壽林飛，張文童，虞 淼，梁赤周

(1.浙江省農(nóng)藥檢定管理所，浙江 杭州 310021;2.南通市白蟻防治所，江蘇 南通 226001)

阿維菌素是一類具有殺蟲、殺螨、殺線蟲活性的十六元大環(huán)內(nèi)酯化合物，甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽(簡稱甲維鹽)是以阿維菌素為原料經(jīng)過化學結構修飾得到的一種高效生物殺蟲劑［1］。阿維菌素和甲維鹽屬于高效廣譜殺蟲劑，已經(jīng)廣泛應用于蔬菜、瓜果、水稻、棉花、油菜、中藥材等各種農(nóng)作物中。

食用植物油是生活必需品，常見的食用油多為植物油脂，多從油菜等油料作物提取壓榨獲得，包括大豆油、花生油、菜籽油、芝麻油、棕櫚油、橄欖油、芥花籽油和葵花籽油等［2］。隨著人們消費水平的升高，對食品安全問題的要求也越來越高，近年來，食品安全事故頻出。2010年海南爆出轟動全國的“毒豇豆”事件，2011年青島連現(xiàn)三起“韭菜中毒”事件，及至今年山東濰坊農(nóng)戶使用劇毒農(nóng)藥“神農(nóng)丹”進行生姜種植，加上近年來一直熱議不斷的“地溝油”事件，這些問題引發(fā)了社會廣泛關注，將消費者對食品安全的質疑推上了高潮。農(nóng)藥殘留問題也不僅局限在蔬菜水果上，越來越多的消費者將目光集中在了油料作物及制品上。目前我國植物油中農(nóng)藥殘留檢測、指標的設置和檢測技術與發(fā)達國家相比差距很大［3］，對于植物油中農(nóng)藥殘留的檢測研究較少。

阿維菌素類藥物多采用以衍生化為基礎的熒光［4-6］或紫外［7-8］高效液相色譜方法檢測，但其前處理較復雜，檢測的特異性和靈敏度也不強，也有采用液相色譜-串聯(lián)質譜檢測阿維菌素和甲維鹽，多集中在蔬菜［9-10］、水果［11］、稻米［12］、茶葉［13］等基質中的殘留檢測，尚未見采用液相色譜-串聯(lián)質譜檢測植物油中阿維菌素和甲維鹽殘留的相關報道。本研究采用氨基固相萃取柱(NH2)凈化液相色譜-串聯(lián)質譜檢測植物油中阿維菌素和甲維鹽殘留，方法前處理簡單，檢出限低，易于操作。

1 材料與方法

1.1 儀器、試劑和材料

液相色譜-串聯(lián)質譜:TSQ Quantum 配Survey液相操作系統(tǒng) (美國Thermo Fisher Scientific 公司);GPC 凝膠色譜凈化裝置 (德國LCTech 公司);自動濃縮儀(Büchi R205 型，瑞士步琪有限公司);超聲波清洗器(KQ-50 型，昆山市超聲儀器公司);旋渦混合器(QT-2 型，上海琪特分析儀器有限公司);乙腈和甲醇(色譜純，美國Merck公司);試驗用水為去離子水;Envi-NH2固相萃取柱(500 mg，3 mL，美國Supelco 公司);有機濾膜，0.45 μm;阿維菌素(純度≥99%)和甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽(純度≥99.5%)標準品購自德國Dr.Ehrenstorfer GmbH 公司。

標準儲備液:分別準確稱取標準品0.010 0 g，用甲醇溶解定容至50 mL (200 mg·L-1)，-18℃保存，試驗中按需稀釋。

1.2 試驗方法

準確稱取2 g (精確到0.01 g)植物油樣品，置于10 mL 刻度試管中，用8 mL 二氯甲烷超聲溶解，渦旋3 min，待凈化。氨基柱分別用甲醇+二氯甲烷(5 mL+95 mL)5 mL 和二氯甲烷5 mL 預淋，待預淋液到達柱吸附層表面時，加入凈化液，棄去，用甲醇+二氯甲烷(5 mL+95 mL)5 mL洗脫至5 mL 刻度試管，擠干，氮氣緩慢吹干，加入甲醇1 mL，超聲溶解，加入甲醇定容至2 mL，過0.22 μm 有機濾膜，液相色譜-串聯(lián)質譜法測定。

1.3 色譜質譜條件

色譜柱:Phenomenex Luna C18(150 mm×2.0 mm，5 μm);柱溫:30℃。進樣量:10 μL;流動相:甲醇和含0.1%甲酸2 mmol·L-1乙酸胺水溶液85∶15 (V∶V);流速:0.3 mL·min-1。甲維鹽和阿維菌素保留時間分別為1.2 和3.7 min。

掃描方式:電噴霧正離子掃描;檢測方式:選擇反應監(jiān)測;噴霧電壓:4 200 V;毛細管溫度:350℃;碰撞氣氬氣:1.5 mTorr。定量離子對、定性離子對、碰撞能量等參數(shù)見表1。

表1 質譜多重反應監(jiān)測(MRM) 條件

2 結果與討論

2.1 GPC 凈化方法

試驗先利用GPC 凈化方法。凈化條件為:凝膠色譜柱:320 mm×25 mm;填料:Bio-Beads S-X3 凝膠填料40～80 μm (200～400 目);洗脫溶劑:環(huán)己烷-乙酸乙酯(1∶1，V∶V);流速:5 mL·min-1;洗脫程序:前600 s 流出液棄去，收集后續(xù)的洗脫液，每120 s 收集1 管，共收集10 管，棄去繼續(xù)淋洗的400 s;進樣量:阿維菌素和甲維鹽混合標準溶液(1 mg·L-1)5 mL。收集的洗脫液(轉移至平底燒瓶)于40℃水浴中減壓旋轉蒸發(fā)近干，N2吹干，甲醇溶解定容至5 mL，過膜，液相色譜-串聯(lián)質譜法測定。結果表明，阿維菌素和甲維鹽主要在第3 管，第1 管未檢出，第2，4 管有少量檢出。但當作植物油添加回收試驗時發(fā)現(xiàn)，對于阿維菌素和甲維鹽等大分子農(nóng)藥殘留，GPC 凈化時則隨部分油脂流出，導致凈化液無法吹干，達不到凈化的效果。

2.2 固相萃取柱凈化方法

固相萃取柱進行樣品的凈化已得到廣泛應用，張艷等［5］采用丙磺酸強陽離子交換萃取柱進行甲維鹽的測定，但對阿維菌素不合適。章虎等［4］考察了Carb-NH2復合柱和氨基固相萃取柱用于凈化阿維菌素和甲維鹽的淋洗方法，結果表明，采用Carb-NH2復合柱時甲維鹽需要45 mL，阿維菌素需要50 mL 才能有較好的回收率(＞95%)，因而復合柱作為凈化柱，試驗可操作性不強;采用氨基柱時，用97∶3 (二氯甲烷∶甲醇)作為洗脫液，洗脫體積為10 mL，甲維鹽和阿維菌素回收率為98%和97%。進一步優(yōu)化洗脫溶劑，發(fā)現(xiàn)用95∶5 (二氯甲烷∶甲醇)作為洗脫液，洗脫體積為5 mL，甲維鹽和阿維菌素回收率即可達到95%以上。同時，相比GPC 凈化，采用氨基固相萃取柱時，操作簡單，凈化效果更好。

2.3 線性范圍

阿維菌素和甲維鹽用甲醇稀釋得到一系列標準溶液，濃度分別為5，10，20，50，100 和500 μg·L-1，進液相色譜-串聯(lián)質譜檢測。以濃度X (μg·L-1)為橫坐標，峰面積響應值Y 為縱坐標，對標準溶液測定值進行線形回歸，所得回歸方程，阿維菌素為:Y=16 752 X+1 086，r=0.997 5，甲維鹽為:Y=59 204 X+2 269，r=0.998 6?？梢姳痉椒ㄓ兄己玫姆€(wěn)定性。

2.4 回收率和精密度

在未檢出阿維菌素和甲維鹽的大豆油、花生油和菜籽油樣品中分別添加不同含量水平的2種農(nóng)藥混合標準液，渦旋混合2 min，靜置30 min。使添加濃度分別為0.01，0.02 和0.05 mg·kg-1，每個水平做5 次平行試驗，按照1.2 所述步驟處理后進樣，計算加標回收率和相對標準偏差(RSD)(表2)。

表2 方法添加回收率和精密度(n=5)

表2 顯示，回收率范圍為76.6%～93.5%，RSD為2.7%～9.0%，符合農(nóng)藥殘留分析方法的要求。

2.5 靈敏度

在試驗色譜條件下，分析添加濃度為0.01 mg·kg-1，進樣濃度為0.01 mg·L-1樣品中阿維菌素和甲維鹽的色譜圖，以噪音信號的3 倍和10 倍計算本方法的檢測限和定量限。阿維菌素的檢出限為0.002 mg·kg-1，定量限為0.005 mg·kg-1。甲維鹽的檢出限為0.000 3 mg · kg-1，定量限為0.001 mg·kg-1。

3 小結

采用氨基固相萃取柱凈化，建立了快速測定植物油中阿維菌素和甲維鹽殘留分析方法，具有良好的靈敏度、回收率和重復性。

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