顏秀娟

（上饒市第五人民醫(yī)院，江西上饒334000）

葛根素，具有耐缺氧、抗衰老、降血脂等作用，并且體外實(shí)驗(yàn)顯示葛根素對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的凋亡具有保護(hù)作用，可以抑制細(xì)胞凋亡時(shí)自由基的產(chǎn)生[1]。 然而對(duì)葛根素對(duì)腦缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用及具體作用機(jī)制并不明確。 本文擬建立大鼠中動(dòng)脈梗塞模型，觀察葛根素對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，探討其可能的作用機(jī)制。

1 材料

1.1 藥品、試劑與儀器

葛根素(中國生物制品檢驗(yàn)檢定所，批號(hào): 100818-20060)，用時(shí)用含丙二醇(0.02%)的生理鹽水溶解(pH7.0)，尼莫地平(民生藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào):100703)，2,3,5-三苯基四氮唑(TTC)，2' ,7'—二氯熒光素酶(DCFH-DA)等(購自Sigma 公司)，熒光分光光度計(jì)(上海精密儀器廠)，多功能酶標(biāo)儀(Thermo)。

1.2 動(dòng)物

Waster 大鼠，雄性，體重(200±20) g，南昌大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)分組

將大鼠隨機(jī)分成6 組，每組8 只，分假手術(shù)組，缺血再灌注模型對(duì)照組，給藥葛根素0.1、1.0、10mg/kg 組和尼莫地平1.0mg/kg 組。手術(shù)前15min 尾靜脈給藥，假手術(shù)組和模型組給予等量的生理鹽水。

2.2 局灶性腦缺血模型的建立

參照Zea Longa[2]法制作大鼠中動(dòng)脈閉塞模型，導(dǎo)致局灶性腦缺血1.5h 后，再灌注18h。 假手術(shù)組大鼠除不插拴線外，其他步驟同上，術(shù)中保持大鼠肛溫(36±1)℃，術(shù)后24h，觀察其神經(jīng)系統(tǒng)癥狀的變化。

2.3 梗死范圍和腦水腫的測定

評(píng)分結(jié)束后，立即斷頭處死大鼠，取出全腦，去除嗅球、小腦和低位腦干后稱取大腦濕重。

2.4 ROS 的含量及Caspace-3 活性測定

參照Chiarugi[3]的方法采用2' ,7'—二氯熒光素酶測定ROS 的產(chǎn)生。取大腦按重量體積比加入10 倍體積冰冷0.1 mol·L 磷酸鹽緩沖液勻漿后， 離心10min， 取上清液與終濃度為20μmol/L 的DCFHDA37℃下孵育30 min 后，置于冰浴中終止反應(yīng)檢測熒光強(qiáng)度。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS13.0 軟件完成統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，數(shù)據(jù)以±s 表示。組數(shù)的比較采用單因素方差分析，組間比較采用t 檢驗(yàn)，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

缺血1.5h 再灌注18h 后， 模型組大鼠出現(xiàn)明顯的神經(jīng)系統(tǒng)損傷癥狀。大鼠神經(jīng)癥狀評(píng)分明顯高于假手術(shù)組。與模型組相比，葛根素能顯著降低神經(jīng)癥狀評(píng)分，并呈劑量依賴性(P<0.05)。大腦中動(dòng)脈內(nèi)栓線阻斷法大鼠腦梗死范圍及含水量較假手術(shù)組明顯增加(P< 0.01)，與模型對(duì)照組相比，給藥劑量組和尼莫地平組均抑制腦梗死的形成，梗死范圍縮小，腦組織含水量減少。 葛根素給藥組可顯著抑制自由基的產(chǎn)生以及Caspase-3 的活性，并和尼莫地平組比較無差異性。

4 討論

本研究采用大腦中動(dòng)脈內(nèi)栓線阻斷法建立大鼠缺血/再灌注損傷模型，觀察葛根素對(duì)大鼠腦缺血/再灌注的影響，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示葛根素能顯著抑制腦缺血再灌注ROS 的增加， 從而減小梗死范圍并減輕腦水腫。 caspase-3 是細(xì)胞調(diào)亡過程中重要的效應(yīng)性蛋白水解酶。

［1］潘燕,張岫美.葛根素藥理研究近況[J].食品與藥品2005,(12):10-12.

［2］Zea Longa E L, Weinstein P R, Carlson S, et al.Reversible middle cerebral artery occlusion withoutcraniectomy in the rats[J]. Stroke, 1999, 20(1):84-91.

［3］Chiarugi PG, Pani E, Giannoni L, et al. Reactiveoxygen species as essential mediators of cell adhesion: the oxidative inhibition of a FAK tyrosine phosphatase is required for cell adhesion [J]. J Cell Biol, 2003, 161:933-944.