劉童婷，黃秀深*，陳 瑾 黃媛莉

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川成都 611137;2.四川好醫(yī)生攀西藥業(yè)有限責(zé)任公司，四川西昌 615000)

美洲大蠊Periplaneta americana L.屬昆蟲綱有翅目蜚蠊科，為蠊目中的一個優(yōu)勢種，俗稱“蟑螂”，是世界上最古老、繁衍最成功的一個昆蟲類群?！渡颀埍静萁?jīng)》上記載“味咸，寒，有毒。主治瘀血，癥堅，寒熱，破積聚，喉咽痹。內(nèi)塞無子，通利血脈”［1］。

現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，其生物制劑康復(fù)新液能促進(jìn)胃腸道潰瘍愈合，提高愈合的質(zhì)量。本實驗通過對康復(fù)新液對大鼠乙酸燒灼型胃潰瘍模型進(jìn)行干預(yù)，旨在探討康復(fù)新液對慢性胃潰瘍愈合期胃黏膜修復(fù)環(huán)境和營養(yǎng)的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗藥物 康復(fù)新液，規(guī)格:50 mL/瓶，四川好醫(yī)生攀西藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號:090422。鹽酸雷尼替丁片，規(guī)格:0.15g/片，西南合成制藥股份有限公司，批號:091203。奧美拉唑鎂腸溶片，規(guī)格20 mg/片，阿斯利康制藥有限公司，批號:LK8936，分包裝批號:0911087。達(dá)喜(鋁碳酸鎂片)，規(guī)格:500 mg/片，拜耳醫(yī)藥保健有限公司，規(guī)格:116070。

1.2 動物 清潔級SD大鼠，體質(zhì)量200～220 g，雌雄各半，每組10×8=80只。由成都中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，合格證號:川實動管質(zhì)第8號，檢疫后備用。

1.3 試劑 水合氯醛，成都市科龍化工試劑廠，批號:20081206。大鼠血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)試劑盒，RD公司，批號KY01720B。一氧化氮(NO)試劑盒，RD公司批號:8578258。大鼠前列腺素(PGE2)試劑盒，南京建成，批號KY01577B)。谷氨酰胺(Gln)試劑盒，RD公司批號M0132。

1.4 儀器 電子分析天平(Sartorius AG，Bp6181036539型)?？烧{(diào)式移液器(芬蘭Finnpipette公司)。酶標(biāo)定量測定儀(美國ThermoFisher公司VarioskanTM)。高速低溫離心機(jī)(上?？茖W(xué)儀器廠，TGL-16G)。DY89-2型電動玻璃勻漿機(jī)，寧波新芝生物科技股份有限公司。z216MK小型高速臺式冷凍離心機(jī)，HERMLE。

1.5 方法 SD大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分組，分為生理鹽水組和造模組，雌雄各半。造模組大鼠漿膜層0.4～0.5 mm處刺入10%醋酸按0.05 mL/只的方法制備胃潰瘍模型［2-3］。造模成功后按體質(zhì)量隨機(jī)分組，分為乙酸模型組、康復(fù)新組、雷尼替丁組、奧美拉唑組和達(dá)喜組。術(shù)后第2日，康復(fù)新組每天灌服1 mL/100 g康復(fù)新液，雷尼替丁組每鼠每天灌服50 mg/kg，雷尼替丁，奧美拉唑組每鼠每天灌服6.7 mg/kg奧美拉唑，達(dá)喜組每日灌服500 mg/kg，生理鹽水組和乙酸模型組每鼠每天等體積灌服生理鹽水。連續(xù)13 d。

1.5.1 胃組織VEGF、NO、PGE2的水平 末日給藥后，禁食不禁飲12 h脫頸椎處死大鼠。暴露腹腔并結(jié)扎幽門和賁門，摘取全胃，沿胃大彎剪開后用冰生理鹽水沖洗，濾紙吸干，將胃展開平鋪于濾紙上，觀察注射醋酸溶液相應(yīng)部位胃黏膜潰瘍形成情況，取距潰瘍邊緣約5 mm處的胃組織4塊分別用錫箔紙包裹，－80℃保存。標(biāo)本0～4℃融化，按質(zhì)量1∶30加入生理鹽水，低溫勻漿，2500 r/min 20 min低溫離心，取上清。用ELISA法測定，嚴(yán)格按試劑盒說明書操作。

1.5.2 胃黏膜Gln水平 取胃黏膜組織稱定質(zhì)量，按質(zhì)量1∶30加入生理鹽水3000 r/min 10 min低溫離心，取上清。用分光光度法測定，按測試盒說明書方法進(jìn)行檢測。

1.5.3 統(tǒng)計分析 統(tǒng)計方法參考新世紀(jì)全國高等中醫(yī)藥院校創(chuàng)新教材《中醫(yī)藥統(tǒng)計學(xué)與軟件應(yīng)用》，數(shù)據(jù)處理用統(tǒng)計軟件SPSS 13.0進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)以()表示。

2 結(jié)果

2.1 康復(fù)新液對胃組織VEGF、NO和PEG2的水平的影響結(jié)果見表1。

表1 康復(fù)新液對胃組織VEGF、NO和PEG2的水平的影響()

表1 康復(fù)新液對胃組織VEGF、NO和PEG2的水平的影響()

注:檢測滿足正態(tài)性和方差齊性，故用LSD檢驗。與假手術(shù)比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

組 別 動物/只 劑 量VEGF/(ng·L －1)NO/(μmoL·L －1)PEG2/(pg·mL －1)假手術(shù) 12 同體積222.42 ±20.06245.82±11.32 5.15±0.49 255.87±12.72乙酸模型 9 同體積 222.31±14.24 8.59±0.44＊＊ 224.86±10.77＊＊康復(fù)新液 9 5 mL/kg 222.47±15.02 11.43±0.65## 219.16±21.52雷尼替丁 8 50 mg/kg 214.13±17.14 8.95±0.39 253.08±7.73##奧美拉唑 9 6.7 mg/kg 221.91±20.96 6.55±0.61### 246.37±14.70達(dá)喜 10 500 mg/kg 216.53±25.89 7.09±0.42###

由表1顯示，模型組的胃組織VEGF的水平與假手術(shù)組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，有下降的趨勢;各治療組的胃組織VEGF的水平與模型組比較，均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

模型組的胃組織NO的水平與假手術(shù)組比較有顯著性差異(P＜0.01);各治療組的胃組織NO的水平與模型組比較，奧美拉唑組和達(dá)喜組均下降，均有顯著性差異(P＜0.01);康復(fù)新液組和雷尼替丁組升高，且康復(fù)新液組有顯著性差異(P＜0.01)。

模型組的胃組織PGE2的水平與假手術(shù)組比較有顯著性差異(P＜0.01);各治療組的胃組織PGE2的水平與模型組比較，雷尼替丁組有顯著性差異(P＜0.01)，奧美拉唑組有升高的趨勢，康復(fù)新液組和達(dá)喜組無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，有下降的趨勢。

2.2 康復(fù)新液對胃黏膜Gln的水平的影響 結(jié)果見表2。

由表2顯示，模型組的胃黏膜的Gln水平與假手術(shù)組比較有顯著性差異(P＜0.01);各治療組的胃黏膜Gln的水平與模型組比較，奧美拉唑組和達(dá)喜組下降，奧美拉唑組有顯著差異(P＜0.05);康復(fù)新液組和雷尼替丁組升高，有顯著性差異(P＜0.01)，康復(fù)新液組療效強(qiáng)于雷尼替丁組。

表2 康復(fù)新液對胃黏膜Gln水平的影響()

表2 康復(fù)新液對胃黏膜Gln水平的影響()

注:檢測滿足正態(tài)性和方差齊性，故用LSD檢驗。與假手術(shù)比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

組 別 動物/只 劑量 Gln/(μmoL·g－1)假手術(shù) 12 同體積1.06±0.22乙酸模型 9 同體積 1.97±0.53＊＊康復(fù)新液 9 5 mL/kg 3.57±0.63##雷尼替丁 8 50 mg/kg 3.53±0.89##奧美拉唑 9 6.7 mg/kg 1.84±0.59達(dá)喜 10 500 mg/kg 1.35±0.30#

3 討論

本實驗造模方法采用外源性酸直接腐蝕胃壁，引起胃壁組織壞死脫落，形成局部小范圍潰瘍。潰瘍新生肉芽組織中血管的再生是維持創(chuàng)傷區(qū)域的營養(yǎng)供給及細(xì)胞外基質(zhì)沉淀［4］的關(guān)鍵。其中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是已知最強(qiáng)的血管生成促進(jìn)因子，對血管內(nèi)皮細(xì)胞具有專一性，能促進(jìn)胃腸黏膜上皮細(xì)胞增生，增加胃黏膜血流量，維持胃腸道的完整性，在潰瘍的發(fā)病中起著保護(hù)和防御的作用［5］。一氧化氮(NO)是一種胃腸道動力的強(qiáng)抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，通過生理信號的傳輸調(diào)節(jié)著全身的血管網(wǎng)絡(luò)，具有舒張血管，調(diào)節(jié)血流，促進(jìn)黏液釋放［6］，在維持潰瘍周圍組織血流、肉芽組織再生和潰瘍愈合等方面起著重要作用［7］。前列腺素(PGE2)為目前公認(rèn)的細(xì)胞保護(hù)因子，通過抑制胃酸分泌，增加胃黏膜黏液、碳酸氫鹽分泌和增加黏膜血流，從而改善微循環(huán)，促進(jìn)胃黏膜修復(fù)。谷氨酰胺(Gln)是必須氨基酸，是胃黏膜中糖蛋白的主要構(gòu)成成分，為胃腸黏膜細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等快速增生細(xì)胞提供營養(yǎng)支持［8］，是較好的呼吸染料，是潰瘍修復(fù)的必要條件。

研究結(jié)果表明，大鼠造模后治療14 d，各造模組胃潰瘍局部有炎性細(xì)胞侵潤、肉芽組織增生、纖維化和胃黏膜再生，組間比較有差異。乙酸模型組NO、PGE2的水平減少，Gln的水平增加，康復(fù)新液組和雷尼替丁組NO水平、Gln的水平增加且康復(fù)新液增加顯著，奧美拉唑組和達(dá)喜組均下降。雷尼替丁組和奧美拉唑組PGE2的水平增加，康復(fù)新液組和達(dá)喜組作用不明顯。胃組織中VEGF的水平各組間變化不顯著。

胃黏膜防御因素包括:胃黏膜-黏液屏障、碳酸氫鹽、細(xì)胞再生、前列腺素和表皮因子、黏膜血流等。消化性潰瘍的發(fā)生是胃潰瘍損害因素與防御因素失衡，防御因子減弱是消化性潰瘍形成的重要原因［9］?？祻?fù)新液的有效成分為黏糖氨酸、多元醇類和肽類等活性物質(zhì)，可通過提高T淋巴細(xì)胞數(shù)量和活性調(diào)節(jié)免疫功能［10-11］，加快組織修復(fù)，保證潰瘍愈合。本實驗證實康復(fù)新液能通過增加局部潰瘍胃黏膜中NO和Gln的水平，保護(hù)胃黏膜，為胃潰瘍的愈合提供良好的環(huán)境和必要的營養(yǎng)支持。有報道顯示連用康復(fù)新液患者癥狀緩解及胃鏡下潰瘍愈合率顯著優(yōu)于單用抑酸藥和幽門螺旋桿菌根除藥，并且效果優(yōu)于連用胃黏膜保護(hù)劑膠體果膠鉍膠囊［12］。提示康復(fù)新液作為一種新型的胃黏膜保護(hù)劑在胃潰瘍治療中具有相當(dāng)廣闊的應(yīng)用前景，為康復(fù)新液進(jìn)一步研究提供理論依據(jù)。

［1］孫星衍.神龍本草經(jīng)［M］.北京:商務(wù)印書館，1955:90.

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