev)。另一類是單克隆抗體(簡稱單抗)，其作用于胞外區(qū)，競爭性地抑制配體與EGFR的結(jié)合，從而使受體失去活性，影響細(xì)胞的生長，代表性的藥物如西妥昔單抗(Cetuximab，Erbitux)。

目前許多研究發(fā)現(xiàn)EGFR基因突變與小分子酪氨酸激酶抑制劑的療效相關(guān)，其中研究較多的是吉非替尼和厄洛替尼。Tokumo等［3］對21例給予吉非替尼治療的患者研究發(fā)現(xiàn)，攜帶EGFR突變的腫瘤病人對藥物的反應(yīng)明顯較高。日本、韓國、中國臺灣、新加坡及中國內(nèi)地的研究表明［14］使用吉非替尼治療NSCLC，整體生存率和緩解率東方人群明顯優(yōu)于西方人群，且吉非替尼對以往化療失敗的局部晚期或轉(zhuǎn)移性NSCLC患者療效和安全性較好。有文獻(xiàn)［15－16］報道在NSCLC的EGFR-激酶域突變是激活突變，導(dǎo)致一個基本激活受體，如19外顯子的核苷酸2 481到2 495或2 482到2 496位的缺失，外顯子21密碼子858處的點(diǎn)突變與特異性EGFRTKI的反應(yīng)有關(guān)系，靶向藥物吉非替尼和厄洛替尼有明顯療效。另外有研究報道［17］在NSCLC患者中一個異常的EGFR無義突變，臨床上反映聯(lián)合化療藥物厄洛替尼的敏感性低。Lynch 等［18］和 Gazdar等［19］分別報道酪氨酸激酶抑制劑對EGFR發(fā)生激活突變的患者療效明顯，且女性、腺癌患者、非吸煙者、亞洲人更容易發(fā)生EGFR激活突變。欒煥玲等［20］隨機(jī)調(diào)查了25例服用吉非替尼的患者(Ⅲ期患者5例，其余20例皆為Ⅳ 期，隨訪時間2009年3月～11月30日)，其中15例患者檢測出攜帶EGFR突變，12例患者中8例EGFR蛋白表達(dá)陰性，4例蛋白陽性病例(其中3例突變發(fā)生在19號外顯子)，總有效率達(dá)到80%;10例未發(fā)現(xiàn)EGFR突變的患者為2例，有效率占20%，經(jīng)比較兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.005)。東方人群的研究顯示EGFR突變是一個預(yù)測因子因?yàn)橛欣呐R床結(jié)果，而來自南美和歐洲的研究報道［3，21－29］在 EGFR 突變影響結(jié)果和給予 EGFR-TKI治療的患者臨床結(jié)果擴(kuò)增方面存在爭議。

綜上所述，NSCLC中EGFR突變可以作為EGFR-TKI治療敏感性的預(yù)測因子，可以通過檢測EGFR突變的情況來指導(dǎo)臨床用藥和針對性個體化治療。所以，為了合理有效的運(yùn)用靶向藥物，如何選擇對EGFR相關(guān)靶向藥物治療敏感的患者至關(guān)重要。

4 EGFR基因突變的檢測

研究結(jié)果證實(shí)EGFR基因突變與臨床病理特征的有一定關(guān)系，且深入進(jìn)行相關(guān)靶向治療的研究，都是以檢測EGFR基因突變?yōu)榛A(chǔ)的。目前臨床實(shí)踐中，EGFR基因突變要在各種臨床樣本中檢測，這些樣本包括切除的組織、活組織和胸腔積液中。因此，尋找一種靈敏度高、簡單易操作、安全可靠的基因突變檢測方法是非常必要的?；蛲蛔儥z測方法主要是DNA測序、探針擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)(ARMS)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)－單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(PCR-SSCP)、突變體富集PCR(mutant-enriched PCR)、毛細(xì)管電泳-激光誘導(dǎo)熒光檢測法(CE-LIF)。

DNA測序法［30］是檢測EGFR基因突變標(biāo)準(zhǔn)可靠的、應(yīng)用最多的方法。該方法首先對樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增然后對擴(kuò)增產(chǎn)品純化，最后進(jìn)行序列分析，操作過程步驟繁瑣、時間較長，且對操作技術(shù)的要求較高，重要的是由于其方法本身的靈敏度低，僅能檢測含量大于30%的突變基因。從環(huán)境經(jīng)濟(jì)方面考慮，此方法在臨床應(yīng)用中存在局限性，不適合大量臨床樣品分析。

探針擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)(amplification refractory mutation system，ARMS)又稱等位基因特異PCR，是將ARMS和Scorpions技術(shù)相結(jié)合的一種新技術(shù)。目前已有檢測EGFR突變的試劑盒，由英國的Delivering Pharmacogenomics公司推出。張靜等［13］應(yīng)用此試劑盒對EGFR的18～21外顯子進(jìn)行檢測，檢測結(jié)束后定量PCR儀以擴(kuò)增曲線的形式輸出結(jié)果，根據(jù)DxS EGFR檢測試劑盒使用說明書判讀原則進(jìn)行突變結(jié)果判讀，170例NSCLC標(biāo)本EGFR突變的總檢出率為49.4%(84/170)。Kimura 等［31－32］分別采用 Scorpions ARMS 和測序法檢測了患者血清中EGFR的兩個熱點(diǎn)突變情況，結(jié)果表明Scorpions ARMS的檢出率明顯高于測序法(分別是48%和38%)。但該方法僅為少數(shù)研究機(jī)構(gòu)應(yīng)用，尚未批準(zhǔn)進(jìn)入臨床。

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)－單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(PCR-SSCP)與直接測序法相比，該法靈敏度高，可以發(fā)現(xiàn)測序未能發(fā)現(xiàn)的基因突變，然而也有其局限性:耗時長、操作復(fù)雜，不能定量只能定性分析。

突變體富集PCR(mutant-enriched PCR)既是PCR-酶切法，與直接測序法比較，敏感性較高，因?yàn)榻?jīng)過兩次PCR擴(kuò)增，EGFR激活突變(包括外顯子19缺失和外顯子21點(diǎn)突變)的檢測率高、特異性強(qiáng)，可從103～104個野生型拷貝中檢測到一個EGFR突變基因［33］。但只能對已知的突變位點(diǎn)設(shè)計特異性引物進(jìn)行測序，因此有一定的局限性。

對上述方法進(jìn)行分析比較，發(fā)現(xiàn)DNA測序法是目前檢測基因突變的可靠標(biāo)準(zhǔn)。一項(xiàng)研究表明:通過EGFR基因拷貝數(shù)擴(kuò)增預(yù)測EGFR-TKI療效的原因在于實(shí)驗(yàn)所選擇患者中包含了大量的EGFR突變患者。EGFR突變是主要原因，而EGFR基因拷貝數(shù)擴(kuò)增是關(guān)聯(lián)因素，進(jìn)行EGFR-TKI療效預(yù)測可通過檢測EGFR突變?yōu)橹鳎?4］。因此，目前尋找一種快速準(zhǔn)確的EGFR基因突變檢測方法是亟需解決的問題。陳巧云等［35］采用 CE-RFLP方法快速、高效地完成了胃癌p53基因248位、249位密碼子突變情況的同時檢測。劉圓圓等［36］還將此方法應(yīng)用于臨床59例胃癌患者腫瘤組織H-ras基因12位密碼子點(diǎn)突變情況的檢測，獲得了較好的效果。因此，對于EGFR基因突變也可以采用高效毛細(xì)管電泳方法來檢測。EGRF基因突變的檢測對早期診斷、篩查EGFR-TKI敏感人群、預(yù)后治療、延長生存期、避免不必要的毒副作用及防止腫瘤多重耐藥性的發(fā)生等有無可替代的意義。

5 結(jié)語和展望

表皮生長因子受體(EGFR)屬于酪氨酸激酶I型受體家族成員，在大多數(shù)非小細(xì)胞癌(NSCLC)中表達(dá)上調(diào)，是治療NSCLC的一個重要靶點(diǎn)。EGFR基因突變與臨床病理特征相關(guān)，不同的人群，EGFR基因突變及突變率不同，靶向治療前針對患者的病理特征進(jìn)行分析有助于指導(dǎo)臨床醫(yī)生用藥。靶向藥物因特異性強(qiáng)、毒性低成為目前臨床靶向治療用藥的一個研究熱點(diǎn)。EGFR基因突變在NSCLC中較常見，且與EGFR的特異性分子靶向藥物的治療效果密切相關(guān)。已有研究證實(shí)EGFR基因突變檢測與NSCLC靶向治療相關(guān)，使用EGFR-TKI前應(yīng)檢測EGFR突變。所以尋找一種快速準(zhǔn)確能應(yīng)用于臨床大量樣本檢測的EGFR基因突變檢測方法是當(dāng)務(wù)之急。通過檢測相關(guān)突變基因來指導(dǎo)臨床用藥同時為不具備基因靶點(diǎn)病人節(jié)省費(fèi)用和毒副作用，減少了患者經(jīng)濟(jì)、心理負(fù)擔(dān)，將會是分子靶向治療的一個熱點(diǎn)及發(fā)展趨勢。

［1］Jemal A，Siegel R，Ward E，et al.CA:a cancer journal of clinicians［J］.Cancer Stat，2007，57(1):43－66.

［2］Jemal A，Siegel R，Ward E，et al.Cancer statistics，2006 ［J］.CA Cancer J Clin，2006，56:106－130

［3］Tokumo M，Toyooka S，Kiura K，et al.The relationship between epidermal growth factor receptor mutations and clinicopathologic features in non-small cell lung cancers［J］.Clin Cancer Res，2005，11:1167－73.

［4］Mitsudomi T，Kosaka T，Endoh H，et al.Mutation the epidermal growth factor receptor gene predict prolonged survival after gefitinib treatment in patients with non-small cell lung cancer with postoperative recurrence［J］.Clin Oncol，2005，23:2513－20.

［5］韓 雪，戴廣海.胃癌中EGFR相關(guān)研究及意義［J］.臨床腫瘤學(xué)雜志，2010，15(2):173－6.

［5］Han X，Dai G H.Research on EGFR in gastric cancer and its significance［J］.Chin Clin Oncol，2010，15(2):173－6.

［6］Cao C，Lu S，Sowa A，et al.Priming with EGFR tyrosine kinase inhibitor and EGF sensitizes ovarian cancer cells to respond to chemotherapeutical drugs［J］.Cancer Lett，2008，266(2):249－62.

［7］Sharma S V，Bell D W，Settleman J，et al.Epidermal growth factor receptor mutations in lung cancer［J］.Nat Rev Cancer，2007，7(3):169－81.

［8］Fukui T，Mitsudomi T.Mutations in the epidermal growth fact or receptor gene and effects of EGFR tyrosine kinase inhibitors on lung cancers［J］.Gen Thorae Cardiovasc Surg，2008，56(3):97－103.

［9］劉紅梅.表皮生長因子受體基因突變與晚期非小細(xì)胞肺癌的分子靶向治療［J］.南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2009，29(11):2273－5.

［9］Liu H M.Epidermal growth factor receptor gene mutations with advanced non-small cell lung cancer molecular targeted therapy［J］.J Southern Med Univ，2009，29(11):2273－5.

［10］Scag liotti G V，Selvagg I G，Novello S，et al.The biology of epidermal growth factor receptor in lung cancer［J］.Clin Cancer Res，2004，10:4227－32.

［11］Paez J G，Janne P A，Lee J C，et al.EGFR mutations in lung cancer:correlation with clinical response to gefltinib therapy［J］.Cancer，2004，304(5676):1497－500.

［12］Toyooka S，Soh J，Shigematsu H，et al.The impact and role of EGFR gene mutation non-small cell lung cancer［J］.Cancer Chemother Pharmacol，2006:58(1):25－31.

［13］張 靜，梁智勇，高 潔，等.非小細(xì)胞肺癌表皮生長因子受體基因及k-ras基因突變與臨床病理特征的關(guān)系［J］.協(xié)和醫(yī)學(xué)雜志，2010，1(1):53－9.

［13］Zhang J，Liang Z Y，Gao J，et al.Relationship between the mutations of epidermal growth factor receptor gene and k-ras Gene and the clinicopathological features of non-small cell lung cancers［J］.Med J Peking Union Med Coll Hosp，2010，1(1):53－9.

［14］Sanford M，Scott L J.Gefitinib:a review of its use in the treatment of locaHy advanced/metastatic non-small cell lung cancer［J］.Drugs，2009，69:2303－28.

［15］Sharna S V，Bell D W，Settleman J，et al.Epidermal growth factor receptor mutations in lung cancer［J］.Nat Rev Cancer，2007，7:169－81.

［16］Irmer D，F(xiàn)unk J O，Blaukat A .EGFR kinase domain mutationsfuctional impact and releva16-18 Human Chromosomes for lung cancer therapy［J］.Oncogene，2007，26:5693－701.

［17］González Manzano R，Martínez Navarro E，Eugenieva E，et al.A novel EGFR nonsense mutation in a non-small-cell lung cancer(NSCLC)patient who did not derive any clinical benefit with combination chemotherapy and erlotinib［J］.Clin Transl Oncol，2008，10:442－4.

［18］Lynch T J，Bell D W，Sordella R，et al.Activating mutations in the epidermal growth factor receptor under lying responsiveness of non-small-cell lung cancer to gefitinib［J］.NEJM，2004，350(21):2129－39.

［19］Gazdar A F.Activating and resistance mutations of EGFR18 Chang’non-small-cell lung cancer:role in clinical response to EGFR tyrosine kinase inhibitors［J］.Oncogene，2009，28:S24－S31.

［20］欒煥玲，孫蕾娜，董 娜，等.非小細(xì)胞肺癌中EGFR和K-ras基因突變與蛋白表達(dá)相關(guān)的研究［J］.中國癌癥雜志，2010，20(7):486－91.

［20］Luan H L，Sun L N，Dong N，et al.Study of the correlation of EGFR and K-ras gene mutations with its protein expression in nonsmall cell lung cancer［J］.China Oncol，2010，20(7):486－91.

［21］Bell D W，Lynch T J，Haserlat S M，et al.Epidermal growth factor receptor mutations and gene amplification in non-small-cell lung cancer:molecular analysis of the IDEAL/INTACT gefitinib trials［J］.Clin Oncol，2005，23:8081－92.

［22］Cappuzzo F，Hirsch F R，Rossi E，et al.Epidermal growth factor receptor gene and proteinand gefiinib sensitivity in non-small-cell lung cancer［J］.Natl Cancer Inst，2005，97:643－55.

［23］Chou T Y，Chiu C H，Li L H，et al.Mutation in the tyrosine kinase domain of epidermal growth factor receptor is a predictive and prognostic factor for gefitinib treatment in patients with non-small cell lung cancer［J］.Clin Cancer Res，2005，11:3750－7.

［24］Han S W，Kim T Y，Hwang P G，et al.Predictive and prognostic impact of epidermal growth factor receptor mutation in non-small cell lung cancer patients treated with gefitinib［J］.Clin Oncol，2005，23:2493－501.

［25］Mitsudomi T，Kosaka T，Endoh H，et al.Mutations of the epidermal growth factor receptor gene predict prolonged survival after gefitinib treatment in patients with non-small-cell lung cancer with postoperative recurrence［J］.Clin Oncol，2005，23:2513－20.

［26］Riely G J，Pao W，Pham D，et al.Clinical course of patients with non-small cell lung cancer and epidermal growth factor receptor exon 19 and exon 21 mutation streated with gefitinib or erlotinib［J］.Clin Cancer Res，2006，12(31):839.

［27］Shih J Y，Gow C H，Yang P C.EGFR mutation conferring primary resistance to gefitinib in non-small-cell lung cancer［N］.Engl J Med，2005，353:207－8.

［28］Takano T，Ohe Y，Sakamoto H，et al.Epidermal growth factor receptor gene mutations and increased copy numbers predict gefitinib sensitivity in patients with recurrent non-small-cell lung cancer［J］.Clin Oncol，2005，23:6829－37.

［29］Tsao M S，Sakurada A，Cutz J C，et al.Erlotinib in lung cancermolecular and clinical predictors of outcome［N］.Engl J Med，2005，353:133－44.

［30］Fan X，F(xiàn)urnari F B，Cavenee W K，et al.Non-isotop silver-stained SSCP is more sensitive than automated direct sequencing for the detection of PTEN mutations in a mixture of DNA extracted from normal and tumor cells［J］.Int J Oncol，2001，18(5):1023－6.

［31］Kimura H，Kasahara K，Kawaishi M，et al.Detection of epidermal growth factor receptor mutations in serum as apredictor of the response to gefitinib in patients with non-small cell lung cancer［J］.Cancer Res，2006，12(13):3915－21.

［32］Kimura H，Suminoe M，Kasahara K，et al.Evaluation of epidermal growth factor receptor mutation status in serum DNA as a predictor of response to gefitinib(IRESSA)［J］.Br J Cancer，2007，97(6):778－84.

［33］Asano H，Toyooka S，Tokumo M，et al.Detection of EGFR gene mutation in lung cancer by mutant-enriched polymer as chain reaction assay［J］.Clin Cancer Res，2006，12(1):43－8.

［34］郭愛林.IPASS臨床研究公布不同EGFR分子標(biāo)記物改變對臨床療效的影響［J］.循證醫(yī)學(xué)，2009，9(4):200.

［34］Guo A L.IPASS clinical study published the different EGFR molecular markers change clinical efficacy［J］.J Evidence-Based Med，2009，9(4):200.

［35］陳巧云，王 榮，賈正平 等.毛細(xì)管電泳-限制性片段長度多態(tài)性快速檢測胃癌組織中p53基因點(diǎn)突變的方法［J］.分析化學(xué)，2007，9:1305－8.

［35］Chen Q Y，Wang R，Jia Z P，et al.Fast detection of p53 gene mutation of gastric cancer by restriction fragment length polymorphism with capillary electrophoresis［J］.Chin J Analyt Chem，2007，35(9):1305－8.

［36］劉圓圓，王 榮，賈正平，等.毛細(xì)管電泳-限制性片段長度多態(tài)性分析檢測胃癌H-ras基因點(diǎn)突變［J］.化學(xué)學(xué)報，2009，67(4):323－8.

［36］Liu Y Y，Wang R，Jia Z P，et al.H-ras gene mutation detection of gastric cancer by restriction fragment length polymorphism with capillary electrophoresis［J］.Acta Chim Sin，2009，67(4):323－8.