劉蓓 劉玉紅

·實驗研究·

金銀花多糖對脾淋巴細胞的增殖作用

劉蓓 劉玉紅

目的研究金銀花多糖對脾淋巴細胞的增殖作用。方法用MTT法體外觀察金銀花多糖在不同濃度對小鼠脾淋巴細胞增殖的影響。結果金銀花多糖在濃度10～250 μg/ml時可顯著促進小鼠脾淋巴細胞的增殖，以濃度100 μg/ml時作用最為明顯。結論金銀花多糖體外具有免疫促進作用。

金銀花；多糖；淋巴細胞增殖

多糖在抗腫瘤、抗病毒、降血糖、抗衰老、抗凝血、促進免疫等方面都發(fā)揮著重要生物活性，因此對多糖的研究與開發(fā)已越來越引起人們的關注。我們前期研究表明，清熱解毒類中藥金銀花，其多糖組分可以抑制小鼠S180肉瘤的生長并且沒有明顯的毒副作用[1]。為進一步探討其抗腫瘤的作用機制，基于多種多糖確切的免疫增強活性報道，本文采用脾淋巴細胞增殖實驗，研究了金銀花多糖體外的免疫活性。

1 實驗材料

金銀花多糖(自制[1])；RPMI-1640培養(yǎng)基(Gibco公司)；刀豆蛋白A(ConA)(Sigma公司)；噻唑籃(MTT)(Sigma公司)。BALB/c小鼠，體重(20+2.0)g，由山東大學實驗動物研究中心提供。

2 實驗方法

2.1脾淋巴細胞懸液制備 取小鼠頸椎脫臼處死，70%酒精浸泡10 min，取脾，研磨過100目篩網，Hank’s液沖洗，收集脾細胞懸液，離心，棄上清；加紅細胞裂解液(Tris-NH4Cl)10 ml，混勻脾細胞，靜止4～5 min，離心，棄上清，Hank’s液洗2～3遍，用RPMI-1640培養(yǎng)液重懸細胞，計數，調整細胞濃度為6～8×106個/ml。

2.2測定法 于96孔培養(yǎng)板中，每孔加入100 μl細胞懸液，再加入100 μl不同濃度的金銀花多糖溶液，同時設空白對照組(Control，加100 μl培養(yǎng)液)、陽性對照組(加100 μl ConA，濃度10 μg/ml)。置5%CO2，37℃培養(yǎng)48 h。培養(yǎng)結束前4 h，于每孔加入5 mg/ml的MTT 20 μl，培養(yǎng)結束后，每孔加入酸化的20%的SDS溶液120 μl裂解細胞，過夜，在酶標儀上測各孔的A(測定波長570nm，參比波長630nm)。計算結果:淋巴細胞增殖指數=供試樣品組吸光值/空白對照組吸光值。

3 實驗結果

結果見表1。不同濃度的金銀花多糖(10～250 μg/ml)均可顯著促進小鼠脾淋巴細胞的增殖，在濃度100 μg/ml時作用最強，增殖指數為1.172，高于或低于此濃度，促進作用減弱，呈鐘罩形的劑量-效應曲線。說明金銀花多糖具有一定的免疫促進作用，為金銀花多糖抑制小鼠S180腫瘤生長的作用機制之一。

表1 金銀花多糖對脾淋巴細胞增殖的影響

注：*P<0.05 and**P<0.01 vs. control group

4 討論

多數多糖是通過增強機體的免疫調節(jié)作用發(fā)揮抗腫瘤作用或治療其他免疫缺陷性疾病。脾臟是T、B淋巴細胞定居和接受抗原刺激后產生免疫應答的重要場所，它們與機體的細胞免疫和體液免疫密切相關。本文研究了金銀花多糖體外對小鼠脾淋巴細胞增殖的影響，結果表明在濃度10～250 μg/ml范圍內，金銀花多糖對小鼠脾淋巴細胞增殖具有不同程度的刺激作用，并且有最適劑量，超過或低于最適劑量則效應減弱，呈鐘罩形的劑量-效應曲線，這種特點與許多免疫調節(jié)劑的量效關系曲線的特點相似，提示其免疫調節(jié)作用具有雙向性。金銀花多糖的免疫調節(jié)作用可能為其抗腫瘤作用機制之一。

[1] 劉玉紅，劉玉國，蔣海強. 金銀花多糖對小鼠S180肉瘤的抑制作用與機制研究. 腫瘤學雜志，2012,18(8)：584-587.

山東省醫(yī)學科學院科技計劃項目(項目編號：200818)

250355 山東中醫(yī)藥大學藥學院

劉玉紅 E-mail: liuyuhongwu@126.com