石亮程，賀 駿，何 玲，王 偉 (湖南省長沙市婦幼保健院，湖南 長沙 410007)

子宮頸癌是常見的婦科生殖系統(tǒng)腫瘤之一，其病死率僅次于乳腺癌。而子宮頸癌是目前癌癥中唯一病因明確的癌癥，HPV確認為引發(fā)子宮頸癌的根本性致病因子。筆者于2008年11月～2012年11月對13 542例婦女進行HPV感染的檢測，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料:選擇2008年11月～2012年11月在我院門診或住院的女性患者共計13 542例，年齡最小15歲，最大85 歲，平均(32.5 ±9.25)歲。

1.2 儀器與試劑:儀器選擇博日PCR擴增儀和德國Biometra PCR擴增儀，HPV檢測系統(tǒng)(潮州凱普，含HPV－DNA提取試劑盒、HPV－DNA擴增試劑盒、醫(yī)用快速雜交儀、HPV檢測試劑盒)

1.3 采集和處理:由臨床專科醫(yī)師進行采取:暴露宮頸，用棉拭子擦去宮頸口多余分泌物，用取樣刷置于宮頸口順時針方向旋轉(zhuǎn)5～6周以獲取足量的宮頸脫落上皮細胞。將取樣后的宮頸刷放入含有細胞脫洗保存液專用采集管中，于3 d內(nèi)進行檢測。DNA的提取:將宮頸細胞保存液充分震蕩混勻，取500 μl保存液于高溫滅菌處理1.5 ml離心管中以14 000 r/min離心5 min，棄上清液;加入Ⅰ液400 μl，充分混勻，100℃金屬浴15 min后，加入提取液Ⅱ400 μl，充分混勻，14 000 r/min 離心 5 min，去上清;再14 000 r/min離心2 min，完全除去殘余的上清液，打開蓋子5～10 min，以讓Ⅱ液充分揮發(fā)，加入 Ⅲ液60 μl充分混勻.加上清1 μl于已分裝擴增試劑的擴增管中(擴增管內(nèi)為22.75 mix液加 0.75 Taqman)。

DNA的擴增:95℃預(yù)變性9 min;95℃20 s→55℃30 s→72℃30 s共40個循環(huán)，72℃延伸5 min。

DNA的雜交:將雜交膜封好后調(diào)節(jié)雜交儀溫度到45℃，加入已45℃預(yù)溫雜交液 800 μl預(yù)雜交2 min，排盡，加入已45℃溫浴雜交液500 μl，將擴增產(chǎn)物100℃金屬浴5 min后于冰水浴中2 min，將其全部加入對應(yīng)的雜交液中雜交10 min，排盡雜交液，調(diào)溫至25℃加入500 μl封阻液預(yù)封阻，排盡，加入 500 μl封阻液封阻 5 min，排盡，加入酶標(biāo) 500 μl 4 min，排盡，用A液洗滌膜4次，調(diào)溫至36℃，加入顯色液顯色5 min，加入B液洗滌膜條，判讀結(jié)果。

1.4 結(jié)果判斷:肉眼觀察檢測結(jié)果，當(dāng)兩個質(zhì)控點出現(xiàn)時若相應(yīng)位置出現(xiàn)斑點即為對應(yīng)的陽性，多個斑點的出現(xiàn)則為多重感染。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析:采用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV分型:13 542例檢測者中共4 365例感染HPV，總感染率為32.23%，其中高危型感染率為24.20%，低危為8.03%，其中高危感染者中多重感染所占比例為22.31%，數(shù)據(jù)詳見表1。

表1 HPV感染

2.2 HPV亞型分布:各種基因型均有檢測，感染率最高的型別為52(16.3%)其他常基因型分布:16(14.9%)，58(11.3%)，6(8.4%)，11(7.4%)，33(5.5%)，CP8304(6.00%)，68(5.2%)，53(5.1%)數(shù)據(jù)見表2。

表2 HPV亞型分布

2.3 HPV年齡分布:按檢測者的年齡不同，共分為4個組，年齡不明不列入統(tǒng)計數(shù)據(jù)，HPV感染數(shù)據(jù)見表3。

表3 HPV感染年齡分布

2.4 HPV不同年份的感染分析:數(shù)據(jù)見表4。

表4 各年HPV感染數(shù)據(jù)

2.5 高危亞型多重感染情況:3 277例高危感染中單一感染為2 546例，占77.7%;多重感染731例，占22.3%，主要以雙重感染為主，以高危型和混合型多見，結(jié)果見表5。

表5 HPV高危型單一感染與多重感染

3 討論

筆者利用導(dǎo)流雜交技術(shù)檢測13 542例患者中HPV感染4 365例，總感染率為32.23%，其中高危型感染率為24.20%，低危型感染率8.03%?？偢腥韭实陀谡憬_州的35.08%和北京的57.1%，但高于重慶北部地區(qū)的21.3%和呼和浩特地區(qū) 13.04%［1］。

各種基因型均有檢測，其中感染率最高的型為52，占陽性標(biāo)本中的16.67%，這與多數(shù)亞洲國家研究結(jié)果基本一致。其他常見的高危型16、18、33、58。與其他地區(qū)如:成都農(nóng)村常見型為 52、16、58、33、53、18，68，53，而北京常見型則為 16、58、52、53、33，重慶北部則以 16、43、52、33 為常見型別。這表明HPV感染其基因型有明顯的人群及地域區(qū)別［2］。不同亞型HPV感染對宮頸細胞惡性病變的發(fā)生、發(fā)展有不同的影響，故對亞型的統(tǒng)計是必要的［1］。

在年齡分組數(shù)據(jù)中高危型感染率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，本數(shù)據(jù)與山西對子宮頸癌高發(fā)區(qū)30～50歲女性HPV感染調(diào)查結(jié)論一致。而＜30歲組低危型感染率明顯高于其他各組，這與年輕女性性生活活躍、性觀念開放有一定的關(guān)聯(lián)。

在年度分組中，后2年的感染率比前2年感染率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，但其檢測量有明顯的上升，這與科學(xué)技術(shù)發(fā)展、網(wǎng)絡(luò)應(yīng)用、科普知識的廣泛宣傳、人的保健意識覺醒、自我衛(wèi)生意識加強等存在密切關(guān)系。在因其他原因就診婦科時，往往主動要求檢測HPV。

本研究發(fā)現(xiàn)，HPV感染以單一為主，占77.69%，多重感染率為22.34%，低于陶萍萍的44.35%［3］。多重感染中以二重感染為主，＜30歲組和＞50歲組主危陽性中多重感染率與其他兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，數(shù)據(jù)見表3。這可能與30歲以下人群性觀念有關(guān)。而＞50歲組人群則是因為宮頸病變就醫(yī)，其以陽性人群為主，進行HPV檢測。多重感染應(yīng)引起臨床醫(yī)師的重視，加強對其的治療和隨訪。

綜上所述，長沙地區(qū) HPV高危感染基因52、16、18、33、58、68、53最為常見，而低危型則以6、11及CP8304為主，基本符合亞洲人群分布，但有其一定的地域性特點。這為長沙地區(qū)宮頸癌的防治、HPV疫苗的使用提供了科學(xué)的參考依據(jù)。

［1］楊曉華，秦曉紅，夏鳳英，等.成都農(nóng)村地區(qū)女性宮頸HPV感染基因型別分布狀況［J］.中國醫(yī)療前沿，2012，7(3):82.

［2］烏蘭娜，吳瑞芳，周艷秋，等.人乳頭瘤病毒基因亞型與宮頸病變的關(guān)系［J］.中國婦產(chǎn)科臨床雜志，2005，6(5):346.

［3］陶萍萍，張國榮，卞美璐，等.婦科門診21種人乳頭瘤病毒感染狀況分析［J］.中日友好醫(yī)院學(xué)報，2008，22(2):208.