拜有玉 (長江大學(xué)農(nóng)學(xué)院，湖北 荊州434025)

王翠霞，紀(jì)莉景，孔令 (河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所，河北省有害生物綜合防治工程技術(shù)研究中心，農(nóng)業(yè)部華北北部作物有害生物綜合治理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 保定 071000)

生防細(xì)菌SFJ-7對西瓜枯萎病的防治效果

拜有玉 (長江大學(xué)農(nóng)學(xué)院，湖北 荊州434025)

王翠霞，紀(jì)莉景，孔令 (河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所，河北省有害生物綜合防治工程技術(shù)研究中心，農(nóng)業(yè)部華北北部作物有害生物綜合治理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 保定 071000)

以對西瓜枯萎具有較好防治效果的生防細(xì)菌SFJ-7為研究對象，采用平板菌落計(jì)數(shù)法獲得生長曲線(其中最佳發(fā)酵時(shí)間為21h，此時(shí)菌體數(shù)量可達(dá)到5×106cfu/ml)，將其菌液設(shè)置成每克土109、108、1073個(gè)濃度梯度，與每克土106病原菌混合，采用盆栽方法進(jìn)行了西瓜枯萎病的防治試驗(yàn)。結(jié)果顯示：濃度為每克土109個(gè)分生孢子的生防菌防效最好，病株率最低只有13.18%，防治效果達(dá)到了86.04%。該結(jié)果可為西瓜枯萎病的生物防治提供參考。

西瓜枯萎病菌；生防菌；細(xì)菌生長曲線

西瓜枯萎病是一種由尖孢鐮刀菌西瓜轉(zhuǎn)化型(Fusariumoxysporumsf.sp.melonis)引起的毀滅性的土傳病害[1]，通常發(fā)病率即為損失率；一般株發(fā)病率為 10%～30%，嚴(yán)重時(shí)高達(dá)80%，甚至絕收[2-3]。近年來，隨著西瓜種植面積的迅速增加，產(chǎn)區(qū)輪作倒茬困難，枯萎病發(fā)病越來越嚴(yán)重[4]。不僅嚴(yán)重影響了西瓜的產(chǎn)量和質(zhì)量，而且挫傷了瓜農(nóng)種植的積極性。目前生產(chǎn)上存在的問題是缺乏抗病品種，土壤消毒難以大面積推廣、嫁接影響果品質(zhì)量、化學(xué)防治的效果也不盡人意。為了尋求對西瓜枯萎病安全有效的防治措施，人們越來越關(guān)注以菌治菌的生物防治方法[5]。近年來利用拮抗菌防治西瓜枯萎病越來越受到重視，國內(nèi)外已有不少報(bào)道，已發(fā)現(xiàn)的生防菌包括非致病鐮刀菌(Fusariumspp.)[6]、芽孢桿菌(Bacillusspp.)、熒光假單胞菌(Pseudomonasfluorescence)[7]、綠色木霉(Trichodermaviride)[8]、哈茨木霉(Trichodermaharzianum)[9]等，在實(shí)際應(yīng)用中仍多以拮抗活菌施入病菌生存的環(huán)境角度加以利用，但是活菌應(yīng)用容易受到環(huán)境條件影響，致使防治效果喪失或延遲，用于大面積推廣存在一定風(fēng)險(xiǎn)，施用前需綜合考慮當(dāng)?shù)夭『ξ⑸鷳B(tài)系統(tǒng)的環(huán)境[10]；張麗榮等[11]的研究表明，在作物生長期間經(jīng)2次灌根后，以木酶制劑T1、T2、T3處理的西瓜苗發(fā)病率為1.25%～2.5%，明顯低于藥劑對照(72%農(nóng)用鏈霉素)和空白對照，相對防效達(dá)71.4%～85.4%；木霉制劑T1、T3 對西瓜枯萎病的防治效果和增產(chǎn)效果更為顯著，西瓜植株長勢旺盛、葉片大且濃綠，說明木霉制劑對作物具有一定的促生長作用；紀(jì)明山等[12]對綠色木霉和芽孢桿菌聯(lián)合防治西瓜枯萎病進(jìn)行了初步研究，兩者聯(lián)合后的防效達(dá)到了80%以上，在研究過程中也觀察到了木霉菌迅速覆蓋病原菌并使之停止生長或枯死，以及拮抗細(xì)菌分泌抗生物質(zhì)使病原菌停止生長形成拮抗帶和促進(jìn)植物生長等現(xiàn)象。本研究以對西瓜枯萎菌有較好抑制作用的生防細(xì)菌SFJ-7為研究對象，在確定生防菌最佳發(fā)酵時(shí)間的基礎(chǔ)上，采用室內(nèi)盆栽試驗(yàn)探討了不同使用濃度對西瓜枯萎病的防治效果以及對土壤中病菌數(shù)量的影響，以期為該病的生物防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

西瓜枯萎病菌：菌株由河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所植物病害實(shí)驗(yàn)室提供，是具有強(qiáng)致病力的尖孢鐮刀菌西瓜?；?。

生防菌株SFJ-7： 由河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保所植物病害實(shí)驗(yàn)室篩選。

供試西瓜種子：京域二號F1(北京京域威爾農(nóng)業(yè)科技有限公司)。

LB培養(yǎng)基：胰蛋白胨10g，酵母提取粉5g，氯化鈉10g，瓊脂15g，蒸餾水1000ml。

LB 液體培養(yǎng)基：胰蛋白胨10g，酵母提取粉5g，氯化鈉10g，蒸餾水1000ml。

PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，葡糖糖20g，瓊脂20g，蒸餾水1000ml。

PDA 液體培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，葡糖糖20g，蒸餾水1000ml。

1.2 病原菌和生防菌的擴(kuò)繁培養(yǎng)

生防菌株的擴(kuò)繁培養(yǎng)：將在LB培養(yǎng)基上生長良好的生防細(xì)菌SFJ-7接種在裝有100ml LB液體培養(yǎng)基的三角瓶(250ml)中，每瓶接種0.1ml，經(jīng)搖床以160r/s的轉(zhuǎn)速在30℃下培養(yǎng)36h。

病原菌的擴(kuò)繁培養(yǎng)：選擇在PDA培養(yǎng)基上生長良好的病原菌，用6mm的打孔器打孔，每瓶接種5～6塊于裝有100ml PDA液體培養(yǎng)基的三角瓶(250ml)中，經(jīng)搖床以170r/s的轉(zhuǎn)速25℃培養(yǎng)4～5d。

1.3 生防菌株生長曲線測定

采用平板菌落計(jì)數(shù)法，將在LB培養(yǎng)基上生長良好的生防細(xì)菌SFJ-7接種在裝有100ml LB液體培養(yǎng)基的三角瓶(250ml)中，每瓶接種0.1ml，經(jīng)搖床以160r/s的轉(zhuǎn)速30℃培養(yǎng)，每隔3h取1次樣，進(jìn)行稀釋涂平板，統(tǒng)計(jì)生防菌菌落數(shù)，繪制其對數(shù)生長曲線。

1.4 不同濃度生防菌的防效測定

采用室內(nèi)盆栽法進(jìn)行。首先將濕熱滅菌(121℃、50 min)后的沙子和蛭石(沙子∶蛭石=1∶1)按每盆500g的量裝于花盆中；其次把擴(kuò)繁的生防細(xì)菌原液稀釋，配制成不同濃度的菌液(即每克土109、108、1073個(gè)濃度梯度)，再與擴(kuò)繁好的病原菌(接種量為每克土106分生孢子)分別混合，然后將混合好的菌液澆入盆中，并寫明相應(yīng)的編號；設(shè)對照CK1和CK0，其中CK1只加入每克土106的病原菌，CK0只加對應(yīng)量的水。

每盆播種6粒西瓜種子，覆土100g，每個(gè)濃度設(shè)15個(gè)重復(fù)；移至溫室，常規(guī)管理，待開始發(fā)病后調(diào)查病株率，直至植株死亡，計(jì)算相對防效。

1.5 生防菌對根際土壤病菌數(shù)量的影響

調(diào)查結(jié)束后，收集花盆當(dāng)中幼苗根圍的沙土，將其進(jìn)行100倍稀釋，于選擇性培養(yǎng)基上每皿涂抹500μl ，25℃培養(yǎng)3～4 d，調(diào)查西瓜枯萎病病菌的菌落數(shù)量，以確定生防細(xì)菌對其是否有抑制效果。

2 結(jié)果與分析

2.1 生防菌株的生長曲線

圖1 生防菌SFJ-7的對數(shù)生長曲線

經(jīng)平板菌落計(jì)數(shù)獲得的生防細(xì)菌SFJ-7對數(shù)生長曲線如圖1。由圖1可以看出，生防菌SFJ-7在3～15h內(nèi)生長速度較緩慢，隨后生長速度逐漸加快，持續(xù)到21h時(shí)達(dá)到最高峰，達(dá)到5×106cfu/ml，說明它的的最佳生長點(diǎn)在21h。

2.2 不同使用濃度的生防菌的防治效果

通過盆栽方法，人工接入生防細(xì)菌和病菌后，調(diào)查不同濃度生防菌液處理后的發(fā)病率和防治效果，結(jié)果如表1所示。

當(dāng)生防菌使用濃度為每克土109時(shí)，病株率最低只有13.18%，相對防效達(dá)86.04%；而每克土107的病株率高達(dá)81.11%，相對防效僅為14.11%；兩者差異極顯著，對照CK1的病株率達(dá)到了94.44%，幾乎全部死亡。

表1 不同濃度生防菌處理后西瓜枯萎病的發(fā)病率和防治效果

表2 不同生防菌濃度處理下植株根際土壤內(nèi)病菌的數(shù)量

2.3生防菌對根際土壤病菌數(shù)量的影響

取根圍土樣的平板分離結(jié)果如表2，從表2可以看出，每克土109的濃度下健康植株幼苗根圍土中含有的病菌數(shù)量明顯少于每克土108和每克土1072個(gè)濃度下的數(shù)量。

3 小結(jié)與討論

本研究結(jié)果表明，生防菌SFJ-7對西瓜枯萎病有較好的防治效果，初步明確了該生防菌的菌體最佳搖瓶發(fā)酵生長時(shí)間為21h，根圍土壤使用該菌體濃度在每克土109時(shí)相對西瓜枯萎病防效最高，為達(dá)到86.04%，該濃度下植株根際土壤內(nèi)的病原菌數(shù)量明顯減少，研究結(jié)果為西瓜枯萎病的生物防治提供了一定的依據(jù)。但由于試驗(yàn)中設(shè)置的濃度梯度較少，且為室內(nèi)盆栽的研究結(jié)果，因此，需進(jìn)行進(jìn)行多濃度測試和大田防效試驗(yàn)。此外，對生防菌株尚需進(jìn)一步確定分類地位。

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2013-05-20

公益性行業(yè)科研專項(xiàng)(200903049)。

拜有玉(1990-)，男，現(xiàn)從事植物病理學(xué)研究。

[作者簡介]孔令曉，E-mail：konglingxiao@sohu.com。

S436.5

A

1673-1409(2013)17-0005-03