范永熙， 萬芙榮

(1.高密市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東 高密261500;2.山東省千佛山醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東濟(jì)南250001)

慢性肝病的重要病理特征之一是肝纖維化，也是進(jìn)一步向肝硬化發(fā)展的主要中間環(huán)節(jié)。研究表明，基質(zhì)金屬蛋白酶-13(MMP-13)表達(dá)增強(qiáng)，可能是由于慢性炎癥肝組織中活化的肝星狀細(xì)胞過度分泌，而在肝癌組織中則主要由腫瘤細(xì)胞、間質(zhì)成纖維細(xì)胞等過度分泌而致。MMP-13以酶原形式分泌，被激活后形成Ⅳ型膠原酶，降解、破壞肝癌周圍細(xì)胞外基質(zhì)中的Ⅳ、Ⅴ型膠原及明膠，使肝癌細(xì)胞沿缺失基膜向外浸潤(rùn)，導(dǎo)致侵襲與轉(zhuǎn)移發(fā)生［1］。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)則是細(xì)胞生長(zhǎng)和分泌的多功能調(diào)節(jié)因子，參與促進(jìn)細(xì)胞增殖中信號(hào)的傳遞，在肝癌組織中能誘導(dǎo)肝細(xì)胞發(fā)生凋亡，引起癌細(xì)胞惡性增殖，促使肝癌發(fā)展、播散。我們分析了慢性肝病(慢性肝炎、肝硬化、肝癌)患者血清MMP-13及TGF-β1水平，探討其在肝癌發(fā)生、發(fā)展中的臨床應(yīng)用價(jià)值。

材料和方法

一、對(duì)象

選取高密市人民醫(yī)院2009年1月至2012年12月門診及住院的慢性肝炎患者50例、肝硬化患者50例、肝癌患者60例。另選擇健康體檢者50名作為正常對(duì)照組，年齡35～65歲。慢性肝炎、肝硬化、肝癌患者分別按照全國(guó)肝炎和肝癌防治協(xié)作組制定的標(biāo)準(zhǔn)診斷。

二、方法

1.MMP-13測(cè)定 采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)，試劑盒由武漢博士德生物工程有限公司提供。按試劑盒說明書操作。

2.TGF-β1測(cè)定 采用雙抗體夾心 ELISA法，試劑盒由深圳晶美生物科技公司提供。按試劑盒說明書操作。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié) 果

肝癌組與肝硬化組之間MMP-13水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但明顯高于慢性肝炎組和正常對(duì)照組(P＜0.01)。肝癌組TGF-β1水平明顯高于肝硬化組、慢性肝炎組及正常對(duì)照組(P＜0.01)，而慢性肝炎組、肝硬化組和正常對(duì)照組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表1。

表1 慢性肝病各組及正常對(duì)照組血清MMP-13、TGF-β1水平比較(±s)

表1 慢性肝病各組及正常對(duì)照組血清MMP-13、TGF-β1水平比較(±s)

注:與正常對(duì)照組比較，*P＜0.01;與慢性肝炎組比較，#P＜0.01;與肝硬化組比較，ΔP＜0.01

肝癌組 60 329.02±70.04*# 0.96±0.12正常對(duì)照組 50 279.03±32.80 2.22±1.08*Δ

討 論

在肝纖維化形成、原發(fā)性肝癌侵襲與轉(zhuǎn)移過程中，MMP-13起著重要的作用。血清MMP-13水平與慢性肝炎、肝硬化分級(jí)呈正相關(guān)，與肝癌組織分化程度、分期密切相關(guān)［2］。慢性肝損傷時(shí)，以膠原為主的細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)合成增多，降解相對(duì)減少，沉積在肝內(nèi)引起肝纖維化，導(dǎo)致肝小葉改建、假小葉和結(jié)節(jié)形成，產(chǎn)生肝硬化。絕大多數(shù)肝癌的發(fā)生均伴有肝硬化的病理基礎(chǔ)，其中ECM過度沉積和異常分布，與其合成代謝及降解代謝失衡有關(guān)。MMP-13基因的表達(dá)與合成受諸多因素調(diào)控。MMP-13在肝纖維化及肝硬化的作用是特異性分解肝臟Ⅰ、Ⅲ型膠原，對(duì)肝癌的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移起到作用。任雪霞等［3］應(yīng)用免疫組化和原位雜交方法研究了MMP-13蛋白及MMP-13 mRNA在人肝細(xì)胞肝癌及癌旁組織中的表達(dá)，結(jié)果顯示MMP-13蛋白及MMP-13 mRNA水平在肝癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織，提示 MMP-13在腫瘤的和生長(zhǎng)過程中發(fā)揮一定作用，可能與肝癌的侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)。

TGF-β1主要參與正常細(xì)胞及轉(zhuǎn)化細(xì)胞的生長(zhǎng)與分化，調(diào)控細(xì)胞增殖。TGF-β1在肝臟中產(chǎn)生，在肝癌組織中處于過度表達(dá)狀態(tài)，使正常肝細(xì)胞發(fā)生凋亡，引起肝癌細(xì)胞惡性增殖，同時(shí)還引起機(jī)體免疫功能下降，促進(jìn)肝癌的發(fā)展與播散。血清TGF-β1水平增高的機(jī)制是肝癌發(fā)生發(fā)展過程中肝癌細(xì)胞過度表達(dá) TGF-β1 m RNA。Li等［4］研究表明腫瘤組織的微環(huán)境是通過TGF-β/Smad通路影響肝細(xì)胞癌的進(jìn)展和侵襲。本研究結(jié)果也表明，肝癌組MMP-13水平明顯高于慢性肝炎組及正常對(duì)照組，但與肝硬化組無明顯差異，提示MMP-13與肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移有關(guān)。肝癌患者通常伴有肝硬化，因此肝癌患者M(jìn)MP-13水平的變化能反映肝纖維化逐漸發(fā)展為肝癌的過程。本研究結(jié)果顯示肝癌患者TGF-β1水平明顯高于肝硬化及慢性肝炎患者，提示TGF-β1升高與肝癌有一定關(guān)系。因此，動(dòng)態(tài)及聯(lián)合檢測(cè)慢性肝病患者血清中MMP-13及TGF-β1水平，有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值，可能有助于肝癌的診斷及病情監(jiān)測(cè)。

［1］邱歷偉，姚登福，黃 峰，等.慢性肝病患者轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1、腫瘤壞死因子-α和基質(zhì)金屬蛋白酶-13表達(dá)與臨床價(jià)值［J］.南通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2005，25(4):244-246.

［2］朱建云，張建忠，黃書明，等.MMP-13和TIMP-1在良惡性肝病患者血清、肝組織中的表達(dá)及臨床意義［J］.臨床檢驗(yàn)雜志，2012，30(6):433-435.

［3］任雪霞，徐正府，黃介飛，等.MMP-13及 MMP-13 mRNA在人肝細(xì)胞肝癌及癌旁組織中的表達(dá)［J］.江蘇醫(yī)藥，2009，35(1):44-46.

［4］Li G，Qin L，Ye Q，etal.Organ microenvironment affects growth and metastasis of hepatocellular carcinoma via the TGF-β /Smad pathway in mice［J］.Exp Ther Med，2013，5(1):133-137.