巫應(yīng)強

犬瘟熱是由犬瘟熱病毒（CDV）引起的高度接觸性傳染病，危害極大。CDV結(jié)構(gòu)蛋白的一些特性決定著它的感染力，同時其細胞受體也在感染中起關(guān)鍵作用。CDV感染引起動物上皮細胞、淋巴細胞病變和神經(jīng)系統(tǒng)損傷，由此出現(xiàn)犬瘟熱特征性癥狀。CDV血清學(xué)檢測是當(dāng)前臨床上最常用、最主要的確診方法，分子生物學(xué)診斷方法也越來越顯示出很多優(yōu)點。疫苗免疫是最有效的預(yù)防犬瘟熱的方法，特異性療法和中西醫(yī)結(jié)合則是治療犬瘟熱較有效的途徑。為呈現(xiàn)犬瘟熱的最新研究進展，在前人深入研究的基礎(chǔ)上就犬瘟熱的病原、流行病學(xué)、臨床癥狀、病理變化、發(fā)病機理、診斷和防治等七個方面進行了綜述。

犬瘟熱最早報道于1809年，1905年由Carre首次確診，是由犬瘟熱病毒（Canine distemper virus，CDV）引起的高度接觸性傳染病，可使以犬科為代表的多種動物呈急性、敗血性發(fā)病，進而造成機體多系統(tǒng)損傷，死亡率較高。犬瘟熱持續(xù)在全世界廣泛發(fā)生，傳染性極強，一直以來沒有特效治療藥物，成為危害養(yǎng)犬業(yè)的最大疾病之一。因此，深入研究本病具有重要意義。

一、病 原

（一）病毒分類與基本形態(tài)、結(jié)構(gòu)

CDV屬副粘病毒科，副粘病毒亞科，麻疹病毒屬。同屬成員中，麻疹病毒與其親緣關(guān)系最近。CDV呈多形性，多數(shù)為圓形，有時呈長絲狀；由15616個核苷酸組成，分子質(zhì)量為6×106u；直徑100nm～550nm，多數(shù)在150nm～330nm之間。CDV結(jié)構(gòu)蛋白有核衣殼蛋白（Nucleocapsid protein gene，N）、磷蛋白（Phosphoprotein gene，P）、基質(zhì)膜蛋白（Matrix protein gene，M）、融合蛋白（Fusion protein gene，F(xiàn)）、附著或血凝蛋白（Attachment protein gene，H）和大蛋白（The large virus specified RNA directed RNA polymerase protein gene，L）等6種。CDV核衣殼為螺旋形，直徑約15nm～19nm，主要由N蛋白構(gòu)成，P蛋白、L蛋白也是其成分。有囊膜及纖突，囊膜內(nèi)部為M蛋白，纖突長約1.3nm，由H和F兩種糖蛋白構(gòu)成?；蚪M為負鏈單股RNA，基因順序依次為3’端前導(dǎo)序列（3’ leader se-quence）、N、P、M、F、H、L及5’端前導(dǎo)序列（5’ trailer sequence）。

（二）結(jié)構(gòu)蛋白特性

N蛋白含量最高，可與L蛋白、P蛋白共同形成CDV基本感染單位，造成持續(xù)性感染；還能引起體液免疫與細胞免疫，具有良好的抗原性。P蛋白保守性差，能與L蛋白共同形成聚合酶，在病毒復(fù)制方面起重要作用。M蛋白是非糖基化表面蛋白，可影響病毒的裝配和出芽，與慢性持續(xù)性感染有關(guān)。F蛋白介導(dǎo)病毒和細胞膜融合，從而使CDV進入宿主細胞達成感染；可通過誘導(dǎo)免疫反應(yīng)阻止病毒感染，在有病毒增殖的情況下抑制癥狀的產(chǎn)生。H蛋白決定病毒組織嗜性和宿主特異性，協(xié)助F蛋白進入宿主細胞；是誘導(dǎo)機體產(chǎn)生中和抗體的主要蛋白之一。F蛋白和H蛋白在感染過程中缺一不可。L蛋白則是多功能的酶單位，參與基因組的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制。

（三）CDV細胞受體

受體是宿主細胞表面的生物分子，具有與病毒吸附蛋白產(chǎn)生特異性吸附的功能。特異性吸附是病毒在宿主體內(nèi)復(fù)制、感染的重要一步。因此受體對病毒的組織嗜性和宿主特異性也有決定性作用。當(dāng)CDV與宿主細胞接觸，受H蛋白和F蛋白共同作用，吸附在宿主細胞的受體上，與細胞膜發(fā)生融合，成功進入細胞內(nèi)。CDV基因組又受P蛋白、L蛋白等的共同作用而開始復(fù)制，形成合胞體，進而開始新的增殖循環(huán)，最終造成細胞病變（cytopathic effect，CPE）。

（四）抵抗力

CDV對熱、干燥和紫外線敏感。-70℃條件下可存活多年，0℃以上迅速喪失感染力，室溫可存活數(shù)天，55℃1h或60℃30min可滅活。在剛從活體分離的組織或分泌物中可存活至少3h。凍干可長期保存。pH4.5～pH9.0條件下可存活，以pH7.0為最宜。可見光易滅活。CDV對乙醚、氯仿等有機溶劑敏感，3%甲醛溶液、3%氫氧化鈉溶液、5%石炭酸溶液及漂白粉等對其殺滅作用良好?？傊?，CDV對環(huán)境抵抗力較弱。

二、流行病學(xué)

CDV的宿主范圍除包括了大部分的食肉目動物，如犬科（犬、澳洲野犬、狐貍、貉、豺、狼），鬣狗科，鼬科（雪貂、水貂、獾、臭鼬、黃鼠狼、黃鼬、白鼬、獾臭鼬、水獺），浣熊科（浣熊、蜜熊、小熊貓、白鼻熊），貓科（虎、豹、獅），小熊貓科和靈貓科等外，還包括鰭足目海豹科，偶蹄目豬科等多種動物，獼猴等靈長類動物及大熊貓等珍稀野生動物也有自然發(fā)病的報道。當(dāng)然，犬是主要的宿主。

此病四季均可發(fā)生，以溫冷季節(jié)多發(fā)。狐、貂養(yǎng)殖場可自然流行。各種品種、年齡、性別均可感染，純種犬易感性高，2～12月齡幼犬最易感，2歲以上發(fā)病率低?；疾游?、帶毒動物是傳染源，病毒存在于淋巴結(jié)、呼吸道、眼鼻分泌物、體液、血液及排泄物等中，并主要通過分泌物和排泄物向外排毒，動物康復(fù)后也可長時間向外排毒?？芍苯雍烷g接接觸傳播?？山?jīng)交配傳播，也可經(jīng)胎盤感染，康復(fù)犬可獲終生免疫。

三、臨床癥狀

犬瘟熱潛伏期一般為3d～6d，病初極似感冒癥狀，眼結(jié)膜潮紅、水樣分泌物，上呼吸道感染。厭食、喜臥，體溫升高持續(xù)約2d。以后體溫下降至正常，病犬感覺良好，食欲恢復(fù)。2d～3d后體溫再次升高，可持續(xù)數(shù)周，呈“雙相熱”。其間眼鼻分泌物逐漸轉(zhuǎn)為粘液性、膿性，發(fā)臭，形成化膿性結(jié)膜炎，?？砂l(fā)生角膜潰瘍。犬精神沉郁，不食，繼發(fā)肺炎等。部分犬出現(xiàn)嘔吐、腹瀉，或致膿血便；鼻鏡、眼臉干燥或至龜裂，或于腹下、四肢內(nèi)側(cè)出現(xiàn)紅色丘疹，稱為犬瘟熱皮疹。急性病例可于10d～20d出現(xiàn)鼻部及腳墊高度角化，慢性病例病程可達1月以上，以消化道癥狀為主。

神經(jīng)癥狀多在感染后的3～4周或全身癥狀好轉(zhuǎn)后7d～21d出現(xiàn)，但也有部分犬剛開始發(fā)熱就會出現(xiàn)——如此則多數(shù)1d～2d即死亡；經(jīng)胎盤感染的幼犬可在4～7周齡出現(xiàn)，且成窩發(fā)作。咬肌反復(fù)節(jié)律性顫動是最常見的癥狀，不自主地吠叫、癲癇癥狀、輕癱、共濟失調(diào)等癥狀也為臨床所常見。神經(jīng)癥狀不可逆，病愈也會留下后遺癥，同時也是重要的預(yù)后指標(biāo)。

總之，四種典型臨床癥狀為：雙相熱；化膿性結(jié)膜炎，粘液性、膿性鼻汁；神經(jīng)癥狀；上皮角質(zhì)化（硬腳墊癥等）。

四、病理變化

早期單純性CDV感染，僅有輕度卡他性上皮組織炎癥，淋巴細胞減少，淋巴結(jié)出血、腫脹，腎上腺皮質(zhì)變性，胸腺萎縮。繼發(fā)細菌感染的，可見上呼吸道炎癥、支氣管炎及肺炎。幼犬常以出血性腸炎等消化道病變?yōu)橹?，脾臟和膀胱黏膜出血，組織學(xué)檢查，可于上皮細胞、肝細胞及腎盂中發(fā)現(xiàn)包涵體。

神經(jīng)系統(tǒng)損傷主要發(fā)生在脊髓、腦干、小腦、大腦等部位，神經(jīng)細胞腫脹變性，周圍水腫。非化膿性腦膜炎，腦脊髓白質(zhì)脫髓鞘炎，腦萎縮。腦血管周圍單核細胞聚集呈“管套”現(xiàn)象。

急性感染的，在部分大腦灰質(zhì)區(qū)域觀察到小膠質(zhì)細胞靠近神經(jīng)元胞體的現(xiàn)象——嗜神經(jīng)現(xiàn)象，出現(xiàn)典型的犬瘟熱多核巨細胞性肺炎、淋巴結(jié)炎。貉、狐貍、水貂以全身臟器出血性變化為特征，病變嚴重程度從高到低依次為貉、狐貍、水貂。

五、發(fā)病機理

CDV為泛嗜性病毒,但親嗜性最強的是上皮細胞和淋巴細胞，從天然途徑的上呼吸道，散播到支氣管淋巴結(jié)和扁桃體，經(jīng)2d～4d的增殖，由淋巴細胞帶入血流產(chǎn)生毒血癥，動物出現(xiàn)體溫升高癥狀。病毒進而散布到全身淋巴結(jié)、上皮組織固有膜和骨髓，再次產(chǎn)生毒血癥，出現(xiàn)第二次體溫升高，呈現(xiàn)雙相熱。病毒損害多個系統(tǒng)的上皮細胞而出現(xiàn)鼻鏡、腳墊硬化等特征性癥狀。犬瘟熱很少單獨發(fā)生，極易引發(fā)的繼發(fā)感染使動物死亡率增高。

CDV經(jīng)腦脊液進入或由淋巴細胞攜帶跨過血腦屏障而進入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，增殖后使神經(jīng)元和腦白質(zhì)、灰質(zhì)受損，引起神經(jīng)系統(tǒng)病變。研究表明，犬瘟熱導(dǎo)致的腦炎與快速的神經(jīng)元損失和局部免疫激活相關(guān)。

CDV是首個報道的可引起動物肥胖癥的病毒。劉玉秀等推斷CDV引起嚙齒動物肥胖癥的機制可能為：CDV在下丘腦中增殖，病毒基因的表達破壞了中樞神經(jīng)系統(tǒng)的平衡，影響了體內(nèi)參與能量調(diào)節(jié)和食物消耗的一些因子的表達，最終導(dǎo)致肥胖癥。

六、診 斷

犬瘟熱常存在繼發(fā)感染，一旦發(fā)病多預(yù)后不良，因此早診斷是關(guān)鍵。根據(jù)流行病學(xué)、臨床癥狀和病理變化只能做出初步判斷，將臨診資料與實驗室檢測結(jié)果相結(jié)合才能確診。

（一）病原學(xué)診斷方法

1.病毒的分離培養(yǎng)

CDV分離培養(yǎng)是實驗室檢測的基礎(chǔ)，然而分離成功率卻較低，其關(guān)鍵在于所選用的細胞是否對病毒敏感。用于分離、培養(yǎng)CDV的原代細胞有雞胚成纖維細胞（CEF）、犬或貂的肺和腹腔巨噬細胞、腎細胞、胚胎細胞、外周血淋巴細胞、T淋巴細胞、犬腦細胞（DBCC）等；傳代細胞系有非洲綠猴腎細胞系（Vero）及其克隆株（Vero E6）、絨猴B淋巴細胞系（B95a）、人子宮頸癌細胞系（Hela）、犬腎細胞系（MDCK）、貓腎細胞系（CRFK）等。原代細胞分離CDV的優(yōu)點是快速且能使CDV保持良好的毒力特性，但傳代次數(shù)少，不利于培養(yǎng)。用幼犬或雪貂的肺臟巨噬細胞進行培養(yǎng)最有效，且是初次分離CDV最好的方法，故一般先用其傳代數(shù)次，再轉(zhuǎn)種CEF或Vero等細胞擴增或適應(yīng)。傳代細胞培養(yǎng)中，Vero細胞曾被認為最適宜培養(yǎng)CDV，所獲得的CDV的毒價最高，病變最明顯，但這些細胞并不表達CDV感染的受體SLAM，因此分離得到的CDV，短時間不出現(xiàn)明顯的CPE。構(gòu)建穩(wěn)定表達受體SLAM的Vero-SLAM細胞系則能有效地分離到CDV，并保持良好的致病性。因此，用Vero-SLAM細胞系培養(yǎng)CDV將成為一種發(fā)展趨勢。

2.包涵體檢查法

出現(xiàn)包涵體是CDV感染的標(biāo)志之一。包涵體主要存在于上皮細胞胞漿內(nèi)，一般呈紅色，圓形或橢圓形，直徑1～5um，邊緣清晰。因不易于與其它病毒（如犬傳染性肝炎病毒等）所形成的包涵體準(zhǔn)確區(qū)分，故包涵體的檢查只能是一種重要的輔助性診斷方法。

（二）血清學(xué)診斷方法

1.特異性抗原的檢測

比較實用、靈敏的主要有膠體金抗原檢測法和SPA協(xié)同凝集試驗等。膠體金檢測試紙不需要額外的設(shè)備，檢測靈敏度能達到ng級或與酶聯(lián)免疫吸咐試驗（ELISA）相似,操作簡便快速，極適宜于基層臨床應(yīng)用，但在病毒含量低、活性差的情況下或動物發(fā)病初期會呈假陰性，故其參考價值大于鑒定價值。SPA協(xié)同凝集試驗采樣方便，可直接用糞便和尿液檢查抗原，樣品可長期保存，操作簡便，不需要昂貴的器材，也較易于臨床現(xiàn)場應(yīng)用。

2.特異性抗體的檢測

較常用的主要有血清中和試驗（SN）、ELISA和間接熒光抗體（IFA）染色法等。血清中和試驗一直被作為檢測CDV抗體的標(biāo)準(zhǔn)方法，主要用于免疫監(jiān)測，但診斷工作量大、技術(shù)性強，不利于快速診斷。ELISA特異性、敏感性強，重復(fù)性、穩(wěn)定性好，良好的CDV檢測效果為人們所公認，廣泛應(yīng)用于免疫監(jiān)測和血清檢測研究。IFA較SN和ELISA更易采樣，采購熒光抗體方便，具有成本低、簡便快速、檢出率高的特點，適于CDV早期診斷，是國際上公認的好方法。

血清學(xué)方法是當(dāng)前臨床上最常用、最主要的檢測方法。

（三）分子生物學(xué)診斷方法

隨著科研水平的提高和儀器設(shè)備的不斷更新，近年來，核酸雜交、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase chain reaction，PCR）及更進一步的基因芯片（gene chip，DNA chip，cDNA microarray）技術(shù)等分子生物學(xué)方法已逐步成為實驗室常規(guī)檢測技術(shù)。

1.核酸雜交技術(shù)

核酸雜交技術(shù)利用堿基互補原理檢測目的核酸片段，以驗證其是否與目的病毒特有的核酸片段相同。特異性強、敏感性高是其優(yōu)點，但操作繁瑣，技術(shù)含量要求高，不利于臨床推廣。

2.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

PCR技術(shù)是在熱穩(wěn)定DNA聚合酶和特異性引物的作用下將極少量核酸模板高倍放大的一種體外核酸擴增技術(shù)，具有高度敏感、特異性強、準(zhǔn)確和標(biāo)本易于采集等優(yōu)點。熒光定量RT-PCR（TaqMan RTPCR）將PCR檢測與熒光信號相結(jié)合，敏感性比常規(guī)的RT-PCR方法高100倍，同時具有操作簡便、準(zhǔn)確定量、結(jié)果直觀、重復(fù)性好、特異性強、污染低以及可同時檢測大量樣品等優(yōu)點，但操作技術(shù)含量要求高，所需儀器設(shè)備昂貴，適合在檢疫單位、海關(guān)及大型寵物醫(yī)院應(yīng)用。SYBR Green I熒光定量RTPCR（SYBR Green I Real-time RT-PCR）法的敏感性則比常規(guī)RT-PCR高1000倍。SYBR Green I是一種能插入到雙鏈DNA并發(fā)出強烈熒光的化學(xué)物質(zhì)，其優(yōu)勢在于能監(jiān)測任何雙鏈DNA序列的擴增而無需設(shè)計探針，使檢測變簡便的同時也降低了成本，具有很高的特異性、靈敏度和可重復(fù)性，可在動物發(fā)病的早期和發(fā)病期間很準(zhǔn)確地檢測到CDV。

3.基因芯片技術(shù)

基因芯片又稱DNA芯片、DNA微陣列或生物芯片（Biochip），是指在一塊基片上固定了核酸探針或cDNA片段的微點陣?；蛐酒夹g(shù)以核酸雜交技術(shù)和PCR技術(shù)為基礎(chǔ)，利用計算機系統(tǒng)進行分析和處理，其優(yōu)勢為核酸雜交技術(shù)和PCR技術(shù)所遠不能及——集中體現(xiàn)在全自動化并行檢測、更快速、特異性更強、結(jié)果客觀準(zhǔn)確及消耗更低。臨床實踐證明，基因芯片用于診斷疾病是可行的，并可作為鑒別犬常見傳染病的一種新途徑。芯片制備和檢測費用高，使芯片技術(shù)的開發(fā)和應(yīng)用受到了一定的限制，但診斷基因芯片檢測樣本量越大，成本則越低，適于完成大的檢測任務(wù)，且從長遠看，基因芯片技術(shù)無疑是最有前途的檢測技術(shù)。

當(dāng)臨床上懷疑有CDV感染時，可根據(jù)實際情況在血清學(xué)、分子生物學(xué)檢測方法中選一種或兩種進行確診。

七、防 制

（一）預(yù)防

養(yǎng)殖場最好自繁自養(yǎng)，散養(yǎng)戶應(yīng)盡量減少犬只接觸。引進動物時應(yīng)嚴格隔離觀察、免疫接種。一旦發(fā)生犬瘟熱，除對已發(fā)病動物立即隔離處置外，還應(yīng)對受威脅動物做緊急預(yù)防接種。

1.免疫預(yù)防

疫苗免疫是預(yù)防犬瘟熱的最有效方法，只要按免疫程序接種，均能達到較高保護率。目前使用的疫苗主要有滅活疫苗和弱毒疫苗兩種，以弱毒疫苗應(yīng)用較多。但鑒于“弱毒疫苗存在熱穩(wěn)定性差及對部分免疫缺陷犬和野生食肉動物不安全以及發(fā)生變態(tài)反應(yīng)等”缺點，近年人們已開始研制基因工程亞單位苗、重組活載體苗以及核酸疫苗等新型疫苗，目前均已在實驗室研制成功。

第一次接種疫苗前最好先驅(qū)蟲，接種前后投服維生素，有利于抗體生成。幼犬免疫一般用弱毒苗，斷奶后2～3周（體內(nèi)母源抗體較低時）接種，在犬瘟熱高發(fā)季節(jié)或疫區(qū)，可先接種2～3人份的人用麻疹弱毒凍干苗，2周后再行常規(guī)免疫，可獲得較理想的效果。重復(fù)接種可提高主動抗體水平。此外還可適時喂給利巴韋林、板藍根等抗病毒藥物，進行藥物預(yù)防。

2.免疫監(jiān)測

對受犬瘟熱威脅的動物進行免疫監(jiān)測是必要的。李梅榮等對動物園飼養(yǎng)的大型貓科動物進行免疫監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)所有未免疫動物抗體水平均小于1∶5，說明不存在天然CDV抗體，有進行免疫接種的必要。除白虎外的試驗動物接種疫苗后，抗體水平不同程度地逐步升高，表明疫苗是有效的。

（二）治療

本病目前尚沒有特效治療藥物。早發(fā)現(xiàn)、早治療，預(yù)防繼發(fā)感染，是提高治愈率的關(guān)鍵。增強機體抵抗力，對癥治療，控制神經(jīng)癥狀。犬剛出現(xiàn)類似感冒癥狀時就及時診療，則治愈率較高。同時，良好的護理也非常重要。

1.特異性療法

犬瘟熱病毒單克隆抗體、高免血清、免疫球蛋白、干擾素與抗病毒藥物的聯(lián)合應(yīng)用，對早期病犬有一定的療效。

2.中西醫(yī)結(jié)合

中醫(yī)認為本病是由犬外感瘟疫邪毒，熱毒內(nèi)蘊，傷及脾肺，氣血兩虧，毒入營血引起的，應(yīng)以清熱、解毒、祛邪、扶正為治則。中西醫(yī)結(jié)合治療，以中獸醫(yī)清熱解毒與西醫(yī)特異性療法為主，輔以抗病毒、防繼發(fā)感染藥物和支持療法，則能大大提高犬瘟熱的治愈率。

3.對神經(jīng)病理損害的治療

王訊等提出，可應(yīng)用神經(jīng)保護劑黃體酮（可促進髓鞘的生成并能促進受損傷神經(jīng)細胞的髓鞘形成）和抗氧化劑來對抗活性氧（參與脫髓鞘的病理過程）的毒性作用，降低髓鞘的損傷程度。

八、結(jié) 語

CDV結(jié)構(gòu)蛋白的一些特性決定著它的感染力，同時其細胞受體也在感染中起關(guān)鍵作用。結(jié)構(gòu)蛋白F和H在感染中起主要作用，受體SLAM、HS的發(fā)現(xiàn)則進一步揭示了CDV的感染機理。同時，可能更多的CDV細胞受體還有待于發(fā)現(xiàn)、研究和確認。

CDV對環(huán)境抵抗力弱，多于溫冷季節(jié)引發(fā)犬瘟熱，幼齡動物較易感染，但其宿主范圍已逐漸擴大到多種動物，且犬瘟熱死亡率高，傳染性極強，危害越來越不可小覷。

CDV感染引起動物上皮細胞、淋巴細胞病變和神經(jīng)系統(tǒng)損傷，由此出現(xiàn)硬腳墊癥、雙相熱、咬肌節(jié)律性顫動等犬瘟熱特征性癥狀。同時，犬瘟熱極易引起繼發(fā)感染，進而使死亡率增高，因此對“早發(fā)現(xiàn)、早治療”原則應(yīng)予加倍重視。

CDV血清學(xué)檢測是當(dāng)前臨床上最常用、最主要的確診方法，以基因芯片技術(shù)為代表的分子生物學(xué)診斷方法也越來越顯示出很多優(yōu)點，盡管仍很昂貴，但極可能會成為未來臨床上常用的診斷方法。

由于沒有特效治療藥物，疫苗免疫為主、臨床治療為輔便成為最佳防制原則。實踐證明，疫苗免疫是最有效的預(yù)防犬瘟熱的方法，特異性療法和中西醫(yī)結(jié)合則是治療犬瘟熱的較有效途徑。