晏永新，張 麗，賈海芳，江潤(rùn)蓓，方學(xué)鋒，舒文林

(1．江西新世紀(jì)民星動(dòng)物保健品有限公司，南昌 330096;2．江西出入境檢驗(yàn)檢疫局綜合技術(shù)中心，南昌 330002)

黨參具有補(bǔ)中益氣，健脾益肺之功效，動(dòng)物臨床常用于畜禽脾胃虛弱，少食腹瀉，肺虛咳喘，體倦無(wú)力，氣虛垂脫。研究表明，黨參多糖是黨參的主要有效成分，具有免疫調(diào)節(jié)、消除自由基、造血、抗疲勞及提高動(dòng)物生產(chǎn)性能等作用［1－2］。本公司以黨參多糖為研究對(duì)象，開(kāi)發(fā)了動(dòng)物免疫增強(qiáng)劑黨參多糖口服液，并通過(guò)測(cè)定小鼠免疫臟器指數(shù)、網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能、半數(shù)溶血值等指標(biāo)的變化評(píng)價(jià)其對(duì)免疫系統(tǒng)的作用，為黨參多糖口服液的生產(chǎn)和臨床提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 材料 試驗(yàn)動(dòng)物:昆明種小鼠，雌雄兼?zhèn)?，體重18～22 g，由江西中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。試驗(yàn)藥品:黨參多糖口服液:由黨參藥材經(jīng)過(guò)多糖提取濃縮等工藝制得，規(guī)格:100 mL/瓶，2 g生藥，江西新世紀(jì)民星動(dòng)物保健品有限公司提供，批號(hào):20100501，試驗(yàn)前根據(jù)給藥量適當(dāng)濃縮;人參口服液，吉林省通化博祥藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z20075112，批號(hào):20091201。試驗(yàn)器材:4號(hào)針頭、723分光光度計(jì)、離心機(jī)(TLG－16型，江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠)。試劑:印度墨汁，1%明膠液，0．1%Na2CO3;Alsever溶液(葡萄糖 2．05 g、檸檬酸鈉 0．80 g、氯化鈉0．42 g、蒸餾水100 mL，無(wú)菌過(guò)濾濾過(guò));都氏試劑(碳酸氫鈉 1．0 g、氰化鉀 0．05 g、高鐵氰化鉀0．2 g、蒸餾水1000 mL);環(huán)磷酰胺;豚鼠血清(－20℃保存，臨用時(shí)生理鹽水1∶10稀釋)。

1．2 方法

1．2．1 黨參多糖口服液對(duì)小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)對(duì)血流中惰性炭粒的吞噬廓清能力的影響 參照文獻(xiàn)［3］進(jìn)行試驗(yàn)。

1．2．1．1 印度墨汁的配制 取印度墨汁，反復(fù)振搖至均勻，用1%明膠液稀釋4倍供試驗(yàn)用。

1．2．1．2 試驗(yàn)分組及處理 取雄性小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，即空白對(duì)照組，陽(yáng)性藥物對(duì)照組(人參口服液5 g生藥/kg)，黨參多糖口服液高、中、低劑量組(分別為 9 g、7 g、5 g 生藥/kg)。按0．2 mL/10 g體重灌胃給藥，空白組給予等容量的生理鹽水，每日1次，連續(xù)4 d，末次給藥后24 h，于鼠尾靜脈注入稀釋的印度墨汁0．1 mL/10 g。于注入墨汁后30 s和6 min用特制取血吸管從小鼠眼眶后靜脈叢取血 0．025 mL，立刻吹入 0．1%Na2CO3液2 mL中，吸管于該液中吸入、吹出數(shù)次，以充分洗出吸管壁附著之血液;取血完畢，以0．025 mL正常小鼠血溶于2mL 0．1%Na2CO3液校零，分光光度計(jì)(675 nm)測(cè)定吸光度。小鼠分別稱體重后斷頭處死，摘出胸腺及脾稱重，計(jì)算胸腺或脾指數(shù)、吞噬指數(shù)K及吞噬系數(shù)α。

式中:C為血中炭粒濃度，T為時(shí)間，W為體重，WLS為肝脾合重。

1．2．2 黨參多糖口服液對(duì)綿羊紅細(xì)胞所致小鼠溶血素抗體生成的影響 參照文獻(xiàn)［3］進(jìn)行試驗(yàn)。

1．2．2．1 綿羊紅細(xì)胞(SRBC)懸液的制備 在無(wú)菌條件下，從健康成年綿羊外頸靜脈取血，置于內(nèi)盛有玻璃珠的滅菌錐形瓶中，搖動(dòng)10min以除去纖維蛋白，加入相當(dāng)于羊血體積2倍的Alsever溶液搖勻，置于4℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩ＥR用時(shí)取上述保存的羊紅細(xì)胞，用生理鹽水洗滌3次，每次1000～2000 r/min離心5 min，棄去上清液，用生理鹽水以3∶5(V/V)稀釋?zhuān)辜t細(xì)胞濃度為每毫升約20億個(gè)。

1．2．2．2 免疫及給藥 小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只，即空白組，陽(yáng)性藥物對(duì)照組(人參口服液5 g生藥/kg)，黨參多糖口服液高(9 g生藥/kg)、中(7 g生藥/kg)、低(5 g生藥/kg)劑量組，各給藥組灌胃給藥，空白組給予相應(yīng)體積量的生理鹽水，每日1次，0．2 mL/10 g，連續(xù)8 d。各給藥組于給藥2 d后腹腔注射 SRBC懸液，0．2 mL/鼠，對(duì)照組同法用 SRBC免疫，于免疫后6日，眼眶取血進(jìn)行溶血素測(cè)定。

1．2．2．3 溶血素測(cè)定 眼眶取血于離心管內(nèi)，放置約1 h后，用長(zhǎng)針將凝固血與管壁剝離，使血清充分滲出，2000 r/min－離心10 min，取血清，生理鹽水稀釋500倍后按表1設(shè)計(jì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，然后于37℃水浴中保溫10 min，冰浴終止反應(yīng)后2000 r/min離心10 min。取上清液1 mL、都氏試劑3 mL于試管內(nèi)，同時(shí)取綿羊紅細(xì)胞稀釋液0．25 mL、都氏試劑4 mL于另一支試管內(nèi)，充分搖勻，放置10 min，于540 nm處以對(duì)照管作空白，分別測(cè)定各管吸收度，按公式計(jì)算每只小鼠樣品的半數(shù)溶血值HC50。

表1 溶血素測(cè)定方法

2 結(jié)果與分析

2．1 黨參多糖口服液對(duì)小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)對(duì)血流中惰性炭粒的吞噬廓清能力的影響

2．1．1 黨參多糖口服液對(duì)小鼠免疫器官指數(shù)的影響 從表2試驗(yàn)結(jié)果可以看出，黨參多糖口服液各劑量組與空白組相比，胸腺指數(shù)無(wú)顯著差異(P ＞0．05)，脾指數(shù)顯著升高(P ＜0．05);與人參口服液組相比，胸腺指數(shù)沒(méi)有顯著差異，脾指數(shù)升高程度不及人參口服液。

表2 黨參多糖口服液對(duì)小鼠免疫器官重量的影響(n=10)

2．1．2 黨參多糖口服液對(duì)小鼠內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能的影響 結(jié)果見(jiàn)表3。參多糖口服液給藥組與空白組相比，K值及α值均見(jiàn)顯著增高，黨參多糖口服液中劑量組的效果與陽(yáng)性對(duì)照相當(dāng)，說(shuō)明黨參多糖口服液可增強(qiáng)小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能。

表3 黨參多糖口服液對(duì)小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能的影響(n=10)

2．2 黨參多糖口服液對(duì)綿羊紅細(xì)胞所致小鼠溶血素抗體生成的影響 從表4試驗(yàn)結(jié)果可以看出，黨參多糖口服液各劑量組小鼠的HC50均顯著高于空白對(duì)照組(P＜0．01)，且隨劑量增加而升高。黨參多糖口服液低劑量組效果即與人參口服液組相當(dāng)，說(shuō)明黨參口服液能顯著增強(qiáng)小鼠溶血素的生成。

表4 黨參多糖口服液對(duì)小鼠溶血素水平的影響(n=10)

3 討論

黨參是我國(guó)傳統(tǒng)的補(bǔ)益類(lèi)中藥，國(guó)內(nèi)外對(duì)其都有研究，黨參多糖是黨參的主要有效成分之一。黨參多糖對(duì)免疫系統(tǒng)的影響作用，國(guó)內(nèi)學(xué)者已經(jīng)開(kāi)展了廣泛的研究工作。楊光等［4］通過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)灌服黨參多糖可以增強(qiáng)機(jī)體免疫應(yīng)答，張曉軍等［5］也通過(guò)試驗(yàn)證明黨參多糖有免疫促進(jìn)作用，并能促進(jìn)脾臟代償性造血功能。從本試驗(yàn)的結(jié)果來(lái)看，黨參多糖口服液能顯著增強(qiáng)小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能，增加成年小鼠脾臟重量(P＜0．05);能顯著提高小鼠半數(shù)溶血值HC50，提高小鼠的血清溶血素抗體生成水平(P＜0．05)，與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道基本相符。

根據(jù)研究和試驗(yàn)結(jié)果，我們可以認(rèn)為黨參多糖具有顯著的免疫調(diào)節(jié)的作用，其免疫調(diào)節(jié)機(jī)理可能是與增強(qiáng)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能，升高脾指數(shù)，以及增強(qiáng)溶血素的生成有關(guān)，需進(jìn)一步深入研究。

［1］ 陳克克，王喆之．黨參多糖的研究進(jìn)展［J］．現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究進(jìn)展，2007，7(4):635 －637．

［2］ 許會(huì)軍，潘永全．中藥添加劑復(fù)方黨參多糖散在肉仔雞日糧中的應(yīng)用效果［J］．中國(guó)飼料，1997，(4):17 －18．

［3］ 陳 奇．中藥藥理研究方法學(xué)［M］．第1版．北京:人民衛(wèi)生出版社，1993:317．

［4］ 楊 光，李發(fā)勝，劉 輝，等．黨參多糖對(duì)小鼠免疫功能的影響［J］．中藥藥理與臨床，2005，21(4):39．

［5］ 張曉軍，胡 黎，賴小平，等．黨參多糖對(duì)小鼠免疫和造血功能的影響［J］．中藥新藥與臨床，2003，14(3):174 －176．