肖 慧, 李 麗, 譚 娟,2,3, 皮建輝,2,3＊

(懷化學(xué)院1.生命科學(xué)系; 2.民族藥用植物資源研究與利用湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;3.湘西藥用植物與民族植物學(xué)湖南省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 湖南 懷化 418008;4.湖南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院, 湖南長(zhǎng)沙 410081)

金櫻子多糖對(duì)免疫抑制小鼠肝功能及血脂代謝的調(diào)節(jié)作用

肖 慧1,4, 李 麗1, 譚 娟1,2,3, 皮建輝1,2,3＊

(懷化學(xué)院1.生命科學(xué)系; 2.民族藥用植物資源研究與利用湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;3.湘西藥用植物與民族植物學(xué)湖南省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 湖南 懷化 418008;4.湖南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院, 湖南長(zhǎng)沙 410081)

為探討金櫻子多糖對(duì)免疫抑制小鼠肝功能及血脂代謝的調(diào)節(jié)作用,取50只昆明小鼠隨機(jī)平均分為正常對(duì)照組、模型組、RLP低劑量組、RLP中劑量組、RLP高劑量組.低、中、高劑量組分別按100 mg kg·d、200 mg kg·d、400mg kg·d連續(xù)灌胃30 d;正常對(duì)照組和模型組灌胃生理鹽水.于試驗(yàn)前一周在繼續(xù)灌胃的基礎(chǔ)上,除正常對(duì)照組外,分別于第1、3、5天給小鼠按25 mg kg體重腹腔注射地塞米松(Dex)建立免疫抑制動(dòng)物模型.摘小鼠眼球取血,用試劑盒測(cè)定小鼠血清的總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇 (HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT).結(jié)果表明,金櫻子多糖能顯著降低免疫抑制小鼠血清中TC、LDL-C、AST、ALT含量,對(duì)HDL-C和TG有一定的調(diào)節(jié)作用.因此,金櫻子多糖對(duì)免疫抑制小鼠肝功能及血脂代謝具有一定的調(diào)節(jié)作用.

金櫻子多糖; 血脂代謝; 轉(zhuǎn)氨酶; 昆明小鼠

金櫻子 (Rosa laevigata Mickx)是薔薇科薔薇屬常綠蔓性灌木野生果,其主要活性成分是多糖、黃酮類物質(zhì)、三萜類及其衍生物等[1].其多糖具有抗氧化活性[2],能改善藥物性肝損傷小鼠的血脂代謝[3],對(duì)藥物性肝損傷小鼠具有良好的保護(hù)作用[4].肝臟是免疫反應(yīng)的重要靶器官及調(diào)節(jié)器官,含有各種免疫細(xì)胞及免疫因子,如各種淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、K細(xì)胞、NK細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞等,這些細(xì)胞在各種因素作用下,產(chǎn)生免疫因子,共同構(gòu)成復(fù)雜的免疫系統(tǒng)成分[5].當(dāng)哺乳動(dòng)物的免疫功能受到抑制時(shí),其肝臟的免疫作用下降同時(shí),其脂肪代謝、膽汁的分泌、高密度脂蛋白 (HDL)的合成等功能也會(huì)相繼受到影響.為探討金櫻子多糖 (Rosa laevigata Michx polysaccharides,RLP)的免疫調(diào)節(jié)活性,進(jìn)一步開(kāi)發(fā)與利用RLP,我們分析了RLP對(duì)免疫抑制小鼠肝功能與血脂代謝的調(diào)節(jié)作用.

1 材料與方法

1.1 材料、儀器與試劑

1.1.1 研究材料

金櫻子采集于湖南省懷化市會(huì)同縣山地,經(jīng)懷化學(xué)院生命科學(xué)系李愛(ài)民博士鑒定為薔薇科薔薇屬常綠蔓性灌木金櫻子 (Rosa laevigata Mickx)野生果.金櫻子多糖由本實(shí)驗(yàn)室提取,按葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:A=9.8857[C]+0.0025(R2=0.9996),確定提取的金櫻子多糖純度為83.7%.試驗(yàn)動(dòng)物采用清潔級(jí)KM小鼠,體重22-26 g,購(gòu)自中南大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,許可證號(hào):SCXK(湘)2006-0002.

1.1.2 主要儀器

DU800紫外 可見(jiàn)分光光度計(jì) (美國(guó)Beckman公司)、DTC-21旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 (美國(guó))、TD4G臺(tái)式過(guò)濾離心機(jī) (長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司)、FD-1C冷凍真空干燥機(jī) (北京德天佑科技發(fā)展有限公司)、HH-601超級(jí)恒溫水浴鍋 (金壇市國(guó)旺實(shí)驗(yàn)儀器廠)、LRH-250A生化培養(yǎng)箱 (廣東省醫(yī)療器械廠)等.

1.1.3 試劑

地塞米松磷酸鈉注射液 (Dex)(鄭州卓峰制藥有限公司,編號(hào):1010721);肝素鈉 (購(gòu)于懷化解放軍五三五醫(yī)院);高密度脂蛋白膽固醇 (HDL-C)試劑盒(北京北化康泰臨床試劑有限公司,編號(hào):006328);低密度脂蛋白膽固醇 (LDL-C)試劑盒 (北京北化康泰臨床試劑有限公司,編號(hào):006340);總膽固醇(TC)試劑盒 (北京北化康泰臨床試劑有限公司,編號(hào):006301);甘油三酯 (TG)試劑盒 (北京北化康泰臨床試劑有限公司,編號(hào):006304);谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST GOT)測(cè)定試劑盒 (賴氏法)(南京建成生物工程研究所);谷丙轉(zhuǎn)氨酶 (ALT GPT)測(cè)定試劑盒(賴氏法)(南京建成生物工程研究所).其他化學(xué)藥品與試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純.

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物試驗(yàn)

將50只清潔級(jí)KM小鼠隨機(jī)平均分為正常對(duì)照組、模型組、RLP低劑量組、RLP中劑量組、RLP高劑量組.除正常對(duì)照組和模型組小鼠灌胃0.9%生理鹽水外,RLP低、中、高劑量組小鼠于每天晚上19:00-21:00之間分別灌胃100 mg kg、200 mg kg、400 mg kg體重的RLP,連續(xù)灌胃30天.于試驗(yàn)前一周在繼續(xù)灌胃的基礎(chǔ)上,除正常對(duì)照組外,分別于第1、3、5天給小鼠按25 mg kg體重腹腔注射地塞米松 (Dex)建立免疫抑制動(dòng)物模型.

1.2.2 血清生理生化指標(biāo)的測(cè)定

試驗(yàn)前小鼠禁食不禁水12h,摘眼球取血于經(jīng)肝素處理后的離心管中,4℃條件下3 000 rpm離心10 min,收集血清保存于-20℃冰箱中備用.嚴(yán)格按試劑盒規(guī)定方法測(cè)定TC、TG、HDL-C、LDL-C、AST和ALT.

1.2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 ( x±s)表示,采用Excel統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析.組間顯著性比較采用t檢驗(yàn),P<0.05為顯著性標(biāo)準(zhǔn),P<0.01為極顯著性標(biāo)準(zhǔn).

2 結(jié)果

2.1 金櫻子多糖對(duì)免疫抑制小鼠血清TC和TG的影響

由表1可知,模型組小鼠血清TC、TG濃度均極顯著高于正常對(duì)照組(p<0.01),說(shuō)明模型組小鼠存在TC、TG代謝異常.經(jīng)RLP干預(yù)后,各劑量組小鼠血清中TC濃度均低于模型組,且中、高劑量組有極顯著差異 (p<0.01);各劑量組小鼠血清中TG濃度均低于模型組,但僅高劑量組有顯著差異 (p<0.05).

表1 金櫻子多糖對(duì)免疫抑制小鼠血清TC和TG的影響

2.2 金櫻子多糖對(duì)免疫抑制小鼠血清HDL-C和LDL-C的影響

表2顯示,小鼠模型組與正常對(duì)照組的血清HDL-C和LDL-C濃度均存在極顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 (p<0.01),說(shuō)明模型組小鼠存在脂密度蛋白代謝異常.各RLP干預(yù)組實(shí)驗(yàn)小鼠的血清中HDL-C濃度均高于模型組,但僅中劑量組有顯著差異 (p<0.05),不過(guò)低劑量組還是明顯低于正常組 (p<0.01);各劑量組血清LDL-C濃度均顯著低于模型組 (p<0.05或p<0.01),不過(guò)低劑量組還是明顯高于正常組 (p<0.05).

表2 金櫻子多糖對(duì)免疫抑制小鼠血清HDL-C和LDL-C的影響

2.3 金櫻子多糖對(duì)免疫抑制小鼠血清AST和ALT的影響

表3顯示,模型組小鼠血清AST和ALT含量均極顯著高于正常對(duì)照組 (p<0.01),表明短期內(nèi)高劑量Dex對(duì)小鼠肝功能有一定的損害作用.RLP各劑量組小鼠血清中AST和ALT濃度均低于模型組,且中、高劑量組均有極顯著差異 (p<0.01).

表3 金櫻子多糖對(duì)免疫抑制小鼠血清AST和ALT的影響

3 討論

地塞米松是一種糖皮質(zhì)激素的免疫抑制劑,正常生理劑量的地塞米松對(duì)肝臟沒(méi)有損傷,但高劑量或長(zhǎng)期使用會(huì)造成明顯的肝損傷.呂嶸等[6]發(fā)現(xiàn),2倍生理劑量的地塞米松能使大耳白兔肝臟組織出現(xiàn)不同程度的肝細(xì)胞空泡樣變性和紅細(xì)胞大量沉積,4倍生理劑量的地塞米松能使肝臟組織發(fā)生嚴(yán)重病理變化.肝臟不但是消化器官 (消化腺),而且還具有內(nèi)分泌作用與免疫功能,具有多種免疫細(xì)胞及免疫因子、含有復(fù)雜的免疫系統(tǒng)成分[5],高劑量的地塞米松損傷肝組織的同時(shí),也降低了肝臟的內(nèi)分泌與免疫作用.

肝臟具有脂肪代謝與合成HDL的功能.血脂異常最常見(jiàn)的表現(xiàn)是TC、TG和LDL-C水平上升,而HDL-C下降.當(dāng)LDL-C的濃度升高時(shí),機(jī)體會(huì)產(chǎn)生過(guò)多的過(guò)氧化物質(zhì).有實(shí)驗(yàn)證明,脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)能修飾LDL-C變性生成MDA-LDL-C,這種變性的LDL-C不能被正常的LDL-C受體識(shí)別,造成膽固醇在本內(nèi)大量堆積.而HDL是血液中密度最高、顆粒最小的一種脂蛋白,能穿透血管內(nèi)膜將沉積在LDL里面的膽固醇清除并攜帶出血管壁至肝臟進(jìn)行分解排泄[7].本實(shí)驗(yàn)表明,經(jīng)Dex處理后的模型組小鼠與正常對(duì)照組相比,血清TC、TG、LDL-C都有明顯升高,HDL-C也有明顯的降低,說(shuō)明Dex明顯影響了肝臟的功能.由于Dex的作用,一方面肝組織受損傷,脂肪代謝與HDL合成功能下降,使血脂升高、HDL水平降低;另方面,肝臟免疫與內(nèi)分泌功能下降,體內(nèi)胰島素濃度增加,使肝臟合成的膽固醇也增多,同時(shí)雌二醇水平降低,使LDL受體活性及數(shù)目減少,不能及時(shí)清除過(guò)多的LDL,使膽固醇大量蓄積在體內(nèi)[8].但經(jīng)RLP干預(yù)后,血清中TC、TG、LDL-C都有不同程度地降低,而HDL-C有一定地升高,表明RLP對(duì)Dex所致的免疫抑制小鼠血脂代謝有一定的調(diào)節(jié)作用.

高劑量的Dex所致小鼠肝細(xì)胞損傷,使生物膜脂質(zhì)過(guò)氧化加強(qiáng),肝細(xì)胞膜甚至肝細(xì)胞線粒體膜通透性升高,使細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶釋放到血清中,導(dǎo)致血清中AST和ALT的酶活力上升[9].經(jīng)RLP不同劑量干預(yù)后,中、高劑量組血清AST和ALT濃度顯著下降,說(shuō)明RLP對(duì)Dex所致免疫抑制小鼠肝功能有一定的保護(hù)作用.

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[2]趙云濤,國(guó)興明,李付振.金櫻子多糖的抗氧化作用[J].生物學(xué)雜志,2003,20(2):23-24.

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[4]皮朝瓊,蔡珊蘭,真義才,等.金櫻子多糖對(duì)小鼠急性藥物肝損傷的保護(hù)作用[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào),2012,28(35):55-58.

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Effects of Rosa laevigata Michx polysaccharides on Liver Function and Lipid Metabolism in Immunosuppressed Mice

XIAO Hui1,4, LI Li1, TAN Juan1,2,3, PI Jian-hui1,2,3＊
(1.Department of Life Science;2.Laboratory of Hunan Province forStudy and Utilization of Ethnic Medicinal Plant Resources;3.Laboratory of Hunan Higher Education for Hunan-western Medicinal Plant and Ethnobotany,Huaihua University,Huaihua,Hunan418008;4.School of Life Science,Hunan nomalUniversity,Changsha,Hunan410081)

To study modulating effects of Rosa laevigata Michx polysaccharides on liver function and lipid metabolism in immunosuppressed mice,50 KM mice were randomly divided into normal group,model group,low dose group,middle dose group and high dose group,respectively.And low dose group,middle dose group and high dose group were given Rosa laevigata Michx polysaccharides with 100 mg kg,200 mg kg and 400 mg kg every day,respectively,while that of normal group and model group were insteaded of NS.After continuously giving drug 30 days,other groups were injected with Dex(25 mg kg)3 times by intraperitoneal injection on the first,the second and the third day,respectively,but the normal control group were instead of saline.And after giving Rosa laevigata Michx polysaccharides 1 week simultaneously,TC,TG,HDL-C,LDL-C,AST and ALT of serum in mice were tested,respectively.The results showed,Rosa laevigata Michx polysaccharides can significantly reduce the content of TC,LDL-C,AST and ALT,and regulate the content of TG and HDL-C in serum.

Rosa laevigata Michx polysaccharides; lipid metabolism; Transaminase; KM mice

R965

A

1671-9743(2013)11-0006-03

2013-08-15

懷化市重大科技攻關(guān)項(xiàng)目 (HHKJ200911);民族藥用植物資源研究與利用湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室委托項(xiàng)目(HHUW2010-71).

肖 慧(1991-),女,湖南懷化人,懷化學(xué)院生命科學(xué)系2012屆畢業(yè)生,湖南師范大學(xué)2012級(jí)碩士研究生.

＊通訊作者:皮建輝(1969-),男,湖南益陽(yáng)人,懷化學(xué)院教授,主要研究藥用植物與開(kāi)發(fā).