羅興權(quán)

犬的繁殖與良種培育是養(yǎng)犬、訓(xùn)犬、用犬工作的前提和基礎(chǔ)。本文簡要綜述了犬精液冷凍和人工授精、發(fā)情調(diào)控、早期妊娠診斷、誘發(fā)分娩、胚胎移植及克隆等繁殖生物技術(shù)的研究概況。

犬繁殖技術(shù)的研究起始于18世紀，意大利生理學(xué)家Spallanzani在1880年首次進行犬人工授精試驗取得了成功，但目前犬繁殖生物技術(shù)的研究遠遠落后于其他哺乳動物。這是因為犬的生殖生理具有獨特性，對其還缺乏準確的了解，這使得犬繁殖生物技術(shù)面臨著一些困難，尤其是卵子和胚胎在體外培養(yǎng)及發(fā)育的效率很低。

犬繁殖生物技術(shù)如人工授精與精液冷凍、誘導(dǎo)發(fā)情、早期妊娠診斷、誘發(fā)分娩、胚胎移植、體外受精等胚胎體外生產(chǎn)技術(shù)以及克隆技術(shù)的應(yīng)用不僅能夠提高良種犬繁殖潛能，還能保存其基因資源及開展基礎(chǔ)研究，因此犬繁殖生物技術(shù)的發(fā)展具有重要意義。

一、人工授精與精液冷凍

犬人工授精技術(shù)是一種代替犬自然交配的繁殖技術(shù)，是在人工輔助下，采集種犬精液、經(jīng)過品質(zhì)檢測和稀釋保存等處理，再將精液輸送到母犬生殖道內(nèi)，使母犬受孕的配種技術(shù)。精液冷凍技術(shù)是指將采集到的新鮮精液，經(jīng)過特殊處理后，利用液氮（-196℃）、干冰（-79℃）或其他冷源，以凍結(jié)形式長期保存精液的技術(shù)。

早在1880年，意大利生理學(xué)家Spallanzani首次用犬進行人工授精試驗取得成功并產(chǎn)下3頭小狗。1959年首次報道了犬的凍精人工授精獲得成功，之后犬精液冷凍已成為犬生殖生理學(xué)研究的一部分。美國養(yǎng)犬俱樂部（American Kennel Club,AKC）在20世紀70年代即花費大量的資金用于犬的冷凍精液和人工授精研究，并詳細制定了冷凍精液生產(chǎn)及人工授精各主要環(huán)節(jié)的操作規(guī)程；同時規(guī)定從1981年起，只有經(jīng)過審驗合格的配種站才有資格提供犬的冷凍精液。在國內(nèi)，禹學(xué)禮等對豫西土狗的冷凍精液和人工授精試驗獲得成功，受胎率最高可以達到57.1%，平均每窩產(chǎn)仔3頭。

二、發(fā)情調(diào)控

發(fā)情調(diào)控是人為地改變母犬發(fā)情狀況的一項繁殖技術(shù)，包括誘導(dǎo)發(fā)情、超數(shù)排卵和同期發(fā)情等。對具有優(yōu)良遺傳性能的母犬，可使用激素催情誘發(fā)排卵，使其在非發(fā)情期妊娠，縮短分娩間隔或改變?nèi)焉飼r間，以提高產(chǎn)仔性能。

犬的發(fā)情周期較為特殊，不同于季節(jié)性一次發(fā)情周期動物，亦不同于全年繁殖的動物。它有一個較長的黃體期(90天左右)，以至于被認為是季節(jié)性一次發(fā)情周期的動物。犬基本上全年可繁殖，只是春秋兩季發(fā)情較集中，稱配種季節(jié)。母犬到了性成熟年齡后和配種季節(jié)到來后仍未見發(fā)情，可采用激素誘導(dǎo)發(fā)情。

三、早期妊娠診斷

目前，犬常用的早期妊娠診斷方法主要有：

(一)外部觀察法 根據(jù)母犬妊娠后行為、體重、乳腺和外生殖器的一系列規(guī)律性變化來判斷是否妊娠。外部觀察法可以早期診斷妊娠，但是其準確率較低，更無法分辨妊娠與假妊娠。

(二)觸診法 經(jīng)腹壁觸診子宮可早期診斷出妊娠，其準確性因犬的性情、大小、妊娠階段、胎兒數(shù)目、肥胖程度以及施術(shù)者的經(jīng)驗而異。

（三）超聲波診斷法 此法是通過線型或扇型超聲波裝置探測胚泡或胚胎的存在來診斷妊娠的方法。最早可以確認胚泡的時間是交配后第l8～19天，此時圖像不十分清楚。交配后第20～22天的圖像清晰，交配后第35～38天可以觀察到胎兒的脊柱。

（四）超聲多普勒法 通過子宮動脈音、胎兒心音和胎盤血流音來判斷是否妊娠的方法。超聲多普勒法在交配后第23天即可以診斷、交配后第25天可以聽到胎兒心音及胎盤血流音，其診斷準確率很高。

（五）激素水平測定法 胚胎附植以后胎盤即產(chǎn)生并分泌雌激素，它有促黃體作用和抗黃體溶解的作用，從而將使激素維持一個較高水平防止子宮收縮和保證胎兒的正常發(fā)育而不致于被排出。所以通過對雌激素水平的測定可用于妊娠診斷。利用激素水平進行犬的妊娠診斷不宜使用孕激素測定法，因為妊娠與未妊娠犬在排卵后都會形成黃體并且都可長時間分泌孕酮，所以外周血的孕酮水平無顯著差異。

（六）腹腔鏡檢查 是指對待檢母犬先進行常規(guī)麻醉、肚臍后24cm腹中線做小切口然后根據(jù)母犬個體大小選擇一定直徑的腹腔鏡筒伸入母犬腹腔觀察母犬是否妊娠以及妊娠情況的一種方法。此種方法不但可用于妊娠診斷還可用于檢查子宮積膿、卵巢囊腫、子宮外孕以及結(jié)扎輸卵管、腹腔取樣等操作。腹腔鏡檢查不影響動物的繁殖力。

（七） 血液學(xué)檢查 犬妊娠期血液容量增加血液成分發(fā)生一系列變化。測定這些變化不僅有助于妊娠診斷而且有助于區(qū)分妊娠與假妊娠。

四、誘發(fā)分娩

據(jù)報道，Moriyoshi等(1999)用fellptalene(一種PGF2a類似物)在母犬妊娠第56～58天以5ug/kg體重進行肌肉注射誘發(fā)分娩，注射后母犬出現(xiàn)流涎、嘔吐、水樣腹瀉和絞痛綜合癥等副作用。Fieni等(2001)用抗孕酮在母犬妊娠第58天以5mg/kg體重進行皮下注射，24小時后每隔2小時注射催產(chǎn)素0.15IU/kg體重，直到分娩結(jié)束。結(jié)果分娩發(fā)生在注射抗孕酮后3l.6小時，產(chǎn)程為4.5小時，產(chǎn)活仔率93.1%，48小時存活率86.21%，與自然分娩相當(dāng)。

五、胚胎移植

1977年最先報道了犬受精卵的移植成功，武石等(1988)首次報道人工誘情移植受精卵并繁育出仔犬。采用犬體內(nèi)來源的胚胎進行胚胎移植已經(jīng)產(chǎn)生了活的后代，但成功率比較低。Tsutsui等(2001)認為犬的胚胎移植受超數(shù)排卵和同期發(fā)情的限制，成功率較低，并且比較了子宮切除法與手術(shù)法這兩種沖胚方式的胚胎回收率，前一種方法顯著高于后一種(97.1%，42.5%)。

六、克隆

韓國科學(xué)家黃禹錫和他的同事歷時兩年半成功地克隆出了世界上首只克隆犬“斯納皮”（Snuppy)，并在2005年8月4日出版的《自然》雜志上發(fā)表了他們的研究成果。Hwang等(2005)將成年阿富汗公獵犬的耳上皮細胞移植到排卵72 h后體內(nèi)成熟的去核卵母細胞卵周隙中，融合激活后將重構(gòu)胚（共1095枚）移入代孕自然發(fā)情母犬（共123頭）的輸卵管或子宮角內(nèi)，其中1頭代孕的拉布拉多獵犬于60天后產(chǎn)下“斯納皮”，另外1頭代孕的雜種母犬產(chǎn)下的克隆狗因肺炎于出生后22天死亡。

犬繁殖生物技術(shù)的發(fā)展比較緩慢，主要是因為犬的生殖生理和其他哺乳動物不同，而且對其研究也比較匱乏。盡管近幾年來對犬繁殖生物技術(shù)的研究逐漸增多，也成功克隆了一頭犬，但目前犬體外胚胎生產(chǎn)以及克隆等技術(shù)由于受到卵母細胞體外成熟率低的影響而受到限制。隨著各種生物技術(shù)的發(fā)展，對犬特有的生殖生理現(xiàn)象與繁殖生物技術(shù)的研究將會更加深入地開展。