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        金銀花多糖對脾淋巴細胞的增殖作用

        2013-10-26 04:55:46劉蓓劉玉紅
        中國實用醫(yī)藥 2013年11期
        關鍵詞:金銀花懸液淋巴細胞

        劉蓓 劉玉紅

        ·實驗研究·

        金銀花多糖對脾淋巴細胞的增殖作用

        劉蓓 劉玉紅

        目的研究金銀花多糖對脾淋巴細胞的增殖作用。方法用MTT法體外觀察金銀花多糖在不同濃度對小鼠脾淋巴細胞增殖的影響。結果金銀花多糖在濃度10~250 μg/ml時可顯著促進小鼠脾淋巴細胞的增殖,以濃度100 μg/ml時作用最為明顯。結論金銀花多糖體外具有免疫促進作用。

        金銀花;多糖;淋巴細胞增殖

        多糖在抗腫瘤、抗病毒、降血糖、抗衰老、抗凝血、促進免疫等方面都發(fā)揮著重要生物活性,因此對多糖的研究與開發(fā)已越來越引起人們的關注。我們前期研究表明,清熱解毒類中藥金銀花,其多糖組分可以抑制小鼠S180肉瘤的生長并且沒有明顯的毒副作用[1]。為進一步探討其抗腫瘤的作用機制,基于多種多糖確切的免疫增強活性報道,本文采用脾淋巴細胞增殖實驗,研究了金銀花多糖體外的免疫活性。

        1 實驗材料

        金銀花多糖(自制[1]);RPMI-1640培養(yǎng)基(Gibco公司);刀豆蛋白A(ConA)(Sigma公司);噻唑籃(MTT)(Sigma公司)。BALB/c小鼠,體重(20+2.0)g,由山東大學實驗動物研究中心提供。

        2 實驗方法

        2.1脾淋巴細胞懸液制備 取小鼠頸椎脫臼處死,70%酒精浸泡10 min,取脾,研磨過100目篩網,Hank’s液沖洗,收集脾細胞懸液,離心,棄上清;加紅細胞裂解液(Tris-NH4Cl)10 ml,混勻脾細胞,靜止4~5 min,離心,棄上清,Hank’s液洗2~3遍,用RPMI-1640培養(yǎng)液重懸細胞,計數,調整細胞濃度為6~8×106個/ml。

        2.2測定法 于96孔培養(yǎng)板中,每孔加入100 μl細胞懸液,再加入100 μl不同濃度的金銀花多糖溶液,同時設空白對照組(Control,加100 μl培養(yǎng)液)、陽性對照組(加100 μl ConA,濃度10 μg/ml)。置5%CO2,37℃培養(yǎng)48 h。培養(yǎng)結束前4 h,于每孔加入5 mg/ml的MTT 20 μl,培養(yǎng)結束后,每孔加入酸化的20%的SDS溶液120 μl裂解細胞,過夜,在酶標儀上測各孔的A(測定波長570nm,參比波長630nm)。計算結果:淋巴細胞增殖指數=供試樣品組吸光值/空白對照組吸光值。

        3 實驗結果

        結果見表1。不同濃度的金銀花多糖(10~250 μg/ml)均可顯著促進小鼠脾淋巴細胞的增殖,在濃度100 μg/ml時作用最強,增殖指數為1.172,高于或低于此濃度,促進作用減弱,呈鐘罩形的劑量-效應曲線。說明金銀花多糖具有一定的免疫促進作用,為金銀花多糖抑制小鼠S180腫瘤生長的作用機制之一。

        表1 金銀花多糖對脾淋巴細胞增殖的影響

        注:*P<0.05 and**P<0.01 vs. control group

        4 討論

        多數多糖是通過增強機體的免疫調節(jié)作用發(fā)揮抗腫瘤作用或治療其他免疫缺陷性疾病。脾臟是T、B淋巴細胞定居和接受抗原刺激后產生免疫應答的重要場所,它們與機體的細胞免疫和體液免疫密切相關。本文研究了金銀花多糖體外對小鼠脾淋巴細胞增殖的影響,結果表明在濃度10~250 μg/ml范圍內,金銀花多糖對小鼠脾淋巴細胞增殖具有不同程度的刺激作用,并且有最適劑量,超過或低于最適劑量則效應減弱,呈鐘罩形的劑量-效應曲線,這種特點與許多免疫調節(jié)劑的量效關系曲線的特點相似,提示其免疫調節(jié)作用具有雙向性。金銀花多糖的免疫調節(jié)作用可能為其抗腫瘤作用機制之一。

        [1] 劉玉紅,劉玉國,蔣海強. 金銀花多糖對小鼠S180肉瘤的抑制作用與機制研究. 腫瘤學雜志,2012,18(8):584-587.

        山東省醫(yī)學科學院科技計劃項目(項目編號:200818)

        250355 山東中醫(yī)藥大學藥學院

        劉玉紅 E-mail: liuyuhongwu@126.com

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