張雙，李瑤，鐘曉紅，曾建國，*

(1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，湖南 長沙 410128； 2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，國家中藥材生產(chǎn)(湖南)技術(shù)中心，湖南 長沙 410128； 3.湖南省中藥提取工程研究中心，湖南 長沙 410331)

夏天無鮮藥材的產(chǎn)地初加工工藝研究△

張雙1，李瑤2，3，鐘曉紅1，曾建國1，2，3*

(1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，湖南 長沙 410128； 2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，國家中藥材生產(chǎn)(湖南)技術(shù)中心，湖南 長沙 410128； 3.湖南省中藥提取工程研究中心，湖南 長沙 410331)

目的：本文以夏天無藥材為研究對象，通過比較不同產(chǎn)地初加工方法對夏天無鮮藥材中原阿片堿、鹽酸巴馬汀及延胡索乙素3種生物堿的影響，確定夏天無最佳產(chǎn)地初加工工藝。方法：采用HPLC法測定夏天無中三種生物堿的含量，對采收期內(nèi)的夏天無鮮藥材進(jìn)行曬干、陰干、不同溫度烘干等干燥處理，比較不同干燥方式對3種生物堿的影響，確定夏天無的最佳產(chǎn)地初加工工藝。結(jié)果：不同干燥處理方式的對夏天無中3種生物堿指標(biāo)成分的含量有較大的影響，在30 ℃曬干條件下3種指標(biāo)成分含量最高。結(jié)論：夏天無的最佳產(chǎn)地初加工工藝流程：春季或初夏出苗后采挖→除去莖、葉及須根→清洗或擦凈→30 ℃曬干。

夏天無；原阿片堿；鹽酸巴馬??；延胡索乙素；產(chǎn)地初加工

夏天無為罌粟科Papaveraceae植物伏生紫堇Corydalisdecumbens(Thunb.)Pers.的干燥塊莖。主產(chǎn)于江西，在湖南、浙江、江蘇等地有分布[1]，為民間常用藥材，具有活血祛瘀，通絡(luò)，行氣止痛的功效，能降壓鎮(zhèn)痙。用于中風(fēng)偏癱，半身不遂，跌打損傷，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，坐骨神經(jīng)痛，小兒麻痹后遺癥。夏天無的主要有效成分為生物堿類，含有原阿片堿、延胡索乙素等20余種生物堿[2-3]。2010年版《中國藥典》規(guī)定，夏天無以原阿片堿和鹽酸巴馬汀為指標(biāo)成分[4]。研究報(bào)道原阿片堿具有鎮(zhèn)痛、改善微血管循環(huán)等作用[5-6]。鹽酸巴馬汀具有抗炎、抗腫瘤和抗菌等藥理藥效作用[7]。而延胡索乙素鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)，對持續(xù)性、慢性鈍痛有極佳鎮(zhèn)痛效果[8]。因此對夏天無中原阿片堿、鹽酸巴馬汀及延胡索乙素3種成分含量的控制可以作為夏天無產(chǎn)地初加工的重要指標(biāo)。

2010年版《中國藥典》規(guī)定夏天無春季或初夏出苗后采挖，產(chǎn)地初加工方式為除去莖、葉及須根，洗凈，干燥[4]，但干燥方式不明確。大量現(xiàn)代研究表明，鮮藥材和干藥材以及經(jīng)加工炮制過的中藥飲片的化學(xué)成分在種類和含量上存在著較大的差異，藥效作用上也有顯著不同[9]。本研究以夏天無為目標(biāo)藥材，通過比較不同初加工方式對夏天無3種指標(biāo)成分含量的影響，確定最佳的產(chǎn)地初加工工藝，最大程度地保留夏天無鮮藥材中的活性成分，將最佳使用狀態(tài)的鮮藥材轉(zhuǎn)變?yōu)楦咂焚|(zhì)、可穩(wěn)定儲存的干藥材，為中藥的有效利用提供堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

Agilent 1260 Series 高效液相色譜儀(G1311C二元高壓梯度水泵G1329B在線脫氣機(jī)，G1315D二極管陣列檢測器，ChemStation化學(xué)工作站)；XCharge C18色譜柱(華譜新創(chuàng)科技有限公司)；AE240型電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)；KQ5200DE型超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司)；DHG-9246A型電熱恒溫干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；冷凍離心機(jī)(HERMLE 2323K，德國)；FW100型高速萬能粉碎機(jī)(天津市太斯特儀器有限公司)；微波爐(格蘭仕)；Milli-Q純水處理系統(tǒng)(美國MILLIPORE公司)

原阿片堿(86.2%)對照品購自中國藥品生物制品鑒定所，鹽酸巴馬汀(98%)、延胡索乙素(98%)對照品購自中國食品藥品檢定研究院；乙腈(色譜純，美國默克)，甲醇(色譜純，美國默克)，三乙胺(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，乙酸胺(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，水為Milli-Q超純水。

2.1 檢測方法

參照2010版《中國藥典》夏天無項(xiàng)下方法進(jìn)行檢測，色譜圖如圖1所示，為夏天無樣品以及對照品鹽酸巴馬汀、原阿片堿和延胡索乙素的高效液相檢測圖譜。圖A、圖B分別為混標(biāo)在345 nm波長下鹽酸巴馬汀對照品檢測圖譜及混標(biāo)在289 nm波長下原阿片堿和延胡索乙素對照品檢測圖譜。圖C、圖D分別為夏天無樣品在345 nm波長下鹽酸巴馬汀對照品檢測圖譜及夏天無樣品在282 nm波長下原阿片堿和延胡索乙素對照品檢測圖譜。

1.鹽酸巴馬汀 2.原阿片堿 3.延胡索乙素圖1 標(biāo)準(zhǔn)品鹽酸巴馬汀(A)，原阿片堿和 延胡索乙素(B)及夏天無樣品中鹽酸巴馬汀(C)， 原阿片堿和延胡索乙素(D)的高效液相色譜圖

2.2 混合對照品溶液

單標(biāo)溶液配制：精密稱取鹽酸巴馬汀29.5 mg，加入甲醇50 mL，配成含鹽酸巴馬汀0.506 mg·mL-1的溶液；精密稱取原阿片堿15.1 mg，加入甲醇10 mL，配成含原阿片堿1.47 mg·mL-1的溶液；精密稱取延胡索乙素15.1 mg，加入甲醇10 mL配成含延胡索乙素1.47 mg·mL-1的溶液，作為對照品貯備液，于4 ℃冰箱避光保存。

混標(biāo)溶液配制：分別取上述鹽酸巴馬汀溶液10 mL、延胡索乙素與原阿片堿各5 mL至25 mL容量瓶中，用甲醇定容(含鹽酸巴馬汀0.203 mg·mL-1，延胡索乙素0.294 mg·mL-1，原阿片堿0.294 mg·mL-1)至25 mL。

2.3 供試品溶液

采摘：初夏從國家中藥材生產(chǎn)(湖南)技術(shù)中心核心基地采采摘，經(jīng)湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝園林學(xué)院謝紅旗副教授鑒定為罌粟科植物伏生紫堇Corydalisdecumbens(Thunb.)Pers.。

洗凈瀝干：將所采集的夏天無，除去莖、葉及須根，挑選新鮮、無腐敗的鮮藥材，去除表面雜物洗凈，瀝干表面水分，待用。

干燥：夏天無鮮藥材采摘后4 h內(nèi)作如下處理：

烘干：將夏天無的根平鋪于不銹鋼方盤中，厚度不超過2 cm，分別于45 ℃、60 ℃、85 ℃、105 ℃烘箱中快速烘干；

曬干：將夏天無的根平攤在太陽下直曬至干，溫度為30 ℃左右；

陰干：將夏天無的根平鋪于室內(nèi)干燥通風(fēng)處晾干；

微波干燥：將夏天無的根平鋪于不銹鋼方盤中，厚度不超過2 cm，放入微波爐中干燥。

鮮藥材供試品溶液的制備：取鮮藥材適量于粉碎機(jī)中快速粉碎，快速稱取粉碎樣0.5 g于錐形瓶中，其它步驟同前，即得供試液(此過程均在采樣4 h之內(nèi)完成)。

干藥材供試品溶液的制備：取不同加工方式得到的干藥材粉碎，稱取0.5 g左右藥材粗粉，加入甲醇50 mL，密封，稱定重量，超聲提取(250 W，頻率100 kHz)30 min，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，離心(轉(zhuǎn)速：8 000 r·min-1，5 min)，取上清液，過0.45 μm微孔濾膜，即得供試液。

2.4 線性范圍考察

分別精密吸取混標(biāo)溶液8.00、6.00、3.00、1.00、0.50、0.10 mL于10.00 mL容量瓶中，加甲醇定容至10 mL，稀釋成不同質(zhì)量濃度的對照品溶液。按照2.1項(xiàng)下的色譜條件測定，以峰面積Y對進(jìn)樣濃度X進(jìn)行線性回歸。三種指標(biāo)成分回歸方程、線性范圍和相關(guān)系數(shù)見表1。從表1可以看出，三種指標(biāo)成分在該色譜條件下具有較好的線性關(guān)系。

表1 線性范圍、相關(guān)系數(shù)r

2.5 穩(wěn)定性考察

取適宜濃度的原阿片堿、延胡索乙素、鹽酸巴馬汀對照品的溶液，室溫避光保存，分別于2 h、4 h、8 h、12 h、24 h取5 μL注入高效液相色譜儀，記錄峰面積。結(jié)果如表2所示，原阿片堿、延胡索乙素、鹽酸巴馬汀對照品溶液峰面積的RSD分別為1.11%、1.06%、0.69%。表明夏天無標(biāo)準(zhǔn)品溶液在24 h內(nèi)較為穩(wěn)定。

表2 穩(wěn)定性考察數(shù)據(jù)

2.6 精密度試驗(yàn)

取適宜濃度的原阿片堿、延胡索乙素、鹽酸巴馬汀對照品溶液，分別取5 μL，注入HPLC儀，記錄待測生物堿各自的峰面積。連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算精密度和RSD值，結(jié)果見表3。數(shù)據(jù)顯示，6次進(jìn)樣后原阿片堿、延胡索乙素和鹽酸巴馬汀峰面積RSD值分別為1.11%、1.06%、0.69%，均遠(yuǎn)小于2%。說明本分析方法精密度很好。

表3 精密度考察數(shù)據(jù)

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一產(chǎn)地的夏天無藥材五份，按照2.3項(xiàng)下制備樣品溶液，在2.1項(xiàng)，色譜條件下測定3種生物堿的含量。檢測結(jié)果見表4，該方法下原阿片堿、延胡索乙素和鹽酸巴馬汀的峰面積RSD值分別為2.60%、2.19%、2.33%，其值小于5%。表明該前處理方法和檢測方法重復(fù)性良好。

表4 重復(fù)性考察數(shù)據(jù)

2.8 加樣回收試驗(yàn)

精密稱定已知濃度的夏天無粉末六份(含原阿片堿0.50%、延胡索乙素0.15%、鹽酸巴馬汀0.79%)，每份約0.1 g，按照樣品中各自含量的80%、100%、120%，分別精密加入三種待測生物堿對照品，每個含量各三份。按照2.2.2項(xiàng)方法制備供試液，按2.1項(xiàng)下色譜條件檢測指標(biāo)成分的含量，計(jì)算加樣回收率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示三種生物堿的加樣回收率分別為97.32%、98.01%和99.70%；RSD分別為0.23%、0.12%、0.38%。

2.9 樣品測定

2.9.1 藥材中水分的測定 參照2010年版《中國藥典》一部附錄IX H 項(xiàng)下第一法(烘干法)測定供試品中含水量。取供試品2～5 g，均勻鋪在干燥的鋁盒(在105 ℃下干燥4小時)中，精密稱定，置105 ℃下干燥4 h，蓋好蓋子，移至干燥器中冷卻30 min，精密稱定，再在上述溫度中干燥1 h，冷卻，稱重，連續(xù)兩次稱重的差異不超過5 mg為止，根據(jù)減失的重量計(jì)算供試品中的含水量[9]。

2.9.2 藥材中指標(biāo)成分的測定 將不同干燥方式的夏天無制備成供試品溶液，進(jìn)樣10 μL測定，按外標(biāo)法計(jì)算藥材中原阿片堿、延胡索乙素和鹽酸巴馬汀的折干含量。

2.10 不同干燥方式下指標(biāo)成分的變化情況

采收夏天無進(jìn)行產(chǎn)地初加工工藝研究，所得干燥樣品按照2.3項(xiàng)下制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件測定原阿片堿、延胡索乙素和鹽酸巴馬汀的含量，結(jié)果如圖2。新鮮夏天無樣品中三種生物堿總量含量最高，曬干對三種生物堿總量影響最小，較鮮樣降低20.00%左右；微波干燥下三種生物堿總量較鮮樣下降22.50%左右；在陰干和45 ℃烘干兩種不同干燥方式下，三種生物堿總量均下降25.00%左右；在105 ℃烘干條件下，三種生物堿總量變化較大，降低66.88%左右。新鮮夏天無中原阿片堿含量最高；陰干對原阿片堿含量影響最小，較鮮樣含量降低22%左右；曬干對原阿片堿含量影響也比較小，較鮮樣降低27%左右；45 ℃烘干后含量最低，較鮮樣降低52%左右。曬干對鹽酸巴馬汀含量幾乎沒有影響，含量較鮮樣沒有明顯差異。以上幾種干燥方式下延胡索乙素含量均無明顯差異。

圖2 不同初加工方式下夏天無指標(biāo)成分含量比較

3 討論

2010年版《中國藥典》中夏天無中指標(biāo)成分的提取方法為加熱回流。本試驗(yàn)比較加熱回流提取與超聲提取兩種不同提取工藝下有效成分提取率的變化(見表5)，結(jié)果表明：加熱回流與超聲兩種提取工藝下有效成分提取率無明顯差異，而超聲提取較加熱回流提取方法操作簡便快速，因此本文優(yōu)先選用了夏天無超聲提取工藝。

表5 提取方法考察數(shù)據(jù)

2010年版《中國藥典》規(guī)定夏天無藥材：春季或初夏出苗后采挖，除去莖、葉及須根，洗凈，干燥。其干燥方式不明確，然而不同的干燥過程將會大大的影響其指標(biāo)成分含量，從而影響產(chǎn)地藥材真實(shí)質(zhì)量的表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)以夏天無為研究對象，在適宜采收時期獲得原材料，以最大限度的保留其活性為目的，減少藥材在采集、前處理過程中有效成分的流失。本實(shí)驗(yàn)研究數(shù)據(jù)顯示：不同干燥方式對夏天無中各指標(biāo)成分含量有較大的影響，陰干后原阿片堿損失最小，其次為曬干。曬干對鹽酸巴馬汀幾乎

沒有影響；然而陰干對鹽酸巴馬汀的影響最大。對于延胡索乙素，任何干燥方式對其含量都無明顯差異。不同干燥方式對夏天無中三種指標(biāo)成分總量變化有顯著地影響：曬干>微波干燥>陰干>45 ℃烘干>85 ℃烘干>60 ℃烘干>105 ℃烘干。考慮到原阿片堿與鹽酸巴馬汀的功效不同，在實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用中，我們可根據(jù)所需的功效辯正地采用不同的干燥方式。在實(shí)際生產(chǎn)過程中考慮到經(jīng)濟(jì)效益及生產(chǎn)條件，建議夏天無的最佳初加工方式為曬干?；邗r藥材的研究可充分表征藥材質(zhì)量，從藥材初加工源頭降低活性成分的損失，同時研究不同干燥方式對中藥材有效成分的影響，對現(xiàn)實(shí)產(chǎn)地中藥材品質(zhì)的真實(shí)性，保持中藥資源的高效利用都具有重要的參考價(jià)值。

此外，本研究還可為進(jìn)一步探索不同鮮藥材中有效成分在不同干燥過程中生物酶、微生物等因素的影響機(jī)理提供參考依據(jù)。

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PreliminaryProcessingTechnologyStudyofCorydalisdecumbentisRhizoma

ZHANG Shuang1，LI Yao2，3，ZHPNG Xiao-hong1，ZENG Jian-guo1，2，3*

(1.HunanAgricuturalUnivesity，Changsha410128，China；2.NationalChineseMedicinalHerbs(Hunan)TechnologyCenter，HunanAgriculturalUniversity，Changsha410128，China； 3.HunanEngneeringResearchCenterofBotanicalExtracts，Changsha410331，China)

Objective：To determine the best preliminary processing method of Corydalis decumbentis Rhizoma by comparing the impact of the different preliminary processing methods on protopine，palmatine chloride and tetrahydropalmatine in this traditional chinese medicine.Methods：HPLC method was adapted to quantify the contents of three alkaloids inRhizomaCorydalisDecumbentis.Contents of the three alkaloids originated from different drying methods，ie.，dried in the sun，dried in the shade and dried at diferent temparatrue were compared to determine the best preliminary processing method.Results：The contents of index components in Corydalis decumbentis Rhizoma dried by the above methods had obvious difference.The one dried in the sun at 30 ℃ has the highest content of three index components.Conclusion：This study indicated that the best preliminary processing procedures of Corydalis decumbentis Rhizoma is excavating after emergence in spring or early summer→removing stems，leaves and fibrous roots→washing or wiping→drying in the sun at 30 ℃.

Corydalis decumbentis Rhizoma；Protopine；Palmatine chloride；Tetrahydropalmatine；Preliminary processing method

2013-07-17)

國家科技支撐計(jì)劃(No.2012BA129B04，No.SQ2010BAJY1411)

*

曾建國，博士，教授，研究方向：中藥資源及其綜合利用，Tel：(0731)84673824，E-mail：ginkgo@world-way.net