周 穎，高孟飛，朱慧勇

（1.浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院口腔頜面外科，浙江 杭州 310003；2.浙江省慈溪市人民醫(yī)院口腔科，浙江 慈溪 315300）

間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cell，MSC）是具有多向分化潛能的干細(xì)胞，能夠誘導(dǎo)分化為多種組織，包括骨、軟骨、脂肪、肌肉和肌腱等［1］。Owen和Friedenstein［2］最先報(bào)道從骨髓中分離得到一種能夠分化為多種組織的類纖維細(xì)胞——MSC［2］。骨髓是MSC的常見(jiàn)來(lái)源，其他來(lái)源還包括脂肪、軟骨、肌肉、羊水、肝臟、胎盤(pán)、臍血和牙髓等［3－4］。國(guó)際細(xì)胞治療協(xié)會(huì)提供了以下的最低標(biāo)準(zhǔn)用于定義人類MSC［5］：①標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)條件下的塑料貼壁細(xì)胞；②表面標(biāo)志物CD105、CD73和CD90表達(dá)陽(yáng)性，而缺乏CD34、CD45、CD11a、CD19和HLA－DR等造血干細(xì)胞的表面標(biāo)志物的表達(dá)；③特定的刺激下，細(xì)胞在體外可分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和軟骨細(xì)胞。MSC干性即多能性，即MSC能夠多向分化的能力［6］。MSC干性的維持依賴于細(xì)胞的自我更新，即在MSC非分化性增殖的同時(shí)抑制細(xì)胞的凋亡并保持其多向分化的潛能［7］。MSC的可獲得性、可擴(kuò)張性和可分化性使其在臨床治療和組織工程中具有廣泛的應(yīng)用前景［3］。而MSC的有效應(yīng)用有賴于了解并認(rèn)識(shí)維持干性的信號(hào)通路分子機(jī)制。

1 MSC的應(yīng)用前景

MSC的多向分化潛能和免疫抑制的特性使其在臨床上具有良好的應(yīng)用前景。已有大量研究［4－8］報(bào)道了 MSC在組織修復(fù)和再生方面的應(yīng)用。通過(guò)擴(kuò)增培養(yǎng)，MSC可以遷移到受傷的組織并調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，通過(guò)協(xié)同下調(diào)炎性細(xì)胞因子和促生長(zhǎng)因子及上調(diào)抗炎因子，從而有利于組織修復(fù)。在再生醫(yī)學(xué)方面，MSC在一定誘導(dǎo)條件作用下可以定向分化為中胚層和內(nèi)、外胚層組織細(xì)胞，許多組織工程產(chǎn)品，如人造皮膚、血管、骨、軟骨、肌肉、瓣膜、神經(jīng)、胰島、腎臟和肝臟等組織器官或細(xì)胞將相繼問(wèn)世，被植入患者體內(nèi)，用以恢復(fù)損傷、替代退行性組織器官以及改變遺傳缺陷性組織器官的功能［8－10］。此外，MSC具有顯著的免疫抑制特性，能夠抑制T細(xì)胞、NK細(xì)胞的功能，并調(diào)節(jié)樹(shù)突狀細(xì)胞的活動(dòng)［8］?；谄涿庖咭种铺匦?，MSC被用于在移植物抗宿主病和自身免疫病的治療［11－12］。

2 MSC的干性基因

應(yīng)用全球基因表達(dá)分析，Song等［6］通過(guò)對(duì)比3種間充質(zhì)譜系（成骨、成軟骨和成脂肪）的未分化、分化和轉(zhuǎn)分化的細(xì)胞，鑒定出一系列與維持MSC的多能性密切相關(guān)的干性相關(guān)基因。小干擾RNA基因失活研究［6］表明：肌動(dòng)蛋白絲相關(guān)蛋白（actin filament－associated protein，AFAP）、frizzled 7（FZD7）、dickkopf 3（DKK3）、蛋白酪氨酸磷酸酶受體F（protein tyrosine phosphatase receptor F，PTPRF）和RAB3B5種基因能促進(jìn)細(xì)胞存活并對(duì)骨髓MSC的分化有不同的影響［6］。有研究［13－15］還報(bào)道：一些胚胎干細(xì)胞標(biāo)記物，如Oct－4、SOX－2、Rex－1和 Nanog與 MSC的自我更新有關(guān)聯(lián)。Liu等［13］研究發(fā)現(xiàn)：Nanog和Oct4在 MSC中的過(guò)表達(dá)能夠促進(jìn)細(xì)胞的增殖并增強(qiáng)MSC集落形成，表明Nanog和Oct4的過(guò)表達(dá)與 MSC的干性維持有關(guān)聯(lián)。Roche等［16］通過(guò)特定的培養(yǎng)基在體外培養(yǎng) MSC發(fā)現(xiàn)：MSC中的Oct－4、Rex－1和Gata－4表達(dá)增高，認(rèn)為這種表達(dá)增高可能與 MSC向成骨、成軟骨分化的效率增高有關(guān)聯(lián)。Bmi－1（B cellspecific MLV intergration site－1）基因是polycom（PcG）家族成員之一，對(duì)于維持發(fā)育過(guò)程中的基因表達(dá)模式，維持體細(xì)胞和肝細(xì)胞的正常生命活動(dòng)均具有重要調(diào)節(jié)作用［17］。有研究［17－18］指出：Bmi－1基因可能是影響 MSC增殖能力的一個(gè)重要基因，包括骨髓MSC和臍血MSC。王芳等［19］認(rèn)為：Bmi－1基因正性調(diào)控人類胚胎骨髓來(lái)源MSC的增生，并防止衰老，當(dāng)細(xì)胞內(nèi)Bmi－1的轉(zhuǎn)錄水平下降時(shí)，細(xì)胞增生減慢，衰老細(xì)胞數(shù)量顯著增加。

3 MSC干性維持的信號(hào)通路機(jī)制

3.1 Wnt信號(hào)通路 Wnt信號(hào)在維持MSC的自我更新及其分化方面具有重要作用［20］。Wnts是高度保守的，富含半胱氨酸的分泌配體，到目前為止，已確定存在人類中的有19個(gè)。Wnt信號(hào)能夠激發(fā)至少4種不同的信號(hào)通路，最具特色是其經(jīng)典通路，該通路通過(guò)調(diào)節(jié)β－鏈蛋白（β－catenin）的穩(wěn)定，導(dǎo)致下游靶基因的轉(zhuǎn)錄［20］（圖1）。當(dāng)在無(wú) Wnt配體的情況下，β－catenin在糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase－3β，GSK－3β）、軸蛋白（Axin）和腺瘤性息肉蛋白（adenomatous polyposis coli，APC）協(xié)同作用下，被GSK－3β磷酸化，使β－catenin泛素化后通過(guò)蛋白酶體降解。但當(dāng)Wnt配體與Frizzled（Fz）受體和脂蛋白受體相關(guān)蛋白（lipoprotein receptor－related protein，LRP）輔助受體（LRP5／6）結(jié)合時(shí)，激活了胞質(zhì)蛋白（disheveled，DVL），抑制了GSK－3β對(duì)β－catenin的磷?；饔茫功拢璫atenin穩(wěn)定并累積增加，轉(zhuǎn)運(yùn)入細(xì)胞核中與T細(xì)胞因子和淋巴增強(qiáng)因子（TCF／LEF）結(jié)合，以調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄［20］。

圖1 經(jīng)典Wnt信號(hào)通路Fig.1 The classic Wnt signaling pathway

Wnt信號(hào)通路可以通過(guò)多種方式被抑制。Dikkopf－1（DKK－1）是一種 Wnt抑制劑，其通過(guò)與LRP5／6受體形成絡(luò)合物，從而促進(jìn)受體的降解［20－21］；分泌型卷曲相關(guān)蛋白（secreted frizzled－related protein，sFRPs）與 FZ 競(jìng)爭(zhēng) Wnt信號(hào)配體的結(jié)合，阻止其與受體的相互作用抑制Wnt信號(hào)［22－23］；pyrvinium為強(qiáng)效 Wnt信號(hào)抑制劑，其能通過(guò)減少細(xì)胞質(zhì)β－catenin，抑制其成骨和成軟骨，促進(jìn)MSC在體外的增殖［24］。然而，基于多種因素的影響，Wnt信號(hào)通道對(duì)MSC自我更新的作用也眾說(shuō)紛紜。Boland等［25］認(rèn)為：經(jīng)典的Wnt信號(hào)通路能夠維持MSC的非分化性增殖，而非經(jīng)典的Wnt信號(hào)通道能夠促進(jìn)MSC的成骨。但Qiu等［26］發(fā)現(xiàn)：在旁分泌或自分泌的方式下，經(jīng)典 Wnt信號(hào)抑制人類骨髓MSC的增殖。De等［27］認(rèn)為：低水平 Wnt信號(hào)通路能促進(jìn)MSC增殖，但高水平Wnt信號(hào)有相反的影響，并導(dǎo)致MSC生長(zhǎng)停滯。

3.2 骨形態(tài)發(fā)生蛋白（bone morphogenetic protein，BMP）信號(hào)通路 BMP是干細(xì)胞的重要調(diào)控者［28－29］，BMP作為一種多功能細(xì)胞因子，被鑒定為轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（transforming growth factor－β，TGF－β）超家族的成員［30］。BMP受體（BMPR）有2種亞型，分別為BMPR－Ⅰ和BMPR－Ⅱ，均為絲氨酸－蘇氨酸激酶受體。當(dāng) BMP與BMPR－Ⅱ結(jié)合時(shí)，BMPR－Ⅰ形成活化的四元復(fù)合物，然后磷酸化激活細(xì)胞內(nèi)的Smad蛋白，Smad受體與co－SMAD蛋白結(jié)合并轉(zhuǎn)位到細(xì)胞核中，充當(dāng)轉(zhuǎn)錄因子，與轉(zhuǎn)錄共活化劑或抑制劑作用以調(diào)節(jié)基因表達(dá)［1，7，29－30］。

Kolf等［14］認(rèn)為：在分子水平上，BMP與調(diào)節(jié)干細(xì)胞的分化過(guò)程相關(guān)。BMP信號(hào)通路通過(guò)BMP配體誘導(dǎo)或抑制MSC成骨的分化，也能誘導(dǎo)MSC成軟骨。Liu等［31］認(rèn)為：BMP－2能通過(guò)特定BMP的R－Smad蛋白與Dishevelled－1的相互作用以拮抗Wnt3a的信號(hào)從而抑制小鼠骨髓來(lái)源的MSC增殖，可能通過(guò)抑制BMP信號(hào)通道，提高M(jìn)SC的自我更新。雖然尚無(wú)大量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)證實(shí)BMP信號(hào)在MSC自我更新方面的作用，但有研究［28］表明BMP有利于小鼠和人胚胎干細(xì)胞的自我更新。也有研究［7］顯示：一種 Wnt信號(hào)抑制劑即分泌型卷曲相關(guān)蛋白2（secreted frizzledrelated protein 2，sRP2）可以通過(guò)抑制 Wnt和BMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，降低MSC凋亡并抑制MSC成骨和成軟骨分化，增加干細(xì)胞的自我更新和存活。

3.3 Notch信號(hào)通路

Notch信號(hào)通路是另一個(gè)參與調(diào)節(jié)細(xì)胞命運(yùn)的重要的途徑［32］。Notch本身是一種跨膜受體，當(dāng)Notch在相鄰細(xì)胞表面上與膜結(jié)合配體Delta或Jagged作用，Notch胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域（Notch intracellular domain，NICD）通過(guò)g－分泌從膜上被蛋白水解裂解，然后NICD轉(zhuǎn)位到細(xì)胞核中，配合并激活轉(zhuǎn)錄因子CSL。CSL招募共激活因子 Mastermind－like（MAML）等，并啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄的靶基因［1，32］。Notch的蛋白水解裂解是一個(gè)多步驟的過(guò)程，涉及γ－分泌酶復(fù)合物素－1和γ－分泌酶復(fù)合物素－2［32］。

有研究［32］表明：Notch在MSC分化世系中發(fā)揮重要作用，在小鼠軟骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞的細(xì)胞系中，高表達(dá)Notch配體（Delta－1）或NICD抑制了成骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞的分化，而Notch信號(hào)通路在脂肪細(xì)胞形成中的作用尤為復(fù)雜。微陣列基因表達(dá)分析研究顯示：在人MSC分化過(guò)程中，與Notch信號(hào)通路相關(guān)的基因表達(dá)量會(huì)隨著分化的進(jìn)行而改變。Westwood等［32］研究了Notch信號(hào)在調(diào)節(jié)MSC增殖和分化中的作用，結(jié)果顯示：在增殖的MSC中添加DAPT，能降低MSC的增殖能力并改變其分化潛能。DAPT是一個(gè)特定的γ－分泌酶抑制劑，能在體外抑制軟骨形成，但能誘導(dǎo)MSC向脂肪細(xì)胞的分化。也有學(xué)者［1］認(rèn)為：Notch信號(hào)可能會(huì)促進(jìn)成骨分化，但不一定促進(jìn)骨形成。在NICD過(guò)表達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠中，Notch成骨細(xì)胞特異性功能的增加會(huì)導(dǎo)致骨質(zhì)異常密集或硬化骨，而通過(guò)突變?chǔ)茫置谑筃otch信號(hào)缺失會(huì)導(dǎo)致遲發(fā)性、與年齡有關(guān)的骨質(zhì)疏松癥［1］。這些相互矛盾結(jié)果的出現(xiàn)可能是由于調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞分化的時(shí)間點(diǎn)不同或特定劑量的Notch激活和（或）其與Wnt和BMP信號(hào)通路的交互影響。因此Notch信號(hào)有可能通過(guò)影響MSC的分化而調(diào)節(jié)MSC自我更新。

3.4 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（fibroblast growth factor，F(xiàn)GF）對(duì)MSC干性的調(diào)節(jié) FGF是普遍應(yīng)用于促進(jìn)干細(xì)胞增殖的生長(zhǎng)因子，包括人胚胎干細(xì)胞、MSC以及其他特定組織的干細(xì)胞［33－34］。在 MSC培養(yǎng)過(guò)程中添加FGF能夠增加MSC的增殖速度和壽命，同時(shí)不改變其分化的潛能［34］。FGF信號(hào)在MSC的增殖和分化中起著至關(guān)重要的作用，在小鼠骨髓MSC中，F(xiàn)GF－2已被證實(shí)為一種強(qiáng)效有絲分裂原［35］。Ng等［3］采用轉(zhuǎn)錄組分析發(fā)現(xiàn)：TGF－β、血小板源性生長(zhǎng)因子（platelet－derived growth factor，PDGF）和FGF介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在MSC增殖中發(fā)揮重要作用。抑制上述任何信號(hào)均能降低MSC生長(zhǎng)，而這3個(gè)因素的組合，能使MSC在體外培養(yǎng)傳代至5代以上，表明這些信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑對(duì)MSC生長(zhǎng)有重要作用。

FGF家族由22個(gè)顯現(xiàn)為高度同源性的配體組成，有4個(gè)已知的 FGF受體［33－35］。有研究［33］顯示：FGF受體發(fā)起的主要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑是通過(guò)FRS2控制中心激活Ras2α／ERK信號(hào)通路，F(xiàn)GF－ERK軸能通過(guò)多種模式控制干細(xì)胞的干性。Coutu等［35］認(rèn)為：FGF－2能夠通過(guò) PI3K／AKTMDM2通路抑制細(xì)胞衰老并促進(jìn)其增殖以維持MSC干性。MDM2在Ser186細(xì)胞中被AKT／PI3磷酸化，導(dǎo)致MDM2的核轉(zhuǎn)位。在細(xì)胞核中，pMDM2增加針對(duì)p53基因的泛素連接酶活性，使后者被蛋白酶體降解，從而抑制細(xì)胞衰老。因此，F(xiàn)GF－2能夠保護(hù)MSC免于增殖誘導(dǎo)的細(xì)胞衰老并無(wú)限增殖，F(xiàn)GF－2在MSC的自我更新和干性的維持方面發(fā)揮了關(guān)鍵作用［35］。

3.5 Hedgehog（Hh）信號(hào)通路 Hh信號(hào)通路對(duì)胚胎干細(xì)胞的分化和生長(zhǎng)發(fā)育早期的骨骼形成有重要作用，已有研究［1］報(bào)道：Hh通過(guò)Runx2誘導(dǎo)成骨，且能聯(lián)合BMP－2對(duì)MSC成骨產(chǎn)生協(xié)同作用。Plaisant等［36］研究發(fā)現(xiàn)：骨髓MSC分化后導(dǎo)致Hh信號(hào)下降，刺激Hh信號(hào)并未對(duì)人MSC的增殖產(chǎn)生影響，而抑制Hh信號(hào)能夠降低人MSC的增殖和克隆形成（自我更新的一個(gè)指標(biāo)），闡明了Hh與MSC的增殖、自我更新和分化有關(guān)聯(lián)。

當(dāng)Hh結(jié)合到其受體Patched（Ptc）時(shí)，就啟動(dòng)了Hh信號(hào)。一經(jīng)結(jié)合，Ptc解除了其對(duì)跨膜蛋白Smoothened（Smo）的抑制作用。然后Smo進(jìn)入細(xì)胞的初級(jí)纖毛（對(duì)Hh信號(hào)有關(guān)鍵作用的細(xì)胞器），激活細(xì)胞內(nèi)的級(jí)聯(lián)而使轉(zhuǎn)錄因子Gli2穩(wěn)定，Gli2進(jìn)入細(xì)胞核誘導(dǎo)Hh目標(biāo)基因的轉(zhuǎn)錄，例如Gli1（一個(gè)Hh信號(hào)標(biāo)志）。Gli2是Hh信號(hào)的一個(gè)關(guān)鍵組分，Gli2的失活能抑制Hh信號(hào)通路［1，36］。

3.6 TGF－β信號(hào)通道 TGF－β及其家族成員，包括BMP、Nodal和激動(dòng)素被廣泛應(yīng)用于各種器官的生長(zhǎng)和維持，而干細(xì)胞在其中起著重要作用。TGF－β家族信號(hào)對(duì)胚胎干細(xì)胞干性的維持和自我更新具有重要作用。已有研究［29］報(bào)道：TGF－β1能誘導(dǎo)hMSC增殖。TGF－β1能通過(guò)誘導(dǎo) MSC的Smad3－依賴核積聚β－連環(huán)素，而β－連環(huán)素是MSC增殖的刺激物。Ng等［3］通過(guò)轉(zhuǎn)錄組分析提出：TGF－β、PDGF和FGF信號(hào)通路對(duì)MSC增殖有重要作用。這些信號(hào)通路的任一信號(hào)的抑制均能降低MSC增殖，而3種因子的結(jié)合能使MSC多代傳代，提示這些信號(hào)通路對(duì)MSC的生長(zhǎng)有重要作用。

3.7 磷酸酰肌醇－3－激酶（phosphatidylinositol－3－kinase，PI3K）信號(hào)通路 PI3K是1個(gè)包括許多脂質(zhì)激酶的家族，由1個(gè)調(diào)節(jié)亞基（P85）和1個(gè)催化亞基（P110）組成。當(dāng)相應(yīng)的配體和膜受體結(jié)合后，激活P85募集P110在細(xì)胞膜附近使其活化，進(jìn)而催化膜內(nèi)表面的磷酸激醇二磷酸（PIP2）生成磷酸激醇三磷酸（PI3P）。PI3P作為第二信使，激活A(yù)KT（PI3K的重要下游分子）和磷脂酰肌醇依賴性激酶1（phosphoinositide－dependent kinase 1，PDK1）。AKT是PI3K重要的下游分子，對(duì)于調(diào)控細(xì)胞的大小、生長(zhǎng)、增殖、存活和糖代謝均有重要作用。當(dāng)AKT激活后，磷酸化結(jié)節(jié)性硬化復(fù)合物2（TSC2），從而解除TSC1／2對(duì)Rheb的抑制，由Rheb活化雷帕霉素靶蛋白（target of rapamycin，mTOR）。mTOR激活下游靶蛋白，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和代謝進(jìn)行調(diào)控。第10號(hào)染色體丟失的磷酸酶（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten，PTEN）基因位于人染色體雜合體缺失高發(fā)區(qū)10q2313上，其可通過(guò)將PI3P去磷酸化為PIP2實(shí)現(xiàn)對(duì)PI3K負(fù)調(diào)節(jié)作用［37］。

近來(lái)研究［37－38］表明：PI3K通路對(duì)于維持胚胎干細(xì)胞存活、增殖和維持其分化發(fā)揮重要作用。對(duì)PI3K信號(hào)通路起負(fù)調(diào)控作用的PTEN缺失時(shí)，可導(dǎo)致MSC增殖速度明顯加快。除了對(duì)胚胎干細(xì)胞的增殖作用外，PI3K能促進(jìn)細(xì)胞的自我更新能力以維持胚胎干細(xì)胞的未分化狀態(tài)。此外，有研究［37］顯示：通過(guò)應(yīng)用mTOR特異性阻斷劑rapamycin阻斷該通路在MSC中的活化，觀察到MSC的成骨分化明顯受到抑制，表明PI3K－AKT－mTOR信號(hào)通路的活化在MSC的成骨分化方面發(fā)揮重要作用。

綜上所述，MSC干性維持的內(nèi)在分子通路機(jī)制仍存在爭(zhēng)議，其結(jié)果也尚無(wú)定論。這些可變性可能源于多種原因，如MSC的來(lái)源、相互作用的配體或蛋白質(zhì)的量、特定的時(shí)序和各種信號(hào)通道之間的相互影響等。因此，MSC內(nèi)在的分子機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

［1］Lin GL，Hankenson KD.Integration of BMP，Wnt，and Notch signaling pathways in osteoblast differentiation ［J］.J Cell Biochem，2011，112（12）：3491－3501.

［2］Owen M，F(xiàn)riedenstein AJ.Stromal stem cells：Marrowderived osteogenic precursors［J］.Ciba Found Symp，1988，136：42－60.

［3］Ng F，Boucher S，Koh S，et al.PDGF，TGF－βand FGF signaling is important for differentiation and growth of mesenchymal stem cells（MSCs）：transcriptional profiling can identify markers and signaling pathways important in differentiation of MSCs into adipogenic，chondrogenic，and osteogenic lineages ［J］.Blood，2008，112（2）：295－307.

［4］Salem HK，Thiemermann C.Mesenchymal stromal cells：Current understanding and clinical status ［J］.Stem Cells，2010，28（3）：585－596.

［5］Horwitz EM，Le Blanc K，Dominici M，et al.Clarification of the nomenclature for MSC：The International Society for Cellular Therapy position statement ［J］.Cytotherapy，2005，7（5）：393－395.

［6］Song L，Webb NE，Song Y，et al.Identification and functional analysis of candidate genes regulating mesenchymal stem cell self－renewal and multipotency ［J］.Stem Cells，2006，24（7）：1707－1718.

［7］Alfaro MP，Vincent A，Saraswati S，et al. sFRP2 suppression of bone morphogenic protein（BMP）and Wnt signaling mediates mesenchymal stem cell（MSC）self－renewal promoting engraftment and myocardial repair ［J］.J Biol Chem，2010，285（46）：35645－35653.

［8］SensebéL，Krampera M，Schrezenmeier H，et al.Mesenchymal stem cells for clinical application ［J］.Vox Sang，2010，98（2）：93－107.

［9］李建鑫，楊 亮，王文良.脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在組織工程中的應(yīng)用 ［J］.中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2010，14（7）：1274－1277.

［10］陳潤(rùn)良，劉 磊，裴英波.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在多學(xué)科領(lǐng)域的研究 ［J］.中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2009，13（6）：1143－1146.

［11］Trento C，Dazzi F. Mesenchymal stem cells and innate tolerance：biology and clinical applications ［J］.Swiss Med Wkly，2010，140：13121.

［12］壽培舜，黃 寅，蘇娟娟，等.間充質(zhì)干細(xì)胞免疫抑制機(jī)制及在疾病中的應(yīng)用 ［J］.細(xì)胞生物學(xué)雜志，2009，31（1）：15－20.

［13］Liu TM，Wu YN，Guo XM，et al.Effects of ectopic Nanog and Oct4overexpression on mesenchymal stem cells ［J］.Stem Cells Dev，2009，18（7）：1013－1022.

［14］Kolf CM，Cho E，Tuan RS.Biology of adult mesenchymal stem cells： regulation of niche，self－renewal and differentiation ［J］.Arthritis Res Ther，2007，9（1）：204.

［15］Greco SJ，Liu K，Rameshwar P.Functional similarities among genes regulated by Oct4in human mesenchymal and embryonic stem cells ［J］.Stem Cells，2007，25（12）：3143－3154.

［16］Roche S，Richard MJ，F(xiàn)avrot MC.Oct－4，Rex－1，and Gata－4expression in human MSC increase the differentiation efficiency but not hTERT expression ［J］.J Cell Biochem，2007，101（2）：271－280.

［17］顧建娟，韓素萍，李曉波.Bmi－1基因在臍血間充質(zhì)干細(xì)胞增殖中的作用 ［J］.臨床兒科雜志，2009，27（7）：673－677.

［18］劉 娜，李文磊，賈 鵬，等.BMI1基因表達(dá)與人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖關(guān)系的探討 ［J］.南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2008，28（6）：717－721.

［19］王 芳，王 旸，趙春松，等.Bmi－1基因?qū)θ伺吖撬栝g充質(zhì)細(xì)胞增殖和衰老的作用 ［J］.首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，32（1）：60－66.

［20］Etheridge SL，Spencer GJ，Heath DJ，et al.Expression profiling and functional analysis of Wnt signaling mechanisms in mesenchymal stem cells ［J］.Stem Cells，2004，22（5）：849－860.

［21］Glinka A，Wu W，Delius H，et al.Dickkopf－1is a member of a new family of secreted proteins and functions in head induction ［J］.Nature，1998，391（6665）：357－362.

［22］Leyns L，Bouwmeester T，Kim SH，et al.Frzb－1is a secreted antagonist of Wnt signaling expressed in the Spemann organizer［J］.Cell，1997，88（6）：747－756.

［23］Wang S，Krinks M，Lin K，et al.Frzb，a secreted protein expressed in the Spemann organizer，binds and inhibits Wnt－8 ［J］.Cell，1997，88（6）：757－766.

［24］Saraswati S，Deskins DL，Holt GE，et al.Pyrvinium，a potent small molecule Wnt inhibitor，increases engraftment and inhibits lineage commitment of mesenchymal stem cells（MSCs） ［J］.Wound Repair Regen，2012，20（2）：185－193.

［25］Boland GM，Perkins G，Hall DJ，et al.Wnt 3apromotes proliferation and suppresses osteogenic differentiation of adult human mesenchymal stem cells ［J］.J Cell Biochem，2004，93（6）：1210－1230.

［26］Qiu W，Andersen TE，Bollerslev J，et al.Patients with high bone mass phenotype exhibit enhanced osteoblast differentiation and inhibition of adipogenesis of human mesenchymal stem cells ［J］.J Bone Miner Res，2007，22（11）：1720－1731.

［27］De BJ，Wang HJ，Van BC.Effects of Wnt signaling on proliferation and differentiation of human mesenchymal stem cells ［J］.Tissue Eng，2004，10（3／4）：393－401.

［28］Varga AC，Wrana JL.The disparate role of BMP in stem cell biology ［J］.Oncogene，2005，24（37）：5713－5721.

［29］Watabe T，Miyazono K.Roles of TGF－βfamily signaling in stem cell renewal and differentiation ［J］.Cell Res，2009，19（1）：103－115.

［30］Celeste AJ，Iannazzi JA，Taylor RC，et al.Identification of transforming growth factor beta family members present in bone－inductive protein purified from bovine bone ［J］.Proc Natl Acad Sci U S A，1990，87（24）：9843－9847.

［31］Liu X，Tang Y，Qiu T，et al. A dishevelled－1／Smad1 interaction couples WNT and bone morphogenetic protein signaling pathways in uncommitted bone marrow stromal cells ［J］.J Biol Chem，2006，281（25）：17156－17163.

［32］Westwood C，Clements MO. The biology of human mesenchymal stem cells［J］.Stem Cell Repair Regen，2008，3：1－19.

［33］Gotoh N.Control of stemness by fibroblast growth factor signaling in stem cells and cancer stem cells ［J］.Curr Stem Cell Res Ther，2009，4（1）：9－15.

［34］Tsutsumi S，Shimazu A，Miyazaki K，et al.Retention of multilineage differentiation potential of mesenchymal cells during proliferation in response to FGF ［J］.Biochem BiophysRes Commun，2001，288（2）：413－419.

［35］Coutu DL，F(xiàn)rancois M，Galipeau J.Inhibition of cellular senescence by developmentally regulated FGF receptors in mesenchymal stem cells ［J］.Blood，2011，117（25）：6801－6812.

［36］Plaisant M，Giorgetti－Peraldi S，Gabrielson M，et al.Inhibition of hedgehog signaling decreases proliferation and clonogenicity of Human mesenchymal stem cells ［J］.PloS One，2011，6（2）：e16798.

［37］孟 艷，米蕊芳，趙春華.PI3K－AKT－mTOR信號(hào)通路在細(xì)胞分化中的作用 ［J］.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床，2007，27（12）：1404－1408.

［38］周睿卿，龔玉萍，邢宏運(yùn)，等.人胚胎干細(xì)胞Pten基因表達(dá)及PI3K／Akt／mTOR信號(hào)通路下游蛋白的磷酸化 ［J］.中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2011，15（49）：9207－9210.