田 金，王 雄

減輕缺血再灌注損傷是臨床研究的重要課題［1］，腺苷對減輕缺血再灌注損傷國外有較多報道。而AMP579對減輕缺血再灌注損傷文獻報道較少。本課題組制備在體大鼠缺血再灌注模型，比較AMP579和腺苷對減輕心肌缺血再灌注損傷的作用。觀察兩藥對心肌細胞凋亡的影響和作用機制。

1 材料與方法

1．1 動物與試劑 健康雄性 Wister大鼠64只由山西醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心提供，體重220g～250g；腺苷為Arnresco公司。紅四氯唑（TTC）。Evans藍（上海申能－德泰診斷技術(shù)有限公司）；TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒。核轉(zhuǎn)錄因子（NF－κB）免疫組化檢測試劑盒（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）。

1．2 模型分組 以20%烏拉坦（5mL／kg）腹腔麻醉，開胸暴露心臟，結(jié)扎左前降支冠狀動脈（LAD），隨機將64只大鼠分組，每組16只。假手術(shù)組：開胸不結(jié)扎冠脈，麻醉150min；缺血再灌注組（I／R組）：結(jié)扎30min再灌注120min；腺苷組：結(jié)扎30 min，靜滴腺苷305μg／（kg·min），持續(xù)5min，再灌注120min。AMP579組：結(jié)扎30min，靜滴 AMP579 305μg／（kg·min），持續(xù)5min，再灌注120min。AMP579組，再灌注前經(jīng)股靜脈靜滴AMP579 305μg／（kg·min），持續(xù)5min［2］。

1．2．1 心肌梗死范圍測量 實驗終止后將LAD重新阻塞，左心室內(nèi)推20%Evans藍2mL，2min后迅速剪下心臟，分離缺血區(qū)和非缺血區(qū)，壞死區(qū)和非壞死區(qū)［2］。

1．2．2 心肌細胞凋亡檢測 取缺血區(qū)心肌組織置于10%中性甲醛液中，固定48h，乙醇脫水［2］。

1．2．3 免疫組化檢測NF－κB水平 應(yīng)用TUNEL法，免疫組化染色NF－κB均在細胞漿及胞核內(nèi)表達，陽性反應(yīng)為棕黃色或黃色，用Image－Proplus型全自動醫(yī)學(xué)圖像彩色分析系統(tǒng)測定陽性目標(biāo)的平均光密度值，并計算其均值作為代表值［2］。

1．3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS13．0統(tǒng)計分析軟件，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。兩組資料比較用q檢驗，多組資料之間比較用方差分析。

2 結(jié) 果

2．1 心肌梗死范圍 腺苷組和AMP579組梗死范圍明顯低于I／R組。詳見表1。

表1 各組大鼠心肌梗死范圍比較（±s）

表1 各組大鼠心肌梗死范圍比較（±s）

與假手術(shù)組比較，1）P＜0．01；與I／R組比較，2）P＜0．01；與腺苷組比較，3）P＜0．05

組別 動物數(shù)（只） 心肌梗死范圍（%）假手術(shù)組8 0 I／R組 8 37．11±2．761）腺苷組 8 21．87±1．291）2）AMP579組 8 18．96±1．191）2）3）

2．2 心肌細胞凋亡 與假手術(shù)組比較，I／R組心肌細胞凋亡率明顯增高。與I／R組相比，腺苷組與AMP579組心肌細胞凋亡率明顯降低，且AMP579組明顯低于腺苷組。詳見表2。

表2 各組大鼠心肌細胞凋亡率及NF－κB表達比較（±s）

表2 各組大鼠心肌細胞凋亡率及NF－κB表達比較（±s）

與假手術(shù)組比較，1）P＜0．01；與I／R組比較，2）P＜0．01；與腺苷組比較，3）P＜0．05

組別 動物數(shù)只細胞凋亡率‰NF－κB平均光密度值假手術(shù)組 8 7．74±1．010．073±0．013 I／R組 8 439．83±13．931） 0．416±0．0641）腺苷組 8 312．57±11．931）2） 0．250±0．0531）2）AMP579組 8 268．33±10．841）2）3） 0．169±0．0121）2）3）

2．3 免疫組化檢測NF－κB水平 假手術(shù)組僅在胞漿中有少量表達，I／R組于胞漿和胞核中均有明顯表達，說明有部分NF－κB在活化過程中轉(zhuǎn)移到核內(nèi)，而腺苷組與AMP579組在胞漿和胞核中的表達均有不同程度的減少。詳見表2。

3 討 論

腺苷和AMP579均可減輕缺血再灌注損傷，縮小梗死面積，其作用機制包括抑制細胞介導(dǎo)的脫顆粒及黏附反應(yīng)與血小板聚集、抑制鈣超載、擴張血管等［3］。其對細胞凋亡的抑制作用文獻報道較少。

NF－κB是哺乳動物細胞中的轉(zhuǎn)錄因子，參與機體炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)、細胞分化與凋亡及其他應(yīng)激反應(yīng)［4］。心肌NF－κB表達增強將加重心肌細胞凋亡。心肌缺血再灌注過程中產(chǎn)生大量的各種活性氧及炎癥介質(zhì)導(dǎo)致NF－κB的激活，加重心肌損傷。

本研究發(fā)現(xiàn)，AMP579和腺苷均可減輕心肌缺血再灌注損傷，縮小梗死面積。AMP579的作用更強。其縮小梗死面積的程度與抑制NF－κB程度有關(guān)。AMP579的抑制作用更強。說明心肌缺血再灌注損傷NF－κB表達水平與細胞凋亡密切相關(guān)［5］。這也為AMP579減輕缺血再灌注損傷提供了實驗依據(jù)，而NF－κB誘導(dǎo)凋亡的信號轉(zhuǎn)錄途徑有待進一步研究。

［1］ Van Domburg RT，Sonnenschein K，Nieuwlaat R，et al．Substained benifie 20years after reperfusion therapy in acute therapy in acute myocardial infarction［J］．J Am Coll Cardiol，2005，46：15－20．

［2］ 李曉京，王雄．腺苷后處理對缺血再灌注心肌凋亡的影響［J］．中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2009，7（3）：302－303．

［3］ Zhao ZQ，Clark KL，Wang NP，et al．Comparison of AMP579and adenosine in inhibition of cell－cell interaction between human neutrophic and vascular endothelid cell［J］．Drug Devel Res，2000，49：266－272．

［4］ Abraham E，NF－kappaβactivation［J］．Crit Care Med，2000，28（4Suppl）：N100－N104．

［5］ Zingareli B，Hake PW，Denenbery A，et al．Sesquiterpene lactone parthenolide，an inhibitor of I kappa B kinase complex and nuclear factor－kappa B，exerts beneficial effects in myocardial reperfusion injury［J］．J Shock，2002，17（2）：127－134．