師憲平， 藍(lán)曉瑩， 陳 鑫， 王文文， 溫創(chuàng)宇， 黃美近， 劉煥亮△

(1廣州醫(yī)學(xué)院免疫研究所，廣東 廣州 510182； 2中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院血液內(nèi)科，廣東 廣州 510630;中山大學(xué) 3胃腸病學(xué)研究所， 4附屬第六醫(yī)院，廣東 廣州 510655)

藤黃酸對(duì)彌漫性大B淋巴瘤細(xì)胞株OCI-LY-1增殖和凋亡的影響及其分子學(xué)機(jī)制*

師憲平1△， 藍(lán)曉瑩1， 陳 鑫1， 王文文2， 溫創(chuàng)宇3,4， 黃美近4， 劉煥亮3,4△

(1廣州醫(yī)學(xué)院免疫研究所，廣東 廣州 510182；2中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院血液內(nèi)科，廣東 廣州 510630;中山大學(xué)3胃腸病學(xué)研究所，4附屬第六醫(yī)院，廣東 廣州 510655)

目的探討藤黃酸對(duì)彌漫性大B淋巴瘤細(xì)胞增殖與凋亡的影響及其分子學(xué)機(jī)制，研究藤黃酸治療彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤的潛在應(yīng)用價(jià)值。方法用藤黃酸處理細(xì)胞，采用MTS法對(duì)淋巴瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞活力及增殖抑制測(cè)定；碘化丙啶(PI)單染熒光顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)改變；采用AnnexinⅤ-FTIC/PI流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡；利用Western blotting檢測(cè)蛋白酶體系統(tǒng)相關(guān)蛋白(Ubs、Bax、HSP90和IκB-α)、凋亡相關(guān)蛋白(PARP、pro-caspase-3和caspase-8)及細(xì)胞增殖信號(hào)通路相關(guān)蛋白(ERK和STAT5)的變化情況。結(jié)果藤黃酸明顯抑制OCI-LY-1細(xì)胞的增殖活性，誘導(dǎo)OCI-LY-1細(xì)胞呈凋亡趨勢(shì)；隨藤黃酸濃度升高，Ubs、Bax和HSP90表達(dá)升高；隨藤黃酸濃度升高與作用時(shí)間延長(zhǎng)，PARP切割、pro-caspase-3、pro-caspase-8、ERK、p-ERK、STAT5及p-STAT5表達(dá)下降。結(jié)論藤黃酸抑制彌漫性大B淋巴瘤細(xì)胞株的蛋白酶體活性，抑制細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。

彌漫性大B淋巴瘤； 藤黃酸； 蛋白酶體； 細(xì)胞增殖； 細(xì)胞凋亡

非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin′s lymphoma, NHL)是目前發(fā)病率增長(zhǎng)最快的淋巴瘤，其中彌漫性大B淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma, DLBCL)是最常見的NHL。DLBCL是大B型淋巴細(xì)胞彌漫性惡性增生性疾病，在最近的10～20年間發(fā)病率逐漸增加。DLBCL在西方國家占成人非霍奇金淋巴瘤30%～40%，在發(fā)展中國家高達(dá)60%。目前R-CHOP(美羅華，聯(lián)合環(huán)磷酰胺，阿霉素度，長(zhǎng)春新堿，強(qiáng)的松)被國際上公認(rèn)為治療侵襲性NHL的經(jīng)典療法，在治療低度惡性NHL取得了良好的效果，然而在用藥過程中產(chǎn)生了極大的耐藥復(fù)發(fā)問題及并發(fā)癥(支氣管痙攣、心律失常、肝功能衰竭、低血藥呼吸困難等)，嚴(yán)重影響了治療效果，迫切需要篩選出作用機(jī)制各異的活性化合物能夠有效治療NHL。

臨床實(shí)驗(yàn)表明，蛋白酶體抑制劑對(duì)難治性和復(fù)發(fā)性淋巴造血系統(tǒng)惡性腫瘤有較好的療效。蛋白酶體抑制劑是一種新型抗腫瘤藥物，具有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，干擾細(xì)胞周期進(jìn)程，提高腫瘤細(xì)胞對(duì)化療和放療的敏感性等作用。目前，已開發(fā)出多種蛋白酶體抑制劑，包括肽基醛類MG132、二肽硼酸類PS-341(bortezomib/velcade)等[1-2]，均可抑制26S蛋白酶體活性，調(diào)節(jié)泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(ubiquitin-proteasome system, Ups)功能。已有文獻(xiàn)報(bào)道，PS-341聯(lián)合化療藥物可提高某些不同亞型彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤對(duì)藥物的反應(yīng)[3]。

藤黃酸(gambogic acid，GA)是中藥藤黃的主要活性成份，大量研究表明藤黃酸是一種多靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物，其在胃癌、肺癌、胰腺癌、肝癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤等實(shí)體腫瘤和血液系統(tǒng)惡性腫瘤中表現(xiàn)出強(qiáng)大的抗癌活性[4]。已有文獻(xiàn)報(bào)道，藤黃酸與其它蛋白酶體抑制劑具有協(xié)同抑制蛋白酶體活性的作用[5]。研究表明，NK/T細(xì)胞淋巴瘤及NK/T淋巴瘤株HANK1細(xì)胞強(qiáng)表達(dá)泛素活化酶E1(ubiquitin activating enzyme 1, UBE1)[6]，提示Ups功能亢進(jìn)可能與NK/T細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)。為此，我們對(duì)其它亞型的淋巴瘤細(xì)胞進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)藤黃酸對(duì)彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤OCI-LY-1細(xì)胞的蛋白酶體活性有明顯的抑制作用。本研究以彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤OCI-LY-1細(xì)胞株為研究模型，探討藤黃酸對(duì)其Ups系統(tǒng)的調(diào)控作用，檢測(cè)藤黃酸對(duì)細(xì)胞增殖和凋亡通路的影響，進(jìn)而探討藤黃酸治療彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤的潛在應(yīng)用價(jià)值。

材 料 和 方 法

1材料

彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤OCI-LY-1細(xì)胞由本實(shí)驗(yàn)室保存。RPMI-1640高糖培養(yǎng)基和胎牛血清Gibco。藤黃酸、MTS、碘化丙啶和細(xì)胞凋亡雙染檢測(cè)試劑盒，Tween-20與DMSO購自Sigma-Aldrich，抗pro-caspase-8、pro-caspase-3、p-ERK、ERK、Bax、熱休克蛋白90(heat-shock protein 90,HSP90)及IκB-α為Cell Signaling產(chǎn)品，抗PRAP為BD產(chǎn)品，抗XIAP、Mcl-1、ubiquitin proteins(Ubs)抗體購自Santa Cruz，抗GAPDH、p-STAT5和STAT5抗體購自Upstate Technology，HRP-抗鼠/兔Ig抗體為Pierce Biotechnology產(chǎn)品。

2主要方法

2.1細(xì)胞培養(yǎng) OCI-LY-1細(xì)胞用RPMI-1640(含10%胎牛血清、1×105U/L青霉素和100 mg/L鏈霉素)于37 ℃、5% CO2、飽和濕度條件下培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)所用的細(xì)胞均處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。

2.2細(xì)胞活力檢測(cè)實(shí)驗(yàn) 用MTS法測(cè)細(xì)胞活力抑制情況，設(shè)空白對(duì)照組、對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組；取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的OCI-LY-1細(xì)胞接種于96孔板，對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組每孔接種50 μL細(xì)胞懸液，共15 000個(gè)細(xì)胞，空白對(duì)照組加入100 μL不含細(xì)胞培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)組每孔再加入50 μL含藤黃酸培養(yǎng)基，使加入終濃度為0.16、0.3125、0.625、1.25、2.5及5.0 μmol/L，對(duì)照組加入50 μL含血清的培養(yǎng)基，空白對(duì)照組不加，每組3個(gè)重復(fù)孔。不同劑量的藤黃酸作用44 h后于實(shí)驗(yàn)各孔分別加MTS試劑20 μL，37 ℃繼續(xù)孵育4 h，于酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀490 nm測(cè)定各孔的吸光度(A)，細(xì)胞活力(%)=(A實(shí)驗(yàn)組-A空白對(duì)照組)/(A對(duì)照組-A空白對(duì)照組)，以濃度為橫坐標(biāo)，細(xì)胞活力為縱坐標(biāo)繪制藤黃酸對(duì)OCI-LY-1細(xì)胞生長(zhǎng)活力抑制率柱狀圖。

2.3PI單染法觀察細(xì)胞學(xué)形態(tài) 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞接種于24孔板，每孔接種1 mL細(xì)胞懸液，共2×105細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組加入終濃度為0.25、0.5及0.75 μmol/L藤黃酸，對(duì)照組不加藥，置于37 ℃、5% CO2、飽和濕度細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，5 h后加入已過濾的PI染液(1∶100)，在加藥24 h后顯微鏡TRITC熒光通道拍照記錄PI陽性細(xì)胞。當(dāng)已死亡或?yàn)l臨死亡的細(xì)胞膜完整性被破壞時(shí)，PI可以進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)與DNA雙鏈結(jié)合，受激發(fā)后發(fā)出紅色熒光，此類細(xì)胞記為陽性細(xì)胞。

2.4Annexin V/PI雙標(biāo)記法流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞凋亡 實(shí)驗(yàn)設(shè)有不同藤黃酸濃度處理組。計(jì)數(shù)細(xì)胞，2×108cells/L，收集細(xì)胞，1×binding buffer洗滌細(xì)胞后，Annexin V工作液100 μL室溫避光孵育15 min，檢測(cè)前每管加PI 1 μL上機(jī)。在雙染流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的散點(diǎn)圖上，取右下象限和右上象限的總和(即Annexin V陽性細(xì)胞群)計(jì)為凋亡細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)完全按照Sigma-Aldrich公司提供的試劑說明書操作，重復(fù)3次。

2.5Western blotting 不同時(shí)點(diǎn)和不同濃度的藤黃酸處理OCI-LY-1細(xì)胞后收集細(xì)胞，加入蛋白裂解液充分裂解細(xì)胞提取蛋白，Bio-Rad蛋白濃度試劑盒紫外分光750 nm波長(zhǎng)定量蛋白濃度。100～130 V恒壓電泳約90 min，100 V恒壓轉(zhuǎn)膜約90 min，5%牛奶室溫封閉1 h，特異性Ⅰ抗4℃過夜次日曝光。

3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用GraphPad Prism 4.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,組間比較用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1GA對(duì)OCI-LY-1細(xì)胞活力及細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響

一定濃度的GA對(duì)OCI-LY-1細(xì)胞的生長(zhǎng)有抑制作用，隨著GA濃度增大，細(xì)胞出現(xiàn)空泡、破碎等形態(tài)學(xué)改變，同時(shí)細(xì)胞增長(zhǎng)緩慢，可見大量死亡細(xì)胞。GA處理細(xì)胞44 h后，當(dāng)GA劑量達(dá)0.08 μmol/L時(shí)細(xì)胞活力明顯受到抑制(P<0.05)，且GA對(duì)OCI-LY-1細(xì)胞的增殖抑制作用呈劑量依賴效應(yīng),見圖1，GA對(duì)OCI-LY-1細(xì)胞生長(zhǎng)的半數(shù)抑制濃度是0.20 μmol/L。不同劑量的GA處理24 h后對(duì)OCI-LY-1細(xì)胞具有明顯的誘導(dǎo)死亡作用,見圖2。

Figure 1. Effect of GA on cell viability of OCI-LY-1 cells.Mean±SD.n=6.*P<0.05,**P<0.01vs0 μmo/L.

圖1GA對(duì)彌漫性大B淋巴瘤細(xì)胞株OCI-LY-1活力的影響

Figure 2. OCI-LY-1 cell death induced by GA for 24 h.

圖2GA誘導(dǎo)24h后彌漫性大B淋巴瘤細(xì)胞株OCI-LY-1死亡

2GA對(duì)OCI-LY-1細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)

經(jīng)不同濃度GA處理24 h后，當(dāng)GA濃度達(dá)0.25 μmol/L時(shí)OCI-LY-1細(xì)胞凋亡率明顯升高，GA誘導(dǎo)OCI-LY-1細(xì)胞凋亡作用呈劑量依賴效應(yīng),見圖3，表明GA可以誘導(dǎo)OCI-LY-1細(xì)胞發(fā)生凋亡。

Figure 3. Apoptosis of OCI-LY-1 cells induced by GA for 24 h.

圖3GA誘導(dǎo)24h后彌漫性大B淋巴瘤細(xì)胞株OCI-LY-1凋亡

3GA抑制OCI-LY-1細(xì)胞中泛素蛋白酶體系統(tǒng)的活性

圖4顯示，當(dāng)GA濃度達(dá)0.25 μmol/L時(shí)，內(nèi)源性泛素化蛋白Ubs表達(dá)增加(P<0.05)，其底物蛋白HSP90的表達(dá)亦出現(xiàn)相應(yīng)程度的提高(P<0.05)，而當(dāng)GA濃度達(dá)0.5 μmol/L時(shí)，Ubs的另一底物蛋白Bax表達(dá)也出現(xiàn)增加(P<0.01)，GA誘導(dǎo)這些蛋白的表達(dá)增加呈劑量依賴效應(yīng)。GA不影響Ubs的其中一底物蛋白IκB-α的表達(dá)。

Figure 4. The expression of Ubs and the subtracts of OCI-LY-1 cells induced by GA for 6 h.Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vs0 μmol/L.

圖4GA處理6h后上調(diào)彌漫性大B淋巴瘤細(xì)胞株OCI-LY-1泛素化蛋白及其底物的表達(dá)

4GA對(duì)凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

圖5結(jié)果顯示，用不同濃度GA處理細(xì)胞24 h，當(dāng)GA濃度達(dá)0.25 μmol/L時(shí)，PARP前體減少，出現(xiàn)切割帶，同時(shí)引起caspase家族相關(guān)蛋白caspase-3及caspase-8前體減少，出現(xiàn)caspase-8切割帶，且呈現(xiàn)GA濃度依賴性(P<0.01)。用0.75 μmol/L GA分別處理細(xì)胞6 h、12 h和24 h，于6 h時(shí)便出現(xiàn)PARP切割帶，同時(shí)caspase-3及caspase-8前體減少，蛋白變化呈現(xiàn)時(shí)間依賴性(P<0.01)。

Figure 5. Effects of GA on the expression of apoptosis-related proteins PARP, pro-caspase-3 and pro-caspase-8 in OCI-LY-1 cells.Mean±SD.n= 3.**P<0.01vs0 μmol/L or 0 h.

圖5GA對(duì)彌漫性大B淋巴瘤細(xì)胞株OCI-LY-1凋亡相關(guān)蛋白PARP、pro-caspase-3和pro-casepase-8表達(dá)的影響

5GA對(duì)細(xì)胞增殖信號(hào)通路的影響

圖6顯示，用不同濃度GA處理細(xì)胞24 h，當(dāng)GA濃度達(dá)0.25 μmol/L時(shí)增殖相關(guān)蛋白ERK和STAT5磷酸化形式蛋白表達(dá)明顯下降(P<0.01)，而其總蛋白形式也有下降(P<0.05)，且均呈現(xiàn)GA濃度依賴性。用0.75 μmol/L GA分別處理細(xì)胞6 h、12 h和24 h，于6 h時(shí)出現(xiàn)ERK和STAT5磷酸化形式蛋白表達(dá)明顯下降(P<0.01)，而其總蛋白形式也下降(P<0.05)，且均呈現(xiàn)GA時(shí)間依賴性。

Figure 6. Effects of GA on the expression of proliferation-related proteins p-ERK, ERK, p-STAT5 and STAT5 in OCI-LY-1 cells.Mean±SD.n=3.*P<0.05，**P<0.01vs0 μmol/L or 0 h.

圖6GA對(duì)彌漫性大B淋巴瘤細(xì)胞株OCI-LY-1增殖相關(guān)蛋白p-ERK、ERK、p-STAT5和STAT5表達(dá)的影響

討 論

隨著對(duì)腫瘤調(diào)控機(jī)制的深入研究，腫瘤治療分子靶點(diǎn)的尋找已成為當(dāng)今的發(fā)展方向[7]。近年發(fā)現(xiàn)，許多腫瘤和遺傳性疾病的發(fā)生都與泛素蛋白酶體功能失調(diào)有關(guān)[8-10]。蛋白酶體抑制劑通過抑制腫瘤細(xì)胞內(nèi)蛋白酶體活性來調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。蛋白酶體抑制劑通過改變蛋白酶體的酶切位點(diǎn)抑制蛋白酶體活性，目前已成為免疫學(xué)、炎癥及腫瘤學(xué)等領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。已有不少文獻(xiàn)報(bào)道，蛋白酶體抑制劑對(duì)惡性腫瘤具有治療效果[11]?，F(xiàn)已證實(shí)小分子蛋白酶體抑制劑PS-341對(duì)某些惡性血液系統(tǒng)疾病病具有良好的治療效果，其中包括多發(fā)性骨髓瘤和淋巴瘤[12]。同時(shí)，蛋白酶體抑制劑對(duì)套細(xì)胞淋巴瘤的治療亦有相當(dāng)意義，盡管臨床上作為化療藥物的使用仍未成功[13]。本文選取了彌漫性大B淋巴瘤細(xì)胞株OCI-LY-1為研究對(duì)象，探討小分子化合物GA誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞增殖及其相關(guān)分子學(xué)機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，GA能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，這可能與抑制細(xì)胞蛋白酶體系統(tǒng)的活性，誘導(dǎo)PARP切割，激活cspase-3和caspase-8相關(guān)。同時(shí)，GA的抑制細(xì)胞增殖效果可能是通過抑制JAKs/STATs和MEK/ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化而產(chǎn)生。

實(shí)驗(yàn)證實(shí)GA明顯抑制OCI-LY-1細(xì)胞生長(zhǎng)并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。MTS法顯示，隨著GA濃度增加，OCI-LY-1細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率明顯增加；Annexin V/PI雙標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示GA呈劑量依賴性誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；Western blotting檢測(cè)顯示內(nèi)源性泛素化蛋白Ubs及其底物蛋白Bax、HSP90呈不同程度的增加；caspase-8與caspase-3前體pro-caspase-8與pro-caspase-3的表達(dá)均隨GA濃度和作用時(shí)間的增加而減少，PARP也呈劑量與時(shí)間依賴性的切割，顯示了caspase級(jí)聯(lián)通路的活化。上述結(jié)果表明，GA能誘導(dǎo)彌漫性大B淋巴瘤細(xì)胞的凋亡，其可能機(jī)制是抑制了細(xì)胞蛋白酶體活性，使某些促凋亡蛋白例如Bax的表達(dá)水平增加，同時(shí)活化了caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)。JAKs/STATs和MEK/ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與細(xì)胞的增殖、分化及凋亡關(guān)系密切，這些通路異常活化可導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖和惡性轉(zhuǎn)化[14]，我們的結(jié)果顯示，ERK和STAT5總體及磷酸化形式的蛋白表達(dá)水平均下調(diào)，提示了這些信號(hào)通路的活化受到GA的抑制，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞增殖抑制。蛋白酶體系統(tǒng)的活性抑制如何激活caspase級(jí)聯(lián)通路以及蛋白酶體系統(tǒng)的活性是否直接調(diào)控細(xì)胞增殖通路，是我們需要進(jìn)一步探索的科學(xué)問題。

總之，GA可能通過調(diào)控蛋白酶體系統(tǒng)活性，下調(diào)凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)及JAKs/STATs和MEK/ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，從而明顯抑制彌漫性大B淋巴瘤OCI-LY-1細(xì)胞生長(zhǎng)，誘導(dǎo)其凋亡，對(duì)彌漫性大B淋巴瘤具有重要的治療前景。

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EffectofgambogicacidonproliferationandapoptosisofhumandiffuselargeB-celllymphomacelllineOCI-LY-1

SHI Xian-ping1, LAN Xiao-ying1, CHEN Xin1, WANG Wen-wen2, WEN Chuang-yu3, 4, HUANG Mei-jin4, LIU Huan-liang3,4

(1InstituteofImmunology,GuangzhouMedicalUniversity,Guangzhou510182,China;2DepartmentofHematology,TheThirdAffiliatedHospitalofSunYat-senUniversity,Guangzhou510630,China;3InstituteofGastroenterology,4TheSixthAffiliatedHospital,SunYat-senUniversity,Guangzhou510655,China.E-mail:xianping_shi@gzhmc.edu.cn;huanliang.liu@gmail.com)

AIM: To investigate the effects of gambogic acid (GA) on the proliferation and apoptosis of human diffuse large B-cell lymphoma cells.METHODSDiffuse large B-cell lymphoma cell line OCI-LY-19 was treated with GA. The cell viability and proliferation were evaluated by MTS assay. The morphological changes of the cells were observed under inverted microscope and fluorescence microscope with PI staining. The cell apoptosis was detected by flow cytometry. The changes of proteasome-related proteins Ubs, Bax, HSP90 and IκB-α, the apoptosis-related proteins PARP, pro-caspase-3 and caspase-8, and the proliferation-associated molecules ERK and STAT5 were detected by Western blotting.RESULTSThe proliferation of OCI-LY-19 cells was inhibited and the apoptosis was induced by GA. The expression of Ubs, Bax and HSP90 was up-regulated by GA treatment in a dose-dependent manner. The PARP protein was cleaved. The levels of apoptosis-related proteins pro-caspase-3 and pro-caspase-8, and proliferation-associated molecules p-Akt, p-ERK and p-STAT5 were down-regulated by GA treatment in a dose- and time-dependent manner.CONCLUSIONGambogic acid down-regulates the activity of proteasome, inhibits cell proliferation and promotes cell apoptosis of diffuse large B cell lymphoma.

Diffuse large B-cell lymphoma; Gambogic acid; Proteasome; Cell proliferation; Apoptosis

R733.4

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2013.05.008

1000- 4718(2013)05- 0815- 06

2012- 12- 31

2013- 04- 08

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No. 81100378)；廣州市科信局應(yīng)用基礎(chǔ)研究專項(xiàng)重點(diǎn)項(xiàng)目(No. 2012J4100014)；廣東省醫(yī)學(xué)科研基金(No. B2012159)

△通訊作者 師憲平Tel: 020-81340313; E-mail: xianping_shi@gzhmc.edu.cn；劉煥亮 Tel: 020-39443272; E-mail: huanliang.liu@gmail.com