張卓 李志剛

黃芪總苷對SCC15口腔癌細胞活力的影響及機制

張卓 李志剛

目的 探討黃芪總苷對SCC15口腔鱗狀癌細胞活力的抑制作用及機制。 方法 將不同濃度黃芪總苷(100, 200, 400 μg/ml)作用于SCC15口腔癌細胞, 72 h后以噻唑藍比色法檢測各組細胞活力, Western blot法檢測細胞凋亡抑制蛋白Survivin的表達。結(jié)果 黃芪總苷可劑量依賴性地抑制SCC15口腔癌細胞活力。不同濃度黃芪總苷均可抑制Survivin在SCC15細胞中的表達, Survivin的表達隨黃芪總苷濃度增加而減少。 結(jié)論 黃芪總苷可能通過抑制Survivin表達而降低SCC15口腔癌細胞活力。

黃芪總苷；SCC15細胞；細胞活力；Survivin

黃芪可提高機體免疫力, 具有補中益氣、升陽固表等功效, 是常用的補益類中藥, 也是腫瘤患者扶正固本方劑中的常用藥物［1］?，F(xiàn)代研究表明, 黃芪總苷是黃芪的主要有效成分之一, 可誘導(dǎo)人急性早幼粒細胞、子宮內(nèi)膜癌細胞、肝癌細胞以及肺腺癌等細胞凋亡［2-5］, 但黃芪總苷對口腔癌細胞的影響及機制尚不明確。因此, 本研究擬探討黃芪總苷對SCC15口腔癌細胞的影響及分子機制, 以期為口腔癌的臨床用藥提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料及儀器 SCC15口腔鱗狀癌細胞株(中科院上海細胞庫), 胎牛血清及DMEM培養(yǎng)基(Gibco公司), 黃芪總苷(純度≥98%, 南京廣潤生物制品有限公司), 噻唑藍(MTT, 南京建成生物工程研究所), Survivin抗體(Santa公司), 酶標儀(北京普郎克公司)。

1.2 實驗分組 DMEM培養(yǎng)基中添加10%胎牛血清培養(yǎng)SCC15細胞, 對照組不添加處理因素, 黃芪總苷處理組分別給予終濃度為100, 200, 400 μg/ml的黃芪總苷。按1×104/孔的密度將SCC15細胞接種于96孔細胞培養(yǎng)板。

1.3 MTT法檢測SCC15細胞存活率 細胞分組培養(yǎng)72 h,換無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)4 h, 向每孔加入20 μl MTT(濃度為5 mg/ml)作用4 h, 棄去96孔板內(nèi)液體, 加入150 μl二甲亞砜振蕩10 min, 酶標儀上以490 nm波長檢測各孔吸光度, 細胞活力=(檢測組吸光度/對照組吸光度)×100%。

1.4 Western blot檢測Survivin蛋白表達 收集分組培養(yǎng)72 h的SCC15細胞, 粉碎細胞后以4℃ 12000 r/min離心15 min, Brafford法檢測并調(diào)節(jié)上清液中蛋白質(zhì)濃度, SDS-PAGE電泳蛋白, 將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜, 以Survivin蛋白及β-actin一抗室溫下分別孵育3 h, 再以辣根過氧化物酶標記的二抗孵育1 h, 利用增強化學(xué)發(fā)光法顯影。以β-actin為內(nèi)對照, 觀察Survivin蛋白表達。

2 結(jié)果

2.1 黃芪總苷對SCC15細胞活力的影響 不同濃度黃芪總苷均可抑制SCC15細胞活力, 濃度為100、200及400 μg/ml的黃芪總苷處理SCC15細胞72 h后, 細胞活力分別為(69.58±9.46)%、(61.31±4.38)%及(48.47±6.83)%, 細胞活力均明顯低于對照組, 呈劑量依賴性(均為P＜0.01)。

2.2 黃芪總苷對SCC15細胞Survivin蛋白表達的影響 Western blot檢測顯示, 黃芪總苷可抑制SCC15細胞Survivin蛋白表達, 呈明顯的劑量依賴性, Survivin的表達隨黃芪總苷濃度增加而減少(圖1)。

圖1 Survivin蛋白表達變化A組：對照組；B組：黃芪總苷100 μg/ml；C組：黃芪總苷200 μg/ml；D組：黃芪總苷400 μg/ml

3 討論

口腔癌是頜面部常見的黏膜上皮腫瘤, 多發(fā)于40～60歲人群, 發(fā)病部位以舌、頰、牙齦以及腭部最多見, 病理類型以鱗狀細胞癌最常見, 約80%左右［6］?？谇话┰缙谝跃植苛馨徒Y(jié)轉(zhuǎn)移為主, 晚期可發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移。該病惡性度較高,目前的治療仍以早發(fā)現(xiàn), 早診斷, 早治療等措施為主, 仍無有效治療手段。

黃芪是傳統(tǒng)的補益類中藥, 具有補中益氣、升陽固表等功效, 現(xiàn)代藥理學(xué)證實黃芪具有抗衰老、提高機體免疫力等功能, 是腫瘤患者扶正固本方劑中的常用藥［1］。黃芪總苷是黃芪的主要有效成分之一, 可誘導(dǎo)人急性早幼粒細胞NB4細胞、子宮內(nèi)膜癌KLE細胞、肝癌BEL-7402細胞以及肺腺癌A549等細胞凋亡［2-5］, 本研究也發(fā)現(xiàn), 黃芪總苷可明顯抑制SCC15口腔鱗狀細胞癌的活力, 且黃芪總苷濃度越高, 腫瘤細胞活力越低, 對細胞的抑制作用越明顯, 呈劑量依賴性。Survivin是一種重要的凋亡抑制因子, Survivin的表達上調(diào)是口腔鱗狀細胞癌發(fā)生發(fā)展的重要機制之一［7］。本研究發(fā)現(xiàn),黃芪總苷可劑量依賴性地抑制Survivin在SCC15口腔鱗狀細胞癌中的表達, Surivivin的表達減少與SCC15細胞活性降低趨勢一致。因此, 黃芪總苷可能通過抑制Survivin表達降低了SCC15細胞活力。盡管本研究仍有許多問題有待進一步探討, 但本文對于揭示黃芪總苷在口腔鱗狀細胞癌治療中的作用具有重要意義。

［1］ 孫燕, 洪婉君, 鄧健, 等. 扶正中藥治療腫瘤患者的10年隨訪觀察. 中西醫(yī)結(jié)合雜志, 1987, 7(12):712-714.

［2］ 謝晶, 夏瑞祥. 黃芪總苷誘導(dǎo)NB4凋亡過程中死亡受體通路分子變化. 安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報, 2013,48(1):12-15.

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［4］ 黃熠, 胡火珍. 黃芪總苷對肝癌BEL-7402細胞株的抑制作用.時珍國醫(yī)國藥, 2011,22(5): 1261-1262.

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［7］ Marioni G, D'Alessandro E, Bertolin A, et al. Survivin multifaceted activity in head and neck carcinoma: current evidence and future therapeutic challenges. Acta Otolaryngol. 2010,130(1):4-9.

121000 遼寧醫(yī)學(xué)院附屬二院口腔修復(fù)科

李志剛 E-mail：zgli700103@yahoo.com.cn