鄭優(yōu)娜，孫述文，唐林芳，于 婷，崔曉麗，高德陽(yáng)，邱文慧，王孟亞 (吉林醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院:.200級(jí)藥物制劑本科班，2.藥學(xué)院化學(xué)教研室，.20級(jí)藥物制劑本科班，吉林，吉林 20)

紅景天是景天科多年生草木或灌木植物，生長(zhǎng)在海拔800～2 500米高寒無(wú)污染地帶的珍稀野生植物。由于其生長(zhǎng)環(huán)境惡劣，如缺氧、低溫干燥、狂風(fēng)、受紫外線照射、晝夜溫差大，因而具有很強(qiáng)的生命力和特殊的適應(yīng)性。研究表明，紅景天苷(Salidroside，圖1)是高山紅景天的主要藥用活性成分［1］。它具有抗缺氧、抗疲勞、抗微波輻射等作用，還具有對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用和雙向調(diào)節(jié)作用，具有延緩機(jī)體衰老、防止心血管疾病、抗腫瘤以及多種老年性疾病的作用［2-3］。因此，紅景天苷在軍事醫(yī)學(xué)、航天醫(yī)學(xué)、運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)和保健醫(yī)學(xué)等方面都具有十分重要的意義。

根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，測(cè)定紅景天中紅景天苷的含量的方法主要有:高效液相色譜法［4］、重氮化比色法［5］、薄層掃描法［6］、熒光分析法［7］等。由于HPLC儀器昂貴、所供組分復(fù)雜的試劑，需采用萃取，柱色譜等預(yù)處理方法對(duì)供試品進(jìn)行純化處理等局限性的存在會(huì)限制它的應(yīng)用;而熒光分析法因儀器設(shè)備簡(jiǎn)單，易操作，靈敏度高，精確度高等優(yōu)點(diǎn)受到廣泛應(yīng)用。查閱相關(guān)資料，僅有一篇報(bào)道熒光光譜法測(cè)紅景天苷的文獻(xiàn)，但無(wú)實(shí)際樣品分析。本實(shí)驗(yàn)詳細(xì)考察了紅景天苷水溶液的熒光分析條件，并成功測(cè)定了西藏大花紅景天中紅景天苷的含量。

圖1 紅景天苷的分子結(jié)構(gòu)式

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑

儀器:RF-1501型熒光分光光度計(jì)(日本島津公司);JY2001電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司);800電動(dòng)離心機(jī)(金壇市富華儀器有限公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀:CH-9230 Flawil1(Buchi labortechnik AG);超聲波清洗器:CU250(上海超聲波儀器廠)。

試劑:紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品(≥97.5%，HPLC，Aladdin，上海晶純?cè)噭┯邢薰?;95%乙醇(天津市大茂化學(xué)試劑廠);無(wú)水硫酸鈉(天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠);飽和醋酸鉛(沈陽(yáng)市華東試劑廠);大花紅景天(西藏，中國(guó));實(shí)驗(yàn)用水全是蒸餾水。

1.2 紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)溶液

精密稱取0.005 0 g紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品，加少量蒸餾水溶解，定容到100 mL容量瓶中，濃度為50 mg/L，使用時(shí)用蒸餾水稀釋定容。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

準(zhǔn)確移取50 mg/L的紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5 mL，定容到50 mL容量瓶中，搖勻，再?gòu)闹辛咳? mL溶液定容到50 mL容量瓶中，濃度為0.05 mg/L。通過(guò)固定激發(fā)波長(zhǎng)掃描發(fā)射光譜，固定發(fā)射波長(zhǎng)掃描激發(fā)光譜的方法，分別找到最大激發(fā)波長(zhǎng)和最大發(fā)射波長(zhǎng)，并考察了放置時(shí)間和溫度對(duì)紅景天苷熒光強(qiáng)度的影響。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

準(zhǔn)確移取一定量50 mg/L紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別于7個(gè)50 mL容量瓶，用蒸餾水稀釋定容至刻線，得到濃度為 0.00、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在選定條件下，依次測(cè)定其熒光強(qiáng)度FI(n=3)，以熒光強(qiáng)度FI為縱坐標(biāo)，紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)濃度c為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸分析。

1.5 樣品提取液的制備與測(cè)試

準(zhǔn)確稱取5.0 g西藏大花紅景天，于250 mL錐形瓶加入95%乙醇100 mL，超聲1 h，減壓抽濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濾液，回收乙醇［8］，將殘余液裝入離心管中，加6 mL乙酸鉛和2 mL飽和硫酸鈉［9］，離心分離30 min(2 000 r/min)后取離心上清液，用0.45 μm濾膜進(jìn)行過(guò)濾，將濾液定容到50 mL容量瓶中，使用時(shí)用蒸餾水稀釋到線性范圍以內(nèi)測(cè)試。

2 結(jié)果與討論

2.1 激發(fā)光譜和發(fā)射光譜

由于使用的是廉價(jià)的RF-1501型熒光分光光度計(jì)，雖有數(shù)據(jù)顯示，但沒(méi)有拷貝圖譜的高級(jí)功能，所以設(shè)定狹縫寬度為10 nm，每間隔一段波長(zhǎng)采集信號(hào)，通過(guò)描點(diǎn)的方法來(lái)繪制紅景天苷的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜。如圖2所示，水溶液中紅景天苷的最大激發(fā)波長(zhǎng)為273 nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為301 nm，與文獻(xiàn)報(bào)道值一致［7］。

2.2 熒光強(qiáng)度隨溫度的變化

考察了濃度為0.05 mg/L的紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液在20～60℃之間熒光強(qiáng)度的變化，數(shù)據(jù)列于表1。從表1可以看出紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液隨著溫度的升高，熒光強(qiáng)度明顯下降。在20℃時(shí)熒光強(qiáng)度最大，在60℃之間熒光強(qiáng)度最小，所以20℃是實(shí)驗(yàn)的適宜溫度，因此本實(shí)驗(yàn)測(cè)量的溫度條件選擇在室溫下進(jìn)行。

圖2 紅景天苷的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜

表1 熒光強(qiáng)度隨溫度的變化

2.3 熒光強(qiáng)度隨放置時(shí)間的變化

考察了濃度為0.05 mg/L的新配置的紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品在72 h內(nèi)的熒光強(qiáng)度的變化，每間隔一定的時(shí)間測(cè)量并記錄一次熒光強(qiáng)度，數(shù)據(jù)列于表2。從表2看出紅景天苷的強(qiáng)度穩(wěn)定，在72 h內(nèi)變化不是很大。

表2 熒光強(qiáng)度隨放置時(shí)間的變化

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線

在選定條件下，依次測(cè)定 0.00、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1 mg/L 的紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)溶液，扣除空白溶液的影響，得到線性回歸方程 FI=3 115.5c+221.73(r=0.999 0)，回歸曲線如圖3所示。檢出限D(zhuǎn)L=0.005 mg/L(空白信號(hào)標(biāo)準(zhǔn)偏差的3倍對(duì)應(yīng)的濃度)。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

配制0.05 mg/L的紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)溶液，連續(xù)取樣5次進(jìn)行熒光強(qiáng)度的測(cè)試，其值分別為365.275、366.062、363.638、365.266、363.295，得到相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.32%(n=5)，表明該方法的精密度良好。

圖3 紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.6 樣品定性檢測(cè)

取1.5中的樣品稀釋約1萬(wàn)倍后，掃描其熒光光譜圖發(fā)現(xiàn)，該溶液的熒光光譜與紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)溶液的光譜圖幾乎完全一致，定性的說(shuō)明使用熒光分光光度法可以選擇性的測(cè)定紅景天提取液中的紅景天苷的含量。

2.7 含量分析與計(jì)算

在選定的最佳條件下，對(duì)1.5中的樣品提取液稀釋1萬(wàn)倍后，進(jìn)行了熒光強(qiáng)度的測(cè)試，數(shù)據(jù)列于表3。紅景天苷的含量測(cè)試及提取率計(jì)算結(jié)果列于表4。計(jì)算公式:

表3 樣品提取液的熒光強(qiáng)度

表4 樣品中紅景天苷含量分析

2010版《中國(guó)藥典》中規(guī)定，紅景天藥材中紅景天苷的含量應(yīng)≥0.5%［10］，0.804%的含量高于該值，說(shuō)明西藏大花紅景天中的紅景天苷含量頗豐。

3 結(jié)論

本研究考察了紅景天苷在水溶液中的熒光光譜及發(fā)光特性，并對(duì)西藏大花紅景天中的紅景天苷進(jìn)行了提取及定性、定量分析。結(jié)果表明，熒光分光光度法不僅具有儀器操作簡(jiǎn)單，靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，而且適用于復(fù)雜試樣的分析，尤其是分離比較困難的中藥材中熒光物質(zhì)的分析。值得關(guān)注的是，試樣必須進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂?，否則容易發(fā)生熒光猝滅效應(yīng)而導(dǎo)致熒光消失。紅景天苷提取液的成功分析為我國(guó)中藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了重要的分析依據(jù)。

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