★ 梁芬 劉旭海 王燕霞 李露爽 (.江西中醫(yī)學(xué)院 南昌330004;.江中藥業(yè)股份有限公司 南昌330077)

苯磺酸氨氯地平(amLodipine besylate)為第三代雙氫吡啶類鈣拮抗藥，具有服藥量低、藥效維持時(shí)間長、不良反應(yīng)少、保護(hù)靶器官等優(yōu)點(diǎn)，是理想的長效降壓藥，用于治療各種高血壓和穩(wěn)定型心絞痛。苯磺酸氨氯地平片、馬來酸氨氯地平片、苯磺酸左旋氨氯地平及片劑等，國家藥品標(biāo)準(zhǔn)均采用反相高效液相色譜法［1－4］測(cè)定含量且均以O(shè)DS為色譜柱，流動(dòng)相均為甲醇與0.03mol/L磷酸二氫鉀溶液按相同比例配成。其分散片劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)，國內(nèi)市場(chǎng)并無已知雜質(zhì)對(duì)照品，故給用已知雜質(zhì)來評(píng)價(jià)有關(guān)物質(zhì)檢查帶來一定困難。本文考查不通實(shí)驗(yàn)條件苯磺酸氨氯地平分散片有關(guān)物質(zhì)方法建立，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，利用主成份不加校正因子測(cè)定其有關(guān)物質(zhì)，該方法結(jié)果準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，靈敏度高，可為苯磺酸氨氯地平有關(guān)物質(zhì)檢查提供一定依據(jù)。

1 儀器及試藥

Agilent1200高效液相色譜儀(DAD檢測(cè)器);色譜柱:Diamonsil C18(250mm ×4.6mm，5μm);苯磺酸氨氯地平對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所提供);苯磺酸氨氯地平分散片5 mg/片(南通久和藥業(yè)有限公司);自動(dòng)三重蒸餾水器(上海亞榮生化儀器有限公司);KQ－500B型超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器廠出品);乙腈、甲醇色譜純(上海星可生化有限公司);磷酸二氫鉀分析純(天津市永達(dá)化學(xué)試劑開發(fā)中心)。

2 方法及結(jié)果

2.1 對(duì)照品及供試品溶液制備

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 取苯磺酸氨氯地平對(duì)照品17mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL，置25mL量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，即得。

2.1.2 供試品溶液的制備 取苯磺酸氨氯地平分散片10片，研細(xì)，精密稱取適量(相當(dāng)于氨氯地平5mg)，置200mL量瓶中，加水20mL使溶解，加流動(dòng)相約160mL，超聲處理30分鐘，取出，放冷至室溫，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液備用，即得。

2.2 色譜條件

色譜柱:Diamonsil C18(250mm ×4.6mm，5μm);以0.03mol/mL磷酸酸二氫鉀溶液－乙腈－甲醇(25∶45∶30)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長237 nm，流速1.0 mL/分，柱溫 30℃;進(jìn)樣量 20μl。

2.3 方法專屬性

取苯磺酸氨氯地平對(duì)照品溶液(34.1 μg/mL)100 mL分別置25 mL量瓶中，進(jìn)行如下處理:(1)酸破壞試驗(yàn):加入5mL 1mol/L鹽酸溶液超聲10分鐘;(2)堿破壞試驗(yàn):加入1mL 1mol/L氫氧化鈉溶液超聲10分鐘;(3)氧化破壞試驗(yàn):加入1mL 30%過氧化氫溶液繼續(xù)超聲10分鐘;(4)熱破壞試驗(yàn):于60℃烘箱中放置3小時(shí);(5)光破壞:于Lux5000的光照箱中放置12小時(shí)，然后用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取濾液按照有關(guān)物質(zhì)測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定，記錄色譜圖，結(jié)果表明，苯磺酸氨氯地平與各降解產(chǎn)物均能有效分離。

2.4 精密度試驗(yàn)

取上述對(duì)照品溶液及供試品溶液，在同一天分別重復(fù)進(jìn)樣8次，測(cè)定其峰面積，計(jì)算其RSD值分別為 1.3%和 1.5%。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別取對(duì)照品溶液及供試品溶液，置室溫下，分別于 0，2，4，8，12，24 小時(shí)進(jìn)樣，結(jié)果主峰面積變化不大，RSD值分別為1.5%和1.8%，表明對(duì)照品溶液及供試品溶液在室溫條件下放置24小時(shí)是穩(wěn)定的。

2.6 線性范圍

取苯磺酸氨氯地平對(duì)照品適量，精密稱定后加甲醇制成 3.13，6.25，12.5，25.0，50.0，100.0μg/mL濃度的溶液，分別精密量取20μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。用峰面積(Y)對(duì)濃度(X)作回歸直線，得方程:Y=27.599 68X+8.084 55，r=0.999 9，因此，濃度在 3.13－100μg/mL 之間有良好的線性關(guān)系。

2.7 檢測(cè)限

取苯磺酸氨氯地平對(duì)照品溶液(34.1μg/mL)用流動(dòng)相逐步稀釋至樣品溶液中主峰的響應(yīng)值約為噪音水平的3倍，記錄色譜圖，得出檢測(cè)限為1.8ng。

2.8 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定

取三批苯磺酸氨氯地平分散片各10片，分別置100mL容量瓶中加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，作為供試品溶液;精密量取供試品溶液(34.1μg/mL)1mL，置25mL容量瓶中加流動(dòng)相稀釋至刻度，作為對(duì)照溶液。再精密量取供試品溶液與對(duì)照溶液各20μL，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高為滿量程的20%－25%。記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間3倍。供試品溶液中除溶劑苯磺酸和氨氯地平峰外如顯雜質(zhì)峰，按不加較正因子的主成分自身對(duì)照法以峰面積計(jì)算有關(guān)物質(zhì)的量，結(jié)果見表2。

表2 三批樣品的有關(guān)物質(zhì)結(jié)果(n=3)

3 討論

本文在參考2010版《中國藥典》及《化學(xué)藥物雜質(zhì)研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》苯磺酸氨氯地平片有關(guān)物質(zhì)測(cè)定，三批分散片有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果表明其有關(guān)物質(zhì)總量均低于0.5%，符合藥典規(guī)定

本文考查了不同實(shí)驗(yàn)條件苯磺酸氨氯地平有關(guān)物質(zhì)的色譜行為，并用自身對(duì)照法進(jìn)行比較，雜質(zhì)與主峰均能分開，試驗(yàn)結(jié)果表明改方法專屬性強(qiáng)、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確。